病毒学报

2022, v.38(03) 658-665

[打印本页] [关闭]
本期目录(Current Issue) | 过刊浏览(Past Issue) | 高级检索(Advanced Search)

水痘-带状疱疹病毒ORF7蛋白原核表达及单抗制备
Prokaryotic Expression of ORF7 Proteins of the Varicella-Zoster Virus and Preparation of Monoclonal Antibodies

尹婷;姜雪鸥;郭静;袁琳;范丽丽;李晴;陈子杨;常军亮;张夫坤;

摘要(Abstract):

水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZV)减毒活疫苗株(V-Oka)为混合毒株,仍具备感染和潜伏神经系统的能力,VZV第7个开放阅读框(Open reading frame7,ORF7)嗜神经因子敲除的毒株有望成为更安全的VZV减毒活疫苗株,本文重组表达VZV ORF7蛋白,制备其单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb),建立ORF7荧光抗体检测方法,为新一代ORF7敲除的VZV减毒疫苗的检测提供方法学基础。本研究以V-Oka株orf7为扩增模板,构建重组表达质粒pET-28a-ORF7,转化至E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后,镍离子柱亲合层析纯化表达蛋白,WB鉴定重组蛋白的活性,免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术制备抗VZV ORF7单克隆抗体,对单抗进行鉴定,选取一株稳定、特异、高效的单抗进行纯化并标记异硫氰酸荧光素(Fluorescein Isothiocyanate,FITC)。结果显示,重组ORF7蛋白以包涵体形式表达,分子量约29 kD,亲和纯化后纯度约为92.0%,盐酸胍复性蛋白可与VZV全病毒免疫小鼠血清特异性反应。采用杂交瘤细胞融合技术,筛选获得6株杂交瘤细胞,细胞上清单抗效价均达1∶51 200,6株单抗均属于IgG1亚类,抗原结合位点相同或相近,WB鉴定与VZV全病毒、原核及真核ORF7表达蛋白具有特异性反应。所制备FITC-4H7能够有效检出培养过程中ORF7蛋白,初步建立了病毒ORF7荧光抗体检测方法,为新型orf7基因敲除VZV减毒活疫苗毒株传代评价以及相关检测方法的建立奠定了基础。

关键词(KeyWords): 水痘-带状疱疹病毒;ORF7基因;原核表达;单克隆抗体;荧光抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation):

作者(Authors): 尹婷;姜雪鸥;郭静;袁琳;范丽丽;李晴;陈子杨;常军亮;张夫坤;

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004138

参考文献(References):

扩展功能
本文信息
服务与反馈
本文关键词相关文章
本文作者相关文章
中国知网
分享