• 塞内卡病毒A结构蛋白VP2诱导PK-15细胞自噬的研究

    王晶;郭禹;赵云环;顾文源;刘涛;翟刚;张帅;王丙雷;左玉柱;范京惠

    本研究在塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)诱导自噬的基础上,着重探究VP2蛋白在细胞自噬过程中的作用。构建VP2基因真核表达载体pcDNA3.1-VP2,将其转染至PK-15细胞,通过检测自噬蛋白和相关基因的表达情况,明确VP2蛋白对细胞自噬的影响。结果显示,本研究成功构建了pcDNA3.1-VP2真核表达载体,且SVA VP2基因在PK-15细胞中正常表达;与对照组相比,VP2蛋白显著上调LC3蛋白的表达水平(P<0.01);同时,自噬基因LC3、Beclin-1和ATG5转录水平均显著提高(P<0.01)。综上所述,本研究证实SVA VP2蛋白可诱导PK-15细胞自噬,且VP2蛋白与自噬蛋白和基因表达水平呈正相关,为进一步研究病毒感染与致病机制打下基础。

    网络首发时间: 2021-11-29 16:48:25[查看摘要][在线阅读][下载 626K]
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  • 腮腺炎病毒三种实验室常规灭活方法效果评价

    周杨子;朱贞;祝双利;刘莹;毛乃颖;崔爱利

    探究几种实验室常规消毒灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果,为实验室进行腮腺炎病毒消毒工作提供基础数据。本研究采用热灭活、紫外线灭活和化学试剂灭活三种方法对腮腺炎病毒进行灭活处理,灭活处理后腮腺炎病毒采用细胞培养技术进行病毒滴定,评估上述灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果。热灭活方法显示,腮腺炎病毒对热敏感,随温度升高和热灭活时间增长对腮腺炎病毒灭活有明显加强作用。65℃30min、60min和70℃10min、30min、60min可有效灭活腮腺炎病毒;紫外线灭活方法显示,紫外线照射15min,30min,60min均可有效灭活涂抹在平皿表面的腮腺炎病毒,但对毒株液倾倒导致的MuV液体不能达到完全灭活效果;化学试剂灭活方法显示,三氯异氰泡腾片、1%过氧化氢、3%过氧化氢和75%乙醇根据试剂说明书处理后病毒均能有效灭活腮腺炎病毒。三种灭活方法在一定条件下均能实现对腮腺炎病毒的灭活,可以作为实验室常规灭活腮腺炎病毒方法。建议使用65℃30min或70℃10min对腮腺炎病毒进行有效灭活。紫外线适用于对腮腺炎病毒进行表面消毒,但对液滴状病毒污染建议使用化学试剂进行有效灭活。

    网络首发时间: 2021-11-29 16:18:47[查看摘要][在线阅读][下载 433K]
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  • 血浆microRNA与HIV感染及治疗关系的研究

    闫新丽;李晓非;吕松琴;杨瑾;王玉明

    本次研究分析了Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)感染者血浆中miRNA表达特点,探讨了血浆miRNA作为HIV-1感染及治疗监测生物学标志物的潜在可行性。选取2017年7月-2018年7月期间在昆明市第三人民医院就诊的HIV-1感染未经抗病毒治疗患者50例作为未治疗组,HIV-1感染经抗病毒治疗患者50例作为治疗组,选取同期本院健康体检者50例作为对照组,应用qPCR技术检测三组对象血浆miR-29a、miR-122,miR-155的相对表达量。结果显示,与健康对照组相比HIV-1感染未经抗病毒治疗组血浆miR-29a、miR-155、miR-122表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);未治疗组与治疗组相比较血浆miR-29a、miR-155和miR-122表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。对未治疗组的研究显示,血浆miR-29a、miR-155表达水平与HIV-1RNA病毒载量呈正相关(P<0.05),miR-122与HIV-1RNA病毒载量无显著相关(P>0.05),miR-29a、miR-155表达水平与CD4~+T细胞计数呈负相关(P<0.05)。本研究提示HIV-1感染后血浆miRNA有变化,血浆miR-29a、miR-122,miR-155与HIV-1感染相关,可能是HIV-1感染的潜在生物学标志物。而抗病毒治疗可以诱导miR-29a、miR-155和miR-122表达降低,这些miRNA可能具有成为监测HIV-1感染抗病毒治疗效果观察指标的潜在价值。未治疗组血浆miR-29a、miR-155与HIV-1RNA呈正相关,表明其与HIV-1病毒复制相关。

    网络首发时间: 2021-11-23 09:40:37[查看摘要][在线阅读][下载 421K]
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  • 柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析

    田宇璇;魏真妮;安欢欢;吴杰;申硕

    对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性。WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性。EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1~VP4构成。EP和FP比例分别为41%和59%。CsCl密度分别为1.26 g/cm~3和1.34 g/cm~3,纯度分别为70.5%和96.3%。中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4VP1~VP4结构蛋白抗体不具有中和作用。免疫原性强弱为:FP>EP>VP1~VP4。本研究建立了CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性。对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义。

    网络首发时间: 2021-11-22 16:00:13[查看摘要][在线阅读][下载 719K]
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  • 冠状病毒膜蛋白的研究进展

    王虹苹;刘代顺;刘力

    新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)所引发的全球大流行已导致上亿人确诊,但至今尚无安全有效的治疗药物。膜蛋白(Membrane protein,M)作为冠状病毒颗粒中最丰富的结构蛋白,在同其它结构蛋白间相互作用、病毒粒子的组装释放和机体免疫应答方面有重要的作用,是抗病毒药物研发和疫苗设计的重要靶点之一。本综述重点介绍了膜蛋白的结构、生物学功能、先天及适应性免疫应答和相关靶向抑制剂,以期加强对新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)膜蛋白研究现状的全面了解,助力相关药物的研发和防治新策略的建立。

    网络首发时间: 2021-11-20 10:46:13[查看摘要][在线阅读][下载 475K]
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  • 克里米亚——刚果出血热动物模型与治疗方案的研究进展

    张刚;王璞;孔云逸;蔡玉荣;李勇

    克里米亚-刚果出血热(Crimean-Congo hemorrhagic fever,CCHF)是由蜱传CCHFV(Crimean-Congo hemorrhagic fever Virus,CCHFV)病毒引起的严重出血性疾病,致死率在30%左右。由于缺乏合理的动物模型,治疗方案不能得到有效的评估,因此目前没有针对CCHFV的特定药物,使得CCHFV成为一个危害较大的病原。本文将分析CCHF的临床发病症状,在结合动物模型的基础上,总结临床病例中CCHF的治疗方案,为未来CCHF疾病的防治提供新的思路。

    网络首发时间: 2021-11-15 14:49:59[查看摘要][在线阅读][下载 511K]
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  • 非洲猪瘟病毒研究进展:组学视角

    潘力;罗瑞;王涛;罗玉子;孙元;仇华吉

    非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种致死率可高达100%的猪烈性传染病。ASF的传播方式复杂多样,目前无商品化疫苗可用,仅能依靠检疫结合扑杀进行防控,严重威胁全球养猪及相关行业的健康发展。阻碍ASF疫苗研发的主要因素是ASFV的基因型众多、结构复杂,以及对ASFV致病和免疫逃逸机制的认识不足。本文从基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等层面多角度综述ASFV的生物学特性及其致病和免疫逃逸机制,以期揭开ASF这个“杀手”的神秘面纱,为ASFV的致病机制研究和ASF的防控提供参考。

    网络首发时间: 2021-10-22 09:24:53[查看摘要][在线阅读][下载 732K]
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  • 乙型肝炎病毒X蛋白上调环加氧酶2表达促进肝癌细胞增殖的实验研究

    元顺女;朴美花;金丹

    乙肝病毒X蛋白(Hepatitis B virus X protein,HBx)高表达与乙肝相关肝癌的发病密切相关,但HBx发挥促癌作用的机制并不清楚。环加氧酶2(Cyclooxygenase,COX2)具有促进肝癌细胞增殖的功能,乙肝相关肝癌中COX2的表达增加且与HBx呈正相关,提示上调COX2可能是HBx促进肝癌细胞增殖的分子机制。为了阐明HBx是否通过上调COX2促进肝癌细胞增殖,本实验培养了肝癌HepG2细胞并分为对照组、转染pcDNA3.1-HBx质粒的HBx组、转染NC siRNA的si-NC组、转染NC siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-NC+HBx组、转染COX2 siRNA及pcDNA3.1-HBx质粒的si-COX2+HBx组。检测细胞增殖活力OD490 nm的水平,COX2、B淋巴细胞瘤2基因(BCL2)、生存素(Survivin)的表达量,前列腺素E2(英文名,PGE2)的含量。实验结果显示,HBx组的OD490 nm水平,细胞中COX2、BCL2、Survivin的表达量,培养基中PGE2的含量均高于对照组;si-COX2+HBx组的OD490 nm水平,细胞中COX2、BCL2、Survivin的表达量,培养基中PGE2的含量均低于si-NC+HBx组。以上结果表明,HBx促进肝癌细胞增殖的作用部分由上调COX2表达所介导。本实验阐明了上调COX2在HBx促进肝癌细胞增殖中的作用,这为今后研究HBx发挥促癌作用的分子机制以及乙肝相关肝癌的发病机制提供了新思路。

    网络首发时间: 2021-08-27 15:18:28[查看摘要][在线阅读][下载 505K]
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  • 人疱疹病毒6型感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达的变化及生物学意义

    王锋存;刘军莉;双杰

    人疱疹病毒6A型(Human Herpesvirus 6A,HHV6A)感染与神经胶质瘤的发病有关,但具体机制尚不清楚。HHV6A感染能够增加miR-301a的表达,而miR-301a表达在胶质瘤发病中起促进作用。为了观察HHV6A感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达的变化及生物学意义,本研究培养了神经胶质瘤细胞株U87、U251、U373,HHV6A感染后检测了miR-301a及RUNX3(Runt-Related Transcription Factor 3,RUNX3)的表达;U87细胞在感染HHV6A的同时分别转染阴性对照(Negative Control,NC)miR、miR301a抑制物、NC siRNA、RUNX3 siRNA,检测细胞增殖、迁移、侵袭;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-301a靶向RUNX3。结果显示,HHV6感染的U87、U251、U373细胞中miR-301a表达增加、RUNX3表达降低且HHV6感染的U87中miR-301a上调、RUNX3下调幅度最大。在U87细胞中,与对照组比较,HHV6组增殖、迁移、侵袭增强,RUNX3表达降低;与miR-NC+HHV6组比较,miR-301a敲低+HHV6组增殖、迁移、侵袭减弱,RUNX3表达增加;与HHV6+miR-301a敲低+si-NC组比较,HHV6+miR-301a敲低+si-RUNX3组增殖、迁移、侵袭增强,RUNX3表达降低;经双荧光素酶报告基因验证,miR-301a靶向RUNX3基因mRNA 3'UTR。以上结果表明,HHV6A感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达增加,进而通过靶向抑制RUNX3促进细胞增殖、迁移、侵袭。本研究初步探究了HHV6A感染促进神经胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用及分子机制,进而为深入认识神经胶质瘤恶性生物学行为的调控机制及发病机制提供了实验依据,也为今后发现神经胶质瘤新的防治靶点提供思路。

    网络首发时间: 2021-08-23 17:07:52[查看摘要][在线阅读][下载 894K]
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  • 云南省首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1猪流感病毒病原学特征分析

    李梓;赵晓南;黄维娟;杨磊;成艳辉;谭敏菊;李希妍;刘佳;陈志肖;隗合江;伏晓庆;王大燕

    2020年云南发现了首例人感染G4基因型欧亚类禽H1N1(EA H1N1)猪流感病毒,针对分离到的A/YunnanMengzi/1462/2020(H1N1v)病毒分析其血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)氨基酸变异位点、生物学耐药、受体亲和力及抗原性变异特征,并对2020-2021年度季节性流感疫苗对该病毒的交叉保护效果进行评价。结果显示,EA H1N1猪流感病毒A/Yunnan-Mengzi/1462/2020(H1N1v)与世界卫生组织推荐的疫苗株A/Hunan/42443/2015(H1N1v)HA和NA氨基酸位点同源性分别为97.9%和97.4%;A/Yunnan-Mengzi/1462/2020(H1N1v)病毒对神经氨酸酶抑制剂敏感,以结合人流感病毒唾液酸受体α2,6为主,与疫苗株抗原性存在8倍以上差异。接种季节性流感疫苗的儿童、成人和老年组人群针对季节性流感疫苗株A/Guangdong-Maonan/SWL1536/2019(H1N1pdm)抗体滴度≥40者占比分别为80.0%、76.7%和63.3%;而对A/Yunnan-Mengzi/1462/2020(H1N1v)抗体滴度仅为13.3%、26.7%和6.7%。本研究提示接种季节性流感疫苗后产生的抗体对G4基因型EA H1N1病毒不能提供有效保护,该病毒与目前EA H1N1病毒疫苗株在氨基酸位点和抗原性上存在显著差异,并且保持了结合人流感病毒唾液酸受体的特性,研究结果提示需要构建新的疫苗株。

    网络首发时间: 2021-08-18 13:17:52[查看摘要][在线阅读][下载 560K]
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  • H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

    朱彤;商瑞;程凯慧;于志君;吴家强

    H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,在病原监测工作中得到了广泛应用。本研究以H13亚型禽流感病毒的HA基因作为靶基因,设计了一对特异性荧光定量PCR检测引物,通过特异性试验、敏感性试验等,建立了H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对海鸥粪便样品进行核酸检测。实验结果发现,该检测方法的灵敏度为1.60×100拷贝/μL;该检测方法对H1、H3、H5、H6、H7和H9等6个亚型的禽流感病毒无交叉反应;该检测方法的敏感性是常规PCR的10倍;海鸥粪便样品中H13亚型禽流感病毒的核酸检测阳性率为18.8%。我们建立的H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强等特点,该检测方法可用于大量临床样品的快速检测,为H13亚型禽流感病毒监测工作的顺利开展提供了技术支撑。

    网络首发时间: 2021-08-18 09:34:58[查看摘要][在线阅读][下载 498K]
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  • 牛病毒性腹泻病毒结构蛋白功能研究进展

    郗珊珊;张玲艳;贾伟娟;何云江;马德慧;王学理

    牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)基因组为单股正链RNA,编码4种结构蛋白(C、E~(rns)、E1和E2)和8种非结构蛋白(N~(pro)、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)。牛感染BVDV后可出现腹泻、流产、繁殖障碍、持续感染等症状,该病死亡率较高,对我国乃至世界养牛业均造成了严重影响。因此,本文就BVDV已确定的4种结构蛋白的功能进行了概括性总结,以期为BVDV的深入研究提供理论依据和参考。

    网络首发时间: 2021-07-24 16:14:49[查看摘要][在线阅读][下载 469K]
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  • 牛传染性鼻气管炎检测方法的最新研究进展

    何云江;张玲艳;贾伟娟;郗珊珊;王学理

    牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是一种由牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)引起的以病牛呼吸道病变为主要特征的传染性疾病,由于其严重的病理损害以及广泛的传播性,给养牛业造成巨大经济损失,因此建立快速、准确的检测方法对该病的防控尤为重要。本文主要对IBR的最新检测方法进行了简述和总结,以期为科学检测、鉴定IBR提供依据和思路。

    网络首发时间: 2021-07-24 13:25:54[查看摘要][在线阅读][下载 491K]
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  • 厦门市健康人群肠道病毒D68型血清流行病学调查

    林雨;朱瑞;吴圆圆;徐龙发;尹志超;杨宏伟;郑清炳;阙玉琼;叶江辉;何水珍;程通;夏宁邵

    肠道病毒D68型(EV-D68)是一种可引起急性呼吸道感染并诱发中枢神经系统疾病的小RNA病毒。开展相关血清流行病学调查,有助于了解病毒在人群中的感染水平,为制定有效防控策略提供科学依据。本研究为了解厦门市EV-D68的流行概况与流行病学特征,采用分层随机抽样的方式收集了2016年厦门市健康人群血清标本共515份,应用基于酶联免疫斑点检测技术的中和试验(Nt-ELISPOT)检测针对EV-D68流行株的血清中和抗体滴度。结果显示,血清样本中EV-D68中和抗体的总体阳性率为81.9%,中和抗体的总体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)为248.0。<1岁组、1~3岁组、4~6岁组、7~19岁组、20~39岁组、40~59岁组和≥60岁组的EV-D68中和抗体阳性率分别为42.2%、49.3%、71.9%、94.2%、98.5%、100%和100%,各年龄组之间差异有统计学意义(P<0.0001);各年龄组的中和抗体GMT分别为1∶39.8、1∶80.6、1∶133.2、1∶283.7、1∶253.3、1∶308.1和1∶405.0;男、女性别之间EV-D68中和抗体的总体阳性率(P=0.6388)和总体GMT(P=0.3524)均无统计学差异;各年龄组不同性别之间的中和抗体阳性率和GMT差异均无统计学意义(P>0.05);地理位置上,市区与郊区的EV-D68中和抗体阳性率没有显著差异(P=0.0986),市中心的中和抗体GMT略低于郊区(P=0.0069)。本研究表明,厦门市健康人群中EV-D68中和抗体阳性率和GMT随年龄增长呈上升趋势,年龄是影响EV-D68感染和流行的关键因素;并且,该地各年龄人群中存在EV-D68既往感染,幼龄儿童的抗体保护水平低,需要加强对易感人群的防控措施,防止出现暴发流行。

    网络首发时间: 2021-07-23 17:16:32[查看摘要][在线阅读][下载 557K]
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  • 高致病性冠状病毒感染时的固有免疫应答:精准治疗的潜在靶点

    张锦涛;梁子婷;董亮

    21世纪初,包括严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)在内的高致病性冠状病毒对人类健康构成了巨大威胁。随着新型冠状病毒肺炎(COVID-19)在全球的暴发,冠状病毒尤其是能够引起严重下呼吸道感染的高致病性冠状病毒(HPCoVs)再次引起了人们的关注。在HPCoVs不断出现的大背景下,阐明其致病机制并控制感染过程中的宿主免疫对抵抗病毒感染,避免过度反应至关重要。在病毒感染过程中,多种天然免疫信号在冠状病毒感染过程发挥关键作用。本文就近年来出现的HPCoVs特征及其感染过程中天然免疫的应答情况作一综述,借此探寻重症感染患者炎症反应旺盛的原因并解释其临床表现,为进一步探寻精准治疗的潜在靶点。

    网络首发时间: 2021-06-22 11:55:51[查看摘要][在线阅读][下载 546K]
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  • 冠状病毒感染与内质网应激研究进展

    田丽平;冯冠榕;鲁会军;肖朋朋;李楠;金宁一

    内质网(Endoplasmic reticulum,ER)是真核细胞细胞器的重要组成部分,主要负责蛋白质合成和翻译后修饰等过程,还参与调控了钙离子储存和脂类合成,具有重要生理功能。冠状病毒感染细胞后,在复制其遗传信息的同时也在合成大量病毒蛋白,造成未折叠/错误折叠蛋白堆积,进而增加内质网工作负担,诱发内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS),激活未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR),引起一系列信号级联反应,如诱导细胞凋亡等,进而影响病毒复制。本文就冠状病毒感染与ERS及UPR信号通路的研究进展做一综述,为新型抗冠状病毒药物的研发提供新视角。

    网络首发时间: 2021-06-15 16:38:34[查看摘要][在线阅读][下载 373K]
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  • 呼吸道合胞病毒感染不同气道上皮细胞的病变特点及易感性分析

    金鑫;杨丽;张梅;余本莉;尚鲁俊;杨斌;崔玉霞;范丽;余福勋;叶芝旭

    为了比较几种不同气道上皮细胞对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染后病变特点及易感性。采用RSV A2株感染Hep-2、A549、16HBE、BEAS-2B细胞后,显微镜观察细胞病变效应,免疫荧光检测RSV N蛋白表达及空斑实验测定细胞培养上清液中病毒滴度。结果显示RSV A2株感染Hep-2细胞后最早形成典型的合胞病变,A549细胞次之,16HBE及BEAS-2B形成病变的时间最晚。免疫荧光检测到RSV N蛋白表达特点与细胞病变特点一致。RSV A2在Hep-2上产生的病毒滴度最高,A549细胞次之,在16HBE上产生的病毒滴度最低。提示Hep-2、A549细胞对RSV具有高度易感性,以Hep-2最为敏感。而16HBE、BEAS-2B细胞对RSV感染不敏感,其中16HBE最不敏感。本研究可为选择合适的上皮细胞进行RSV相关研究奠定基础。

    网络首发时间: 2021-06-15 08:37:54[查看摘要][在线阅读][下载 858K]
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  • 4株鸽新城疫病毒的基因组序列与致病性分析

    裴育;孙雅丽;赵烨;张国中;薛佳

    本研究对从北京、天津以及山东地区发病鸽群中分离到的4株鸽新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)进行基因组测序和遗传进化分析,并进一步比较这些毒株对鸽子的致病性。研究通过特异性引物扩增4株鸽NDV的全长基因组序列后与GenBank上已登陆的所有鸽NDV毒株的序列进行遗传进化分析;通过病毒生物学特性的测定比较分离株的毒力;通过病毒感染1月龄肉鸽,检测分离株对鸽子的致病性。结果显示4株鸽NDV毒株均属于ClassⅡ类基因Ⅵb亚型病毒,其中Pigeon/China/BJ2018株、Pigeon/China/TJ2017株和Pigeon/China/BJ2013株属于VIb/4bii f亚型,Pigeon/China/SD2012株属于VIb/4bii d亚型。4株病毒与目前国内鸽NDV流行株属于同一进化分支,与鸡源经典疫苗株La Sota属于不同进化分支。对这四个毒株进行生物学特性测定,均为中等毒力毒株。4株病毒中,Pigeon/China/BJ2018株对1月龄肉鸽的致病性最强,通过肌肉注射途径攻毒后3d肉鸽开始表现临床症状,攻毒后第5d开始出现死亡,累计死亡率高达70%;剖检可见感染肉鸽气管有出血点、脾脏出血、肾脏苍白、十二指肠出血;病理组织学观察显示,感染鸽脑组织损伤明显;组织病毒载量检测显示,病毒在脑和脾脏中大量存在,在脑组织中的病毒载量最高。本研究系统分析了4株鸽NDV国内分离株的遗传进化特点和对鸽子的致病性,从中筛选出一株致病性较强的毒株作为疫苗检验强毒,对提高鸽新城疫的防控有积极意义。

    网络首发时间: 2021-05-11 11:32:26[查看摘要][在线阅读][下载 1132K]
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  • 探讨穿心莲内酯对HIV-1感染辅助受体CXCR4启动子作用机制的研究

    冯龙;郭文涛;李志慧;郑文锦;耿宇轩

    穿心莲内酯具有明显的抗病毒作用,对HIV-1具有明显的抑制作用,本研究探讨了穿心莲内酯影响CXCR4启动子活性的作用机制。首先构建双荧光素酶报告基因载体pFireRluc-CXCR4,并转染入人HEK293T细胞;利用CCK8法检测穿心莲内酯对人HEK293T细胞细胞毒性作用;双荧光素酶报告基因技术检测穿心莲内酯对CXCR4启动子活性的影响;MTT法检测穿心莲内酯对人T淋巴细胞Jurkat细胞活性影响;实时荧光定量PCR检测穿心莲内酯对人T淋巴细胞Jurkat细胞表面CXCR4 mRNA和蛋白表达的影响。PCR分别扩增了CXCR4启动子(777 bp)和Rluc(1997 bp)表达单元,通过测序和酶切鉴定双荧光素酶报告基因载体插入正确;穿心莲内酯作用于转染pFireRluc-CXCR4HEK293T细胞,双荧光素酶结果显示:穿心莲内酯能够下调CXCR4启动子活性,差异具有显著性(P<0.05)。穿心莲内酯作用于人T淋巴细胞Jurkat细胞后,qPCR和Western Blot结果显示:Jurkat细胞表面CXCR4 mRNA和蛋白表达降低。因此,穿心莲内酯能够影响CXCR4启动子活性,具有潜在的抗HIV-1的作用。

    网络首发时间: 2021-05-07 13:23:37[查看摘要][在线阅读][下载 938K]
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  • 轮状病毒感染患者外周血单个核细胞的转录组学分析

    李伯阳;赵艳玲;田玉玲;李慧莹;章青;李丹地;孙利伟;庞立丽;裴银辉;段招军

    轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1 619个DEGs;重症患者PBMC中有2 816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。

    网络首发时间: 2021-04-30 10:31:23[查看摘要][在线阅读][下载 1164K]
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  • 肌动蛋白及其结合蛋白在病毒感染复制中作用的研究进展

    刘红云;刘思华;王涛;王志云

    肌动蛋白是真核细胞中最丰富的细胞骨架蛋白,广泛参与细胞运动、维持细胞形态等生物学过程。研究表明肌动蛋白及其结合蛋白在病毒吸附、进入、组装、释放中发挥重要作用,尽管具体的分子机制还不清楚,但致力于探究肌动蛋白及其结合蛋白在病毒感染中的关键调节作用,可为病毒致病机理的研究,潜在抗病毒靶点的挖掘提供理论与实践基础。本文重点介绍肌动蛋白及其结合蛋白在病毒感染各环节中的关键作用。

    网络首发时间: 2021-04-23 09:31:34[查看摘要][在线阅读][下载 425K]
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  • 狂犬病疫苗接种者血清对狂犬病病毒中和能力研究

    霍明赫;许炜迪;冯华超;刘婷芳;衣惠鑫;刘艳;涂长春;马继红;冯烨

    狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒属成员(Lyssavirus)引起的人兽共患病,全球99%以上人狂犬病是由该属主要成员狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)引起的。近年来,我国RABV毒株多样性明显增多,但是现有狂犬病疫苗对不同毒株(特别是新出现的毒株)免疫保护效果尚不清楚。为研究目前商品化的人用狂犬病疫苗对RABV街毒株是否具备交叉免疫保护能力,本研究通过制备不同进化群、不同宿主来源的3株街毒株GDMMD16、NMALSF01和NeiMeng927A的细胞毒,分别对免疫过aG株和/或PM株狂犬病疫苗的23份人血清进行狂犬病荧光抗体病毒中和实验,结果发现所有血清对GDMMD16、NMALSF01和NeiMeng927A街毒株的中和效价均高于WHO推荐的标准(0.5IU/mL),表明上述2种商品化的人用狂犬病疫苗对3株RABV街毒株具有保护能力。

    网络首发时间: 2021-04-16 15:49:26[查看摘要][在线阅读][下载 425K]
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  • 4例新型冠状病毒感染病例鼻拭子、咽拭子病毒核酸检测和血浆抗体检测结果分析

    陈荣华;李勤光;赵敏;陈惠聪;康惠玲;柳丽娟

    新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测和血浆抗体检测是目前确诊新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的重要依据。为比较分析SARS-CoV-2感染病例鼻拭子与咽拭子的病毒核酸检测及其血浆病毒抗体检测结果,本研究采用实时荧光定量PCR方法,分别检测4例COVID-19确诊病例鼻拭子与咽拭子标本的SARS-CoV-2 ORF 1ab基因和N基因,并采用胶体金法检测血浆标本中的SARS-CoV-2 IgM和IgG抗体。结果显示,在4例COVID-19确诊病例中,鼻拭子中病毒ORF 1ab基因及N基因的核酸扩增信号均强于咽拭子,Ct值均低于咽拭子;血浆病毒抗体检测仅发现1例标本SARS-CoV-2 IgG单阳性。本研究结果提示,鼻拭子标本的病毒含量明显高于咽拭子标本,血浆病毒IgM和IgG抗体检测是COVID-19辅助临床诊断的有效工具。

    网络首发时间: 2021-04-08 17:02:37[查看摘要][在线阅读][下载 1162K]
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  • 狂犬疫苗糖蛋白ELISA定量分析方法的建立及验证

    叶珂;张志高;何春辉;方浩霖;林冠峰;卞论;许四宏;吴英松

    为狂犬疫苗生产质量控制建立简便、高效、精准的糖蛋白体外效力分析方法,研制适用于狂犬疫苗生产质量控制的狂犬病毒糖蛋白酶联免疫吸附(ELISA)定量分析试剂。采用双抗体夹心法建立狂犬病毒糖蛋白ELISA定量分析体系,优化反应各项参数后考核试剂性能。线性范围为1~180 mIU/mL,灵敏度为0.4497 mIU/mL,分析内变异系数为5.8%~8.2%,分析间变异系数为7.2%~14.4%。用自制试剂与National Institutes of Health(NIH)动物法平行检测10份疫苗相关样品,两种方法测定结果的相对系数r2为0.8943,相关性良好。自制ELISA试剂各项性能指标良好,且与NIH动物法检测结果相关性良好,有望推广用于狂犬疫苗生产质量控制。

    网络首发时间: 2021-04-08 15:47:19[查看摘要][在线阅读][下载 1298K]
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  • 宿主miRNA参与甲型流感病毒复制调控研究进展

    郭寿清;廖月姣;乔自林;王家敏;李倬;刘振斌

    流行性感冒(简称“流感”)是由流感病毒引起的急性呼吸道传染疾病,据世界卫生组织统计,流感每年可导致300万严重病例~500万严重病例,其中29万病例~65万病例死亡,给社会带来沉重的经济负担,是一个世界性的公共卫生难题。研究发现宿主细胞中存在多条信号通路参与对流感病毒感染的应答,越来越多的研究表明宿主miRNAs通过直接或间接的方式,在流感病毒感染、复制的不同阶段发挥着重要调控作用。本文综合分析了目前关于宿主细胞miRNA对流感病毒复制调控的研究进展,对不同的miRNA具体的调控机制进行系统地归类总结后发现:甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)的PB1、PB2、NA、NP、M1基因是宿主miRNA直接抑制病毒复制的主要靶基因,而在间接调控过程中宿主miRNA主要作用在RIG-I样受体信号通路,Jak-STAT信号通路和Toll样受体信号通路三条流感病毒应答信号途径中,以上发现将更有助于全面理解宿主miRNA对于流感病毒调控网络和宿主细胞与流感病毒的互作机制。

    网络首发时间: 2021-04-06 09:37:04[查看摘要][在线阅读][下载 522K]
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  • GICA和CLIA联合检测SARS-CoV-2特异性抗体的检测策略研究

    卢小岚;汪光蓉;牟代勇;杜琴;郭晓兰;王强

    评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33份,55例非SARS-CoV-2、其他病原体感染及自身免疫性疾病患者的血清55份,采用GICA和CLIA分别对血清SARS-CoV-2 IgM、IgG进行检测,并对结果进行分析。GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为100.0%、94.74%,与CLIA(92.86%和100.0%)比较没有差异(P>0.05);GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的特异性分别为70.91%、74.55%,明显低于CLIA的特异性(98.18%和89.09%)(P<0.01);两种方法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG结果具有一致性(P<0.001),Kappa值分别为0.434,0.406;ROC曲线分析发现,GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.855、0.846,明显低于CLIA(0.955和0.945)(P<0.05)。两种方法联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为92.86%、94.74%,特异性分别为100.0%、100.0%;ROC曲线分析显示,联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.964、0.974,高于两种方法的单独检测。GICA和CLIA联合检测能有效提高SARS-CoV-2 IgM和IgG的检测特异性,值得临床推广应用。

    网络首发时间: 2021-03-19 13:11:26[查看摘要][在线阅读][下载 493K]
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  • 麻疹疫苗研究新进展

    李焱;张勇;许松涛

    麻疹是由麻疹病毒引起的传染性很强的急性发热出疹性疾病,好发于5岁以下的儿童,近年来成年人发病有所增加。随着全球麻疹发病率升高,我国二胎政策放开,麻疹的预防更显重要,而疫苗免疫是麻疹控制和消除最重要的策略。本文就麻疹的流行病学、现行麻疹疫苗和在研疫苗的安全性、有效性和稳定性及疫苗应用面临的问题进行综述,为我国新型麻疹疫苗研发和麻疹预防提供基础性资料。

    网络首发时间: 2021-03-01 10:32:19[查看摘要][在线阅读][下载 577K]
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  • 猪流行性腹泻病毒单克隆抗体及其抗原表位的研究进展

    张志榜;彭维祺

    猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)引起的一种严重危害养猪生产的常见疫病。近年来,由于新的PEDV变异毒株的出现,许多国家的养猪业遭受了巨大的经济损失。PEDV也因此受到更多关注,关于PEDV的研究报道也日渐增多。基于国内外有关PEDV的最新研究进展,本文系统归纳和分析了PEDV结构蛋白和非结构蛋白单克隆抗体以及单克隆抗体识别的特异性抗原表位,以期为开发鉴别诊断方法和表位疫苗等提供信息。

    网络首发时间: 2021-03-01 09:09:00[查看摘要][在线阅读][下载 517K]
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  • 肠道病毒71型致神经元病变的机制研究进展

    陈天扬;刘正芸;王欢

    中枢神经系统感染是由病原体侵犯中枢神经系统引起的一类具有较高的发病率和死亡率的疾病。病毒是引起中枢神经系统感染的重要病原体之一,其中肠道病毒71型在继发神经系统症状的重症手足口病患儿中较为常见。EV71致神经元病变是其感染中枢神经系统的基础,阐明肠道病毒71型致神经元病变的机制,不仅可以促进基础病毒学研究,也能为抗病毒药物的开发提供思路,对临床肠道病毒71型致中枢神经系统感染的治疗提供支持。本文主要从肠道病毒71型侵入神经元的受体途径、损伤神经元的线粒体途径、诱导凋亡与自噬、感染胶质细胞后对神经元的旁观者效应、免疫病理机制以及病毒自身因素等多个方面,对肠道病毒71型致神经元病变机制展开综述。

    网络首发时间: 2021-02-26 09:16:54[查看摘要][在线阅读][下载 962K]
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  • 猪塞内卡病毒病原学研究进展

    陶倩;曹飞;彭珂楠;朱玲;徐志文

    2014年以来,巴西、美国、中国、泰国等多个国家相继暴发了塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)疫情,且流行范围呈扩大趋势,SVA逐渐成为研究和关注的热点。本文主要从SVA病毒蛋白结构功能、入侵机制、适应性免疫反应及免疫逃逸等方面对SVA相关病原学研究进行综述,以期为进一步开展猪SVA的致病机制研究以及疫苗研发提供帮助。

    网络首发时间: 2021-02-25 14:46:28[查看摘要][在线阅读][下载 547K]
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  • 抗GII.3型诺如病毒阻断型单克隆抗体的制备和鉴定

    霍玉奇;郑礼钧;刘金瑾

    诺如病毒(norovirus,NoV)是引起非细菌性急性肠胃炎的主要病原体之一。目前国内外还没有关于抗GII.3NoV组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)阻断型单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的报道,本研究制备了抗GII.3型NoV HBGA阻断型mAbs,并对这些抗体特性进行了初步的鉴定。采用纯化的GII.3型(GenBank登录号:KY767665)NoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)免疫BALB/c小鼠。将GII.3,GII.4(GenBank登录号,KF306214),GII.3S/GII.6P,GII.6S/GII.3P,GII.4-VP1/GII.3-P2主要衣壳蛋白(VP1)抗原或嵌合抗原作为包被抗原采用间接ELISA方法分别对细胞克隆株进行筛选,采用体外HBGA-VLP结合阻断实验对筛选的mAbs进行阻断活性鉴定,利用基于涵盖GII.3突环区(protruding domain,P区)的重叠多肽ELISA和western blot(WB)对阻断抗体结合位点进行特性分析。体外HBGA-VLPs阻断实验显示三株细胞分泌抗体具有阻断活性。挑选目标株制备腹水并对mAbs进行纯化。WB结果显示三株HBGA阻断型mAbs只识别非变性的GII.3 VP1蛋白;基于GII.3 P区重叠多肽的间接ELISA结果显示三株HBGA阻断型mAbs与被检测多肽无结合活性。本研究制备了具有HBGAs阻断活性的GII.3 NoV特异性mAbs,全部只识别非变性的GII.3 VP1蛋白,且结合位点位于GII.3 VP1 P2区。抗GII.3 NoV HBGAs阻断型mAbs的获得为后续研究GII.3 NoV的进化、感染机制和HBGAs结合位点提供了原材料。

    网络首发时间: 2021-02-24 13:56:42[查看摘要][在线阅读][下载 485K]
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  • 猪δ冠状病毒主要蛋白功能研究进展

    黄瑶;曹飞;李凤琴;谷思睿;王玉玲;岳健国;徐志文;周远成;朱玲

    猪δ冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)是冠状病毒科,δ冠状病毒属成员,为单股正链RNA病毒。由于猪δ冠状病毒是一种新型肠道冠状病毒(于2012年首次报道),目前对其研究较少,缺少商品化的疫苗。对疫病的防控无疫苗可用,一旦发病,会对猪场造成严重损失。本文综述了已有的关于猪δ冠状病毒结构蛋白、辅助蛋白、非结构蛋白等的特点和功能,以期为深入研究PDCoV致病机制和免疫机理提供参考,从而有助于其疫苗研发。

    网络首发时间: 2021-02-23 17:22:45[查看摘要][在线阅读][下载 489K]
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  • 引起一起暴发性急性胃肠炎疫情的埃可病毒型基因特征分析

    周健明;谢显清;方苓;金玉娟;曾汉日;李静媚;刘凤仁;李彩霞;李晖;刘渠;张勇;郑焕英

    埃可病毒18型(Echovirus 18,E18)属于B组肠道病毒(Enterovirus B,EV-B),是引起病毒性脑膜炎的重要病原体。对2019年4月广东省深圳市龙岗区一起急性胃肠炎疫情进行病原学鉴定及病原基因特征分析。此次疫情共有26名患者,均以发热、呕吐、腹泻、腹痛为主要症状。从其中18名病例采集了18份肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR、病毒分离(RD细胞)和半巢式聚合酶链反应法以鉴定病原,扩增病毒全长VP1区,测序并进行系统进化分析。结果显示,18份标本中11份肠道病毒核酸阳性,其中8份为E18。病毒分离得到2株病毒,从肛拭子标本直接扩增得到的7条E18全长VP1核苷酸序列,核苷酸相似性为100%,与GenBank中E18参考株的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.2%~96.4%和93.3%~99.3%;进化树显示,深圳龙岗E18分离株(GDSZ1902)归属由中国分离株组成的C2a进化分支,在其VP1蛋白中的底部环处发现一处特异的氨基酸变异(D200N)。从流行病学和病原学结果分析,E18是引起本次深圳市龙岗区急性胃肠炎疫情的主要病原,属于中国E18主要流行株的进化分支,这是我国首次发现E18引起急性胃肠炎疫情的报道。

    网络首发时间: 2021-01-04 15:53:20[查看摘要][在线阅读][下载 822K]
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  • EB病毒的发现:偶然之中的必然

    夏巍;赖永静;杜龙;王梦琳;王红;戢克铜;冯清源;唐安洲

    肿瘤作为威胁人类健康的第一大杀手,自发现伊始全球科研工作者对于其病因的求索就从未停止过。1958年英国外科医师Denis Parsons Burkitt在乌干达医院观察到一种独特类型的肿瘤,1964年Michael Anthony Epstein和Yvonne Barr利用电子显微镜在这种特殊肿瘤的活检组织细胞中观察到一种类似疱疹病毒颗粒的新病毒,并将其命名为EB病毒,这无疑为肿瘤的病因研究开启了一扇新的大门—病毒与肿瘤。EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)的发现是医学史上一项革命性的发现,如同许多其它伟大发现一样,EB病毒的发现之旅充满了曲折艰辛,亦不乏机缘巧合,例如Denis Parsons Burkitt与Michael Anthony Epstein具有决定性作用的会面,一个是外科医师,一个是动物病毒学家;一个在贫穷落后的非洲乌干达,一个在正值百花齐放、百家争鸣的英国伦敦,似乎是命运的安排才让两个看似毫不相干的人得以相见。这样的“偶然”还有很多。然而,当我们详尽的了解这趟不同寻常的旅程之后发现每一个巧合或是偶然背后都有着必然,这种必然来源于他们对真理的坚持,对细节的专注,以及敢于推陈出新的创新精神。探寻EB病毒的发现过程,不仅可以更加全面的了解EB病毒,丰富科研知识,更重要的是对前辈们优秀品质的继承和发扬。

    网络首发时间: 2019-03-15 10:50:34[查看摘要][在线阅读][下载 442K]
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  • 五株人冠状病毒NL63的基因型鉴定及S1 domain基因特征分析

    何佩;崔爱利;徐瑾;高立冬;余鹏博;孙凯旋;许文波;许晓光

    为阐明我国部分地区人冠状病毒(Human coronavirus,HCoV)NL63基因特征,本研究对2013年陕西省、2018年河南省和湖南省送检的5株HCoV-NL63核酸检测阳性的呼吸道样本进行HCoV-NL63基因型别鉴定及S1 domain基因特征分析。通过对HCoV-NL63棘突蛋白(Spike glycoprotein,S)基因的S1 domain区域进行基因扩增和序列测定,同时结合GenBank数据库下载的1983~2018年其他国家74条HCoV-NL63代表株序列和2007~2010年中国流行的12条HCoV-NL63代表株序列,构建基因亲缘性关系树,并对S蛋白的S1 domain区域进行核苷酸序列比对分析。结果提示全球HCoV-NL63流行株可划分为A和B两个基因型;A基因型可进一步划分为A0,A1,A2和A3四个基因亚型,其中本研究将GenBank中2008年中国流行的2株HCoV-NL63毒株划分为新基因亚型(A3);B基因型可进一步划分为B0,B1和B2三个基因亚型。A和B基因型的HCoV-NL63代表株序列在地域分布上无明显差异,但A基因型不同基因亚型的HCoV-NL63序列在年代分布上呈现出一定的时间进化趋势。在我国A和B基因型HCoV-NL63均已被检测到,但主要以A基因型流行为主,且主要集中在A1和A2基因亚型。不同基因型HCoV-NL63序列在S1 domain区域核苷酸和氨基酸序列上存在特征性差异。本研究通过对五株HCoV-NL63基因型鉴定及S1 domain基因特征分析,初步阐明了我国部分地区流行的HCoV-NL63基因型/基因亚型分布情况及基因特征,丰富了我国本土流行的HCoV-NL63基因数据库,为我国HCoV-NL63分子流行病学研究及分子检测和监测技术的改进和验证提供了基础基因数据。

    网络首发时间: 2019-03-08 15:54:24[查看摘要][在线阅读][下载 563K]
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