病毒学报

2006, (02) 131-136

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禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测方法的建立
Development of a Multiplex Real-time Reverse Transcriptase PCR Assay for Simultaneous Identification of Avian H5,H7 and H9 Hemagglutinin Subtypes

秦智锋;吕建强;肖性龙;钟安清;林镜中;黄运生;林庆燕;陈书琨;金显忠;林苗;刘胜利;

摘要(Abstract):

为了对致病性强、危害性大的H5、H7、H9亚型禽流感病毒进行同时集成化快速检测,通过对GenBank已报道的禽流感病毒的HA基因进行序列分析比较,设计了H5、H7、H9 3个亚型的特异性引物和分别用3个荧光基团标记的Taqman MGB核酸探针。将各个亚型引物与探针优化组合,筛选出能够同时检测禽流感病毒H5、H7、H9 3个亚型、且对Ct值和扩增效率影响不大的3组引物和探针,建立了三重实时荧光RT-PCR方法。该方法特异性好,在我们检测的样品中,没有发现假阳性和假阴性现象。同时敏感性高,检测禽流感病毒H5、H7、H9亚型的敏感性分别达到1 0001、000、500个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对禽流感H5、H7、H9 3个亚型的不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测3个病毒亚型。所建立的方法对保存的89个禽流感病毒样品进行检测,结果与经典检测方法(病毒分离鉴定、HA、HI)的符合率达100%。用上述建立的方法与鸡胚分离法同时对新鲜采集的4 000多份临床样品进行检测,两种方法的检测结果符合率为100%。

关键词(KeyWords): 禽流感;H5亚型;H7亚型;H9亚型;实时荧光RT-PCR;多重实时检测

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 本课题为深圳出入境检验检疫局科学研究与技术开发重大项目(SZK01-2004)

作者(Authors): 秦智锋;吕建强;肖性龙;钟安清;林镜中;黄运生;林庆燕;陈书琨;金显忠;林苗;刘胜利;

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