- 曲林，辛毅，朱玉贤，陈章良
水稻矮缩病毒基因组第九号片段的ｃＤＮＡ克隆及序列分析曲林，辛毅，朱玉贤，陈章良（北京大学生命科学学院，蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京１ｌｌ８７１）关键词水稻矮缩病毒，第九号片段，序列分析水稻矮缩病毒（ＲｉｃｅＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ，ＲＤＶ）...
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 212k] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：443 ] - 彭宣宪，万雅各，张文军，黄作美，袁水斌，罗华平
采用捕捉法－ＥＬＩＳＡ检测１１５例甲型肝炎患者的ＩｇＭ、ＩｇＧ和ＩｇＡ特异性激活补体类循环免疫复合物（ＩｇＭ／Ｃ３－ＣＩＣ、ＩｇＧ／Ｃ３－ＣＩＣ和ＩｇＡ／Ｃ３－ＣＩＣ），其阳性率依次为４７．８％、５６．５％和４７．８％。分别与患者的性别、年龄、病程、丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）、黄疸指数（ＢＴ）、免疫球蛋白（Ｉｇ）和补体作比较后发现，ＩｇＭ／Ｃ３－ＣＩＣ与这些指标均无相关性；ＩｇＧ／Ｃ３－ＣＩＣ与ＡＬＴ、ＢＴ和ＩｇＡ有关，ＩｇＡ／Ｃ３－ＣＩＣ与病程、ＡＬＴ、ＢＴ和ＩｇＡ有关。结果提示，不同免疫球蛋白类型的激活补体类ＣＩＣ在甲型肝炎中的病理生理意义不同，其中ＩｇＧ和ＩｇＡ／Ｃ３－ＣＩＣ可能参与肝损害过程。甲型肝炎具有一定程度的免疫应答紊乱。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 218k] [下载次数：79 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：329 ] - 刘善虑，丛旭，詹美云
将我国河南株丁型肝炎（丁肝）病毒抗原的编码基因，克隆到分泌性原核表达载体ｐＥＴ－１２ａ的Ｔ７启动子下游，构建了保留和去除终止子（Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ）的两个表达载体ｐＥＴＤＡｇ和ｐＥＴＤＡｇ－１。将重组的表达质粒转化宿主菌ＢＬ２１，经ＩＰＴＧ诱导，成功地高效表达了丁肝病毒抗原（ＨＤＡｇ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ表明，分泌到细胞周间质和包涵体中的ＨＤＡｇ的分子量约为２７ｋＤ和２８ｋＤ。ＥＬＩＳＡ分析表明，分泌性ＨＤＡｇ的活性优于包涵体中的ＨＤＡｇ，分泌性ＨＤＡｇ的ＥＬＩＳＡ滴度高于１：３２０００比活性为１００００ＥＬＩＳＡ滴度／ｍｇ蛋白；包涵体ＨＤＡｇ的ＥＬＩＳＡ滴度可达１：２５６００，比活性为４５００ＥＬＩＳＡ滴度／ｍｇ蛋白。另外，利用本室建立的６株抗美国株ＨＤＡｇ单克隆抗体对该河南株重组丁肝病毒抗原（ｒＨＤＡｇ）进行了鉴定分析，表明它可与其中５株ＭｃＡｂ起特异性结合反应，而与另一株ＭｃＡｂ反应不好，推测可能与其ＨＤＡｇ的不同空间结构有关。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 379k] [下载次数：23 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：428 ] - 方肇寅，温乐英，晋圣瑾，赵章华
诺瓦克病毒是引起无菌性急性胃肠炎爆发的重要病原。１９９０年１０月至１９９１年１月从河南省急性腹泻门诊患儿便样中发现了诺瓦克样病毒。经电镜观察，病毒直径约为２８ｎｍ，病毒壳似由有结构的亚单位组成，进一步用诺瓦克病毒特异的寡核苷酸引物做逆转录一聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），检定为阳性。由ＰＣＲ产物测得的核苷酸序列与诺瓦克病毒原型株相应序列比较，同源性为７２％。以上结果证实，在我国腹泻病人中有诺瓦克样病毒感染。这对我国病毒性胃肠炎流行的防治研究具有重要意义。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 233k] [下载次数：233 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：221 ] |[阅读次数：373 ] - 石晓宏，杭长寿，宋干，梁米芳
将汉滩病毒（ＨＴＮＶ）Ｍ基因插入杆状病毒转移质粒ｐＡｃＹＭＩＢ多角体启动子下游附近，与Ｂｓｕ３６１酶切线性化的杆状病毒（ＡｃＶＥＰＡ）ＤＮＡ共同转染Ｓｆ９细胞，经空斑筛选获得了表达包膜糖蛋白（Ｇ１、Ｇ２）的重组杆状病毒（ＡｃｖＨａｎＭ）。经纯化ＡｃＶＨａｎＭＤＮＡ的Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ证实，Ｍ基因正确插入了杆状病毒基因组中。用抗糖蛋白混合单克隆抗体和病人血清做免疫荧光染色，观察到细小的特异性荧光颗粒，呈典型的核周分布。免疫荧光检测还证实，重组糖蛋白与９株抗糖蛋白单抗均起反应，提示重组糖蛋白的抗原位点分布与病毒毒粒糖蛋白相同或相似，用放射免疫沉淀（ＲＩＰ）分析仅显示Ｇ２带，且表达的Ｇ２分子量略小于病毒Ｇ２，这可能与两者的糖基化程度不同有关。研究还表明，重组糖蛋白具有细胞融合活性。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 521k] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：411 ] - 崔治中，段玉友，王永坤，朱国强
以兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）德国株基因组ｃＤＮＡ的部分片段为探针，与中国的ＮＪ株和ＬＷ株ＲＨＤＶ的基因组做分子杂交，结果表明，它们属于同一病毒。将中国株ＲＨＤＶ感染兔肝组织，用硫氰酸胍－氯化铯超速离心法提取的核酸沉淀，或将提纯病毒悬液经苯酚抽提法获取的核酸沉淀，在用ＲＮａｓｅ或ＤＮａｓｅ，消化后直接做Ｄｏｔｂｌｏｔ，或将相应样品做ＰＣＲ后再做Ｄｏｔｂｌｏｔ或Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ，再与经Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｃＤＮＡ探针做分子杂交，结果证明，在中国的二个不同来源的兔出血症病料中，与德国株ＲＨＤＶ基因组ｃＤＮＡ同源的病毒是一种ｓｓＲＮＡ病毒。本文还讨论了在中国兔出血症病料中存在另一种ＤＮＡ病毒的可能性。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 476k] [下载次数：74 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：326 ] - 崔静，周顺伍，郭玉璞
以传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＮ）中国毒株ＣＪ－８０１ｂｋｆ的基因组Ａ片段ｄｓＲＭＡ为模板，经反向转录和ＰＣＲ扩增，克隆了保护性抗原ＶＰ２ｃＤＮＡ基因。经Ｓａｎｇｅｒ法测序，确定了ＶＰ２ｃＤＮＡ基因有１４８４个核苷酸，推测了ＶＰ２氨基酸的顺序，与已报导的６株ＩＢＤＶ毒株ＣｕＩ、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２－７３、ＳＴＣ和ＶａｒｉａｎｔＥ的ＶＰ２区做了比较，证明：克隆的ＣＪ－８０１ｂｋｆＶＰ２ｃＤＮＡ基因是全长的，含有正确的起始密码子ＡＴＧ；ＣＪ－８０１ｂｋｆ与毒株Ｃｕｌ和ｐＢＧ９８同源性最高；ＣＪ－８０１ｂｋｆＶＰ２高可变区内两个亲水区的氨基酸顺序与ＣｕＩ、ＰＢＧ９８、５２／７０、００２－７３和ＳＴＣ完全相同；７肽区内第三个丝氨酸残基则变异为精氨酸。这些结果提示，中国ＣＪ－８０１ｂｋｆ毒株应属标准血清Ｉ型ＩＢＤＶ弱毒株。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 358k] [下载次数：50 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：22 ] |[阅读次数：346 ] - 容敏清，阎辉，阮力，侯云德，何南祥，朱既明
利用ＰＣＲ方法对单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白Ｄ（ＨＳＶ－２ｇＤ）基因进行了修饰，在其５＇端删去约５００ｂｐ的非编码区，仅保留ＡＴＧ上游７个ｂｐ。将修饰后的ＨＳＶ－２ｇＤ基因插入到带有痘苗病毒天坛株ＴＫ基因区段的痘苗表达质粒ｐＪＳＡ１１７５，置于痘苗病毒Ｐ７．５ｋ早／晚期启动子控制下。将此重组质粒用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法转染已受野型ＴＫ￣＋痘苗病毒天坛株感染的ＴＫ￣－１４３细胞，通过同源重组机制和标志基因ＬａｃＺ产物的蓝斑显色作用，以及ＢｕｄＲ试剂对ＴＫ表型的选择压力，筛选出整合有ＨＳＶ－２ｇＤ基因的重组痘苗病毒。Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交表明，ＨＳＶ－２ｇＤ基因已正确地插入痘苗病毒ＴＫ基因区内；间接免疫荧光检测显示，ＨＳＶ－２ｇＤ蛋白已得到有效表达，且主要分布于细胞膜。重组病毒免疫家兔可产生明显的抗ＨＳＶ－２ｇＤ中和抗体。用重组病毒免疫小鼠，３周后可使９４％（１７／１８）的小鼠对抗ＨＳＶ－２的致死量攻击，表明重组病毒具有明显的免疫保护作用。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 395k] [下载次数：42 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：418 ] - 段震峰，滕智平，曾毅
本文通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从整合有人Ｔ细胞白血病病毒Ⅰ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）的ＭＴ－２细胞株中，扩增出ＨＴＬＶ－Ｉ外膜蛋白（ｅｎｖ）的全基因（１．４５ｋｂ），并成功地克隆入ｐＵＣ１９载体，构建成ｅｎｖ基因克隆ｅｎｖ／ｐＵＣ１９．利用原核高效表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，在大肠杆菌中有效地表达了与谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）融合的ｅｎｖ羧基末端抗原的重组蛋白，融合基因的转录由ｔａｃ启动子调控。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，有一约５２ｋＤ的目的蛋白带，表达量占菌体总蛋白的１０％；ＷｅｓｔｅｒＮｂｌｏｔｔ及ＥＬＩＳＡ结果显示，表达产物能与ＨＴＬＶ－Ｉ多抗血清结合。本研究为研制ＨＴＬＶ－Ｉ的诊断试剂及进一步了解ｅｎｖ的免疫学和生物学性质打下了基础。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 378k] [下载次数：64 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：337 ] - 张燕，张颖，张志芳，吴祥甫
前文曾报导过家蚕核多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）Ｐ１０结构基因和启动子全顺序￣［１］。经突变法消除起始码ＡＴＧ，并分离上游－２３０位－＋１位含完整启动子片段，在此Ｐ１０启动子片段后拼接报导基因（昆虫荧光素酶基因，Ｌｕｃ，Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ）构建成表达质粒ｐＢｍｐ１０－Ｌｕｃ。质粒ｐＢｍｐ１０－ＬｕｃＤＮＡ转染有野生型ＢｍＮＰＶ感染的家蚕Ｂｍ－Ｎ细胞可测出Ｌｕｃ基因的瞬时表达。由启动子５’端（－２３０位）向Ｌｕｃ基因节律缺失删节，获得缺失至－１３５、－１１１、－３８位的各质粒（ｐＢｍｐ１０－１３５Ｌｕｃ、ｐＢｍｐ１０－１１１Ｌｕｃ、ｐＢｍｐ１０－３８Ｌｕｃ）。功能检测证实除ｐＢｍｐ１０－３８Ｌｕｃ外，其它质粒都有Ｌｕｃ基因瞬时表达，说明－３８－－１１１位结构顺序是Ｐ１０启动子功能所必须的。在苜蓿尺蠖核多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）感染的ＢｍＮＰＶ非敏感细胞Ｓｆ－９中也得到相同的结果，说明ＢｍＮＰＶＰ１０启动子和ＡｃＭＮＰＶＰ１０启动子的调节因子可能是相似的。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 264k] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：429 ] - 于嘉林，晏立英，冯继东，李大伟，蔡祝南，刘仪
以采自河南的真菌传小麦花叶病毒（ＦＷＭＶ－Ｃ）为材料，抽提病毒ＲＮＡ，合成互补ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）。对杂交筛选所得ｃＤＮＡ克隆进行亚克隆及序列分析，结果表明，亚克隆ｐＧＳＩ含有一个长度为８９１个核苷酸的不完整开放阅读框架（ＯＲＦ）和长度为２５８个核苷酸的３＇末端非编码区（ＮＴＲ），并带有Ｐｏｌｙ（Ａ）尾序。此段序列与大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ）及法国报道的一种小麦梭条花叶病毒（ＷＳＳＭＶ－Ｆ）的ＲＮＡ－１３＇末端分别具有６７．６％和６９．９％的同源性。由所测序列编码区（１－８９１ｎｔ）可推导产生２９６个氢基酸，并与ＷＳＳＭＶ－Ｆ及ＢａＹＭＶ外壳蛋白氨基酸序列分别具有７５．９％和７１％的同源性。此结果表明，ＦＷＭＶ－Ｃ为另外一种不同于ＷＳＳＭＶ－Ｆ的大麦黄花叶病毒组（Ｂａｙｍｏｖｉｒｕｓ）病毒，所测基因组片段应为ＲＮＡ－１３＇末端序列，其中可能包括了病毒全长外壳蛋白编码区域。
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 386k] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：41 ] |[阅读次数：372 ] - 纪志武, 李宝民，曾毅
Ｅｐｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒，ＥＢＮＡ２短暂表达，类风湿关节炎
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 328k] [下载次数：71 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：371 ] - 邹正升，王升启，施红，韩凤连，陈菊酶，马立人，雷周云，王玉芝
利用ＰＣＲ技术体外转录丁型肝炎病毒基因组ＲＮＡ中核酶区的ｃＤＮＡ邹正升，王升启，施红，韩凤连，陈菊酶，马立人，雷周云，王玉芝关键词丁型肝炎病毒，核酶，体外转录，聚合酶链反应丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）是目前已知的动物病毒中唯一具有环状单股负链的ＲＮＡ病毒。...
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 294k] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：392 ] - 项瑜，杨兰英，彭学贤，魏宁生
马铃薯Ｙ病毒６ｋＤ和ＮＩａ基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建项瑜，杨兰英，彭学贤，魏宁生关键词马铃薯Ｙ病毒，６ｋＤ基因，ＮＩａ基因，序列分析，植物表达载体马铃薯Ｙ病毒（ＰｏｔａｔｏｖｉｒｕｓＹ，ＰＶＹ）是马铃薯Ｙ病毒组（Ｐｏｔｙｖｉｒｕｓｇｒ...
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 277k] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：726 ] - 王家旺，齐义鹏
杆状病毒早期基因的结构与功能王家旺，齐义鹏（武汉大学病毒学研究所武汉４３００７２）在感染的昆虫细胞中，杆状病毒基因的表达和ＤＮＡ的复制是级联式的￣［１，２］。用受染细胞脉冲标记的特异性蛋白、蛋白质合成抑制剂（如放线菌酮）和ＤＮＡ复制抑制剂（如Ａｐｈｉ...
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 339k] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：355 ] - 陈纯贤，万蜀渊
用光生物素标记Ｆ２０探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤，万蜀渊（武汉华中农业大学柑桔研究所４３００７０）关键词柑桔裂皮病类病毒，Ｆ２０探针，光生物素，斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强，也广泛用于病毒和类病毒的检测。最初，一般采用放射性同位素...
1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 206k] [下载次数：39 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：322 ] 下载本期数据