病毒学报

2008, (03) 178-184

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逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)在H5N1禽流感病毒基因检测中的应用
Evaluation of Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification for Detection of Avian Influenza A H5N1 Virus

李启明;马学军;高寒春;周蕊;匡治州;侯云德;

摘要(Abstract):

建立一种便捷、灵敏的检测方法,即逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)用于H5N1亚型禽流感病毒基因检测。该技术使用特异对应于靶序列中8个基因区段的6条特异引物,在等温条件下进行核酸扩增反应。对51份实验感染动物及病毒培养标本的H5N1亚型禽流感病毒的HA、NA基因区进行了RT-LAMP检测,并以SYBR Green I为反应指示剂进行了逆转录环介导等温核酸扩增技术,对该反应进行实时监控,经对扩增产物做内切酶验证和测序分析,证明RT-LAMP技术的特异性;同时,用10倍系列稀释的RNA样品对该检测方法的灵敏度进行了测试。结果显示:利用RT-LAMP技术成功检测到H5N1禽流感病毒的HA、NA基因区,且RT-LAMP与Real-time PCR结果呈现很好的一致性。此方法的灵敏度可达到能检测10个拷贝RNA分子水平。因此,RT-LAMP技术应用于H5N1亚型禽流感病毒的快速检测是一种可行的方法。

关键词(KeyWords): H5N1亚型禽流感病毒;逆转录环介导等温核酸扩增技术;实时监控

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 科技部禽流感防治重大专项(2004BA519A47,2004BA519A34)

作者(Authors): 李启明;马学军;高寒春;周蕊;匡治州;侯云德;

参考文献(References):

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