病毒学报

2008, (03) 165-171

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人源中和性抗高致病性禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的研制
Generation of Neutralizing Recombinant Human Antibodies for Targeting Highly Pathogenic Avian Influenza A(H5N1) Virus

孙丽娜;刘琴芝;王敏;李川;李梓;胡晓芬;朱莉莉;李群;王世文;舒跃龙;梁米芳;李德新;

摘要(Abstract):

运用噬菌体表面呈现技术,从禽流感病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗H5N1禽流感病毒基因工程抗体文库。用纯化的人源H5N1禽流感病毒颗粒(A/Anhui/1/2005)及重组血凝素蛋白HA(A/VietNam/1203/2004)对Fab噬菌体抗体库进行富集筛选,成功地获得了抗禽流感病毒H5N1血凝素蛋白HA的人源单抗Fab段基因,并在大肠杆菌中获得有效表达。通过序列测定确定抗体轻重链型别,然后将阳性克隆的轻链和重链Fd段基因分别克隆入全抗体表达载体pAC-L-Fc后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达。用ELISA、IFA和流式细胞术对所获人源单抗的功能特性进行鉴定。结果表明,我们获得了2株特异性针对H5N1禽流感病毒血凝素蛋白HA而与甲1型和甲3型人流感病毒无交叉反应的人源单抗(AVFluIgG01、AVFluIgG03)。微量中和试验结果表明,除A/Guangdong/1/2006外,AVFlu-IgG01能够广泛地中和HA基因进化上属于Clade2的中国南方、北方及中部地区的H5N1禽流感病毒分离株,同时还对属于CladeⅠ的越南H5N1分离株A/VietNam/1203/2004具有中和活性;AVFluIgG03虽然不能中和A/VietNam/1203/2004,但是对属于Clade2的所有中国H5N1分离株均具有中和作用。人源中和性抗禽流感病毒H5N1基因工程全抗体的获得不仅为高致病性禽流感病毒H5N1的预防和治疗带来了希望,同时也为其疫苗研制提供了新的思路。

关键词(KeyWords): 禽流感病毒;噬菌体表面呈现;基因工程抗体;Fab抗体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家863计划(2006AA02A252);; 国家科技支撑计划(2006BAD06A15)

作者(Authors): 孙丽娜;刘琴芝;王敏;李川;李梓;胡晓芬;朱莉莉;李群;王世文;舒跃龙;梁米芳;李德新;

参考文献(References):

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