• 变铅青链霉菌对噬菌体φHAU3抗性与异常修饰之间的相互关系

    周秀芬,邓子新

    变铅青链霉菌异常修饰突变菌株ZXl同时丧失了对噬菌体HAU3的抗性,遗传学杂交结果揭示,DNA降解和对HAU3抗性这两种表型从不发生分离。以ZXl为宿主和链霉菌低拷贝质粒SCP2衍生的载体pIJ922为载体,构建了变铅青链霉菌JT46的基因组文库。在8000多个转化子中获得了一个能使ZX1对HAU3显示抗性的杂合质粒,命名为pIJ8310。它除了含有完整的pIJ922外,还携带了大约11kb的外源片段。Southern杂交证实,这个外源片段来源于JT46,但在ZX1中完全消失。利用转座子Tn4560对该克隆进行诱变定位,获得了中断噬菌体抗性基因表达的衍生质粒,并已证实Tn4560插入在一个2.5kb的BdmHI一EcoRI片段上。

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  • 昆虫病毒多角体蛋白对病毒粒子的异源包装

    黄永秀,齐义鹏,李晓锋

    昆虫病毒多角体蛋白对病毒粒子的异源包装黄永秀,齐义鹏,李晓锋(武汉大学病毒研究所,武昌430072)关键词杆状病毒,异源包装,多角体蛋白基因昆虫杆状病毒(BV)的多角体蛋白基因(ocu),是一个非必需极晚期高表达基因。目前,已用首稽尺蠖核型多角体病毒...

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  • Epstein—Barr病毒基因组在鼻咽癌组织中转录的特征

    陈鸿霖, 吴文翰

    对EB病毒基因在鼻咽癌活检组织细胞内的转录进行了较系统的探测。实验结果表明,EB病毒基因组在鼻咽癌活检组织中以附加体(Episome)形式存在,而其基因转录有如下特征:(1)EB病毒在所有鼻咽癌组织细胞中都表达EBNA-1,并且此基因转录产物由一个在BamHI-F区的启动子(Fp)驱动;(2);潜伏感染膜蛋白(Latentmembraneprotein,LMP和末端蛋白(Terminalprotein,TP)的转录只在约50%的活检组织中检测到,并且显示利用不同启动子的现象;(3)少部分的病例表达个别裂解基因;(4)在所有活检组织中,EB病毒基因组的BamHI-A区,表达一组功能未明的mRNA。通过对EB病毒基因在鼻咽癌细胞和其它受EB病毒感染的B淋巴细胞中表达情况的比较,本文对EB病毒基因在鼻咽癌组织细胞中的表达调控及其在癌变过程中的可能作用进行了讨论。

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  • 鼻咽癌组织中Epstein-Barr病毒潜伏感染膜蛋白基因片段的克隆及分析

    余升红,陈卫平,李扬,曾毅

    从两例鼻咽癌(NPC)病人的活检组织切片中,用PCR方法扩增出EB病毒潜伏感染膜蛋白(LMP)基因的ExonⅠ、IntronⅠ、ExonⅡ和IntronⅡ共500bp的片段,克隆入载体pGEM-3zf(+)′,测定核苷酸序列,其中有一个样品所测序列段与台湾株相似,另一个样品则与E95-8极为相似。由此可知,中国大陆南方的NPC组织中EBV-LMP基因存在不同的变异。

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  • 汉坦病毒抗原性差异及其基因分型

    柯正,宋干,杭长寿,霍子威,李盈盈

    用抗汉坦病毒单克隆抗体(McAb)对汉坦病毒B78株(来自病人血)和R178株(分离自褐家鼠)进行间接免疫荧光试验,以分析病毒的单克隆抗体反应谱,又用病毒免疫血清进行交叉中和试验,结果表明,两株病毒均具有双型(Ⅰ型/HTN型和Ⅱ型/SEO型)反应特征,但R178株基本上属于Ⅰ型。用汉坦病毒Ⅰ-Ⅳ型型特异性引物进行PCR扩增,B78株用Ⅰ型和Ⅱ型引物均得到特异性扩增,而R178株虽经重复扩增均未见特异性扩增片段。初步认为,B78株和R178株可能是发生在宿主转换(野鼠→家鼠)过程中介于Ⅰ型和Ⅱ型之间的过渡型变异株,而这类双型病毒在自然界中可能比较常见。这对阐明汉坦病毒的变异规律及广谱抗原性毒株的研制具有一定的理论和实际意义。

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  • 对我国温州地区脊髓灰质炎病毒分离株抗原性差异的研究

    信洪武,张礼璧,马文棋

    对脊髓灰质炎(脊灰)病毒抗原性监测的结果表明,不同年份分离的毒株,其抗原性存在型内差异。对抗SabinI活疫苗血清中和脊灰病毒能力的实验研究发现:(1)要有效地中和流行野毒株,必需高价抗Sabin免疫血清;(2)对同一地区同一年份流行的野毒株,中和能力不尽相同;(3)对同一地区流行的野毒株,中和能力随毒株年份的迁延而呈下降趋势。这可能有助于部份解释近年来在脊灰流行中,全程活疫苗免疫者病例有所增加的现象。

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  • DETECTION OF INFECTIOUS VIRUS AND VIRAL RNA IN THE MYOCARDIUM OF MICE INFECTED EXPERIMENTALLY WITH COXSACKIE VIRUS’B

    XiaomeiOuyang,HongyiZhang,TrevorA.BaystonLeonardC.Archad

    DETECTIONOFINFECTIOUSVIRUSANDVIRALRNAINTHEMYOCARDIUMOFMICEINFECTEDEXPERIMENTALLYWITHCOXSACKIEVIRUS’B3XiaomeiOuyang,HongyiZhan...

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  • 鼻咽癌Epstein-Barr病毒受体(EBVR/CR_2)基因的病毒结合区的序列测定

    邵细芸,陈主初,姚开泰

    Epstein-Barr病毒(EBV)进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究EBV与鼻咽癌(NPC)的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗EBV受体(EBVR/CR_2)单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中EBVR/CR_2的基因结构仍需研究。我们采用PCR扩增和不对称PCR直接测序法,首次检测了10例NPC及3例正常人胚鼻咽上皮(Humanembryonicnasoparyngealepithelium,HENE)组织样本中EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列。这一片段的DNA序列测定结果显示,人NPC细胞和正常HENE细胞的EBVR/CR_2的EBV结合区的编码序列,与正常人B淋巴细胞的EBVR/CR_2的相应序列完全相同,提示EBV感染鼻咽上皮细胞可能与EBVR/CR_2基因的EBV结合区结构改变无直接关系。

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  • 丙型肝炎病毒基因组部份NS5区蛋白基因在大肠杆菌中的表达

    曹经瑗,毕胜利,李景源,赵洪兰,刘崇柏

    在大肠杆菌中表达了丙型肝炎病毒基因组NS5区A段和部份B段蛋白。NS5A蛋白溶于水,可经过GST亲和层析柱纯化;NS5B蛋白不溶于水,经PBS-TritonX-100洗涤,尿素溶解后,通过离子交换柱纯化。经SDS-PAGE和Westernblot分析,NS5A蛋白除在57kD左右有条带外,还有不同程度的降解产物;NS5B蛋白主要在58kD左右有条带出现。为查明表达蛋白抗体在病人血清中的分布,取94份已经C33c或C22检测过的血清,用间接ELISA法查抗体,结果在71份C33c或C22阳性血清中,抗NS5A抗原的抗体检出率为64.8%;抗NS5B的检出率为57.7%;NS5A和NS5B蛋白抗体的总符合率为75.5%。暂时未发现单独抗NS5A或NS5B抗体阳性的血清。

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  • 肝癌病人血清中丙型肝炎病毒E2/NS1基因区cDNA的克隆及序列分析

    李刚,彭文伟,姚集鲁,吕凌

    从一个抗丙型肝炎病毒(HCV)阳性的肝细胞癌(HCC)病人血清中提取RNA,随机引物逆转录为cDNA后,用HCV特异引物进行聚合酶链反应。将扩增产物780bp插入pUC18和pUC19质粒载体,双脱氧链末端终止法测定其序列,与慢性丙型肝炎病人或携带者血清中的HCV序列比较,核苷酸同源性介乎69.23%-89.10%,氨基酸同源性介乎74,59%-90.57%、分析表明,此序列属于1组Ⅱ型。本文结果有助于了解HCV在HCC发生中的作用。

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  • 水稻矮缩病毒基因组第八号片段的cDNA克隆序列分析及在大肠杆菌中的表达

    李玮,李毅,张旭,储瑞银,陈章良

    从水稻矮缩病毒(RDV)中国福建分离物中分离出基因组第八号片段dsRNA,经逆转录合成cDNA,应用聚合酶链式反应技术扩增了编码区cDNA,并克隆在pGEM3Zf(一)载体上。该片段编码病毒外层外壳蛋白。对重组子进行限制性内切酶分析,亚克隆及全序列测定,结果表明,克隆片段全长135bp含有一个1266bp的阅读框架,编码一个含有421个氨基酸的多肽。与日本流行株相应片段比较,核苷酸和氨基酸水平的同源率分别为94.4%和97.9%。另外,我们所克隆的片段在距起始密码子532一534处较日本株系多了3个核苷酸,导致RDV中国福建分离物外层外壳蛋白比日本株多出一个氨基酸。将该编码区cDNA克隆到原核表达载体pTrcHisA上,经IPTG诱导,用RDV抗体进行蛋白Westem印迹分析表明,该基因在大肠杆菌中得到高效表达。这项工作为以后进一步开展水稻抗矮缩病基因工程,研究RDV与传毒介体昆虫之间的识别关系奠定了基础。

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  • 应用PCR技术检测细小病毒H-1DNA在人肝癌与裸鼠正常组织中复制的差异

    黄青山,马承武,郭兰萍,陈献华,罗祖玉

    应用PCR技术检测细小病毒H-1DNA在人肝癌与裸鼠正常组织中复制的差异黄青山,马承武,郭兰萍,陈献华,罗祖玉(上海复旦大学生理与生物物理学系,上海200433)关键词:自主性细小病毒H-1及MVM,聚合酶链式反应(PCR),人肝癌模型,抑瘤作用,肿...

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  • 杆状病毒DNA复制研究的某些进展

    彭建新,陈曲侯

    杆状病毒DNA复制研究的某些进展彭建新,陈曲侯(武汉华中师范大学昆虫学研究所,武汉430073)杆状病毒DNA是最大的环状DNA分子,其基因组大小在90─230kb之间,具有编码近百种蛋白质的能力。杆状病毒基因根据表达的时序性分为早期基因和晚期基因。...

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  • 国际干扰素及其他细胞素研究协会1994年年会简介

    侯云德

    国际干扰素及其他细胞素研究协会1994年年会简介侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052)国际干扰素及其他细胞素研究协会(InternationalSocietyforInterferonandCytokineResearch─IBI...

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  • 栗疫菌低毒力dsRNA与真菌病毒dsRNA的序列同源性

    梁平彦,全勇,周淑敏

    以我国栗疫菌[Cryphonectria(=Endothia)parasitica]低毒力菌株EpC140(广西)的[γ─ ̄32P]ATP末端标记dsRNA作探针,与5种真菌病毒dsRNA进行分子杂交。探针可与紫孢侧耳病毒(Pleurotussepidusvius)和小麦全蚀菌病毒(Gaeuman─nomycesgraminis·virus)的dsRNA杂交,但不能与黑曲霉病毒(Aspergillusnigervirus)、产黄青霉病毒(Penicilliumchrysogenumvirus)和稻瘟菌病毒(Pyriculariaoryzaevirus)的dsRNA杂交。当以低毒力菌株EpC32(云南)作探针时,结果相同。

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  • 抗原捕获聚合酶链式反应(AC-PCR)直接分型检测单纯疱疹病毒

    喻启桂,刘军连,秦克锋,汪美先,姜绍淳

    用抗单纯疱疹病毒(HSV)型共同性gC和gD羊克隆抗体(McAb),包被即Eppendorf管,捕捉HSV,同时加入3个引物:一个是HSV─1/HSV─2型共同性上游引物,另两个分别是HSV─1和HSV─2型特异性下游引物。借此建立了能直接分型检测HSV的抗原捕获聚合酶链式反应(AC─PCR)。HSV─1的扩增产物为477bp,HSV─2的为399bp两型病毒经AC─PCR扩增后产生分子量不同的DNA片段,致使AC─PCR能直接分型检测HSV。HSV─1和HSV─2扩增产物的克隆和序列分析表明,本方法特异性好。用本法检测Balb/c幼鼠中枢神经系统HSV感染的脑标本,进一步证实本方法不仅敏感、特异,而且分型准确。

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