- 唐发清,唐敏,夏林庆,顾焕华,王海,邓锡云,曹亚
为探讨EB病毒潜伏膜蛋白 (LMP1)介导细胞凋亡和抑制细胞凋亡双重效应的机制 ,采用已建立的受四环素调控的LMP1表达的鼻咽癌细胞系 (pTet on LMP1HNE2 ) ,定量诱导 pTet on LMP1HNE2细胞LMP1动态表达 ,分别与含有细胞凋亡相关基因为主的AtlasapoptosiscDNAexpressionarray膜杂交 ,分析LMP1介导的表达差异基因。结果表明 :①LMP1介导细胞凋亡和抑制细胞凋亡的基因的表达 ,同时上调或下调某些与细胞凋亡相关基因的表达 ;②LMP1不仅介导细胞凋亡和抑制凋亡基因的表达 ,同时介导细胞分裂分化和增殖基因的表达 ,LMP1同时介导功能不同甚至功能相反的基因表达 ;③LMP1介导的基因表达与其表达持续时间和表达水平相关 ,不同表达水平和不同表达时间介导的基因表达谱不同。因此 ,LMP1具有介导细胞凋亡和抑制凋亡基因表达的双重生物学效应 ,同时介导细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡等多种生物学效应基因的表达 ,从而参与细胞的癌变。
2001年02期 97-102页 [查看摘要][在线阅读][下载 93k] [下载次数:46 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] |[阅读次数:321 ] - 张晓实,宋坤华,麦海强,张如华,陈剑经,曾益新
为了分析广东地区鼻咽癌病人和非鼻咽癌病人携带的Epstein Barr病毒 (EBV)潜伏膜蛋白 1(LMP1)基因多态性 ,探讨LMP1基因羧基端缺失 30个碱基的EBV是否与华南地区鼻咽癌高发有关。为此收集了初治的 10 7例鼻咽癌病人和 10 6例非鼻咽癌肿瘤病人的漱口液 ,用巢式PCR扩增LMP1羧基端 ,观察缺失型LMP1的构成比。同时 ,测序分析缺失型LMP1编码区序列 ,了解缺失型LMP1多态性与鼻咽癌的关联度。结果 :在 5 0 %的样品中可检出LMP1基因 ,缺失型LMP1在鼻咽癌病人和非鼻咽病人的构成比相似 ,约占 70 % ,原型和缺失型LMP1混合感染少见 (0~ 6 % )。另外 ,广州地区的缺失型LMP1序列与上海、台湾、香港地区的缺失型LMP1基因高度同源 ,鼻咽癌病人是和非鼻咽癌病人携带的缺失型LMP1基因序列基本相同。此结果表明 ,广州地区流行的LMP1基因羧基端缺失 30个碱基的EBV株 ,漱口液中检测出的缺失型与原型LMP1构成比约为 7:3,在鼻咽癌病人和非鼻咽癌病人此分布情况相似。
2001年02期 103-107页 [查看摘要][在线阅读][下载 77k] [下载次数:130 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:285 ] - 姚智慧,王维新,董关木,俞永新,杨世龙,祝晓春,刘文雪,马小奇,李萍,孙小慧
为测定我国肾综合征出血热疫苗生产株LR1株的全基因组序列 ,了解该株分子基础 ,从提取的细胞总RNA逆转录PCR扩增 ,产物纯化后克隆T载体纯化后测序 ,结果证明 ,LR1株全基因组序列由L6 5 33、M36 16、S片段的16 92个核苷酸组成 ,依各自读码框架分别编码 2 15 1、1135、42 9个氨基酸。序列同源比较分析表明 ,LR1毒株与国外HTN型毒株高度同源 ,属同一亚型 ,尤其与HTN代表株 76 - 1183个片段同源率高达 99 3%~ 99 8% ,而与国内的HTN型病毒差异较大 ,同源率仅为 79 4%~ 84 6 %。氨基酸比较也显示了同样的结果。
2001年02期 108-111页 [查看摘要][在线阅读][下载 39k] [下载次数:65 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:494 ] - 吕新军,付士红,杨益良,何海怀,张桂筠,陈向伟,梁国栋,金奇,侯云德
1990~ 1994年 ,从新疆地区的蚊、蜱和病人血清分离了多株病毒 ,为了明确这些病毒的分类地位 ,对其中的2 0株病毒进行了组织培养细胞感染实验和血清学检验 ,对部分毒株做了动物接种实验和理化性质鉴定。结果显示 :2 0株病毒均可使BHK 2 1细胞病变 (1~ 3天 ) ,主要表现为细胞圆缩 ,聚集 ,融合 ,破碎 ,脱落等 ;致Vero细胞病变为 2~ 4天 ;15株病毒致C6 / 36细胞病变 (2~ 4天 ) ,5株病毒对C6 / 36细胞连续观察 7天未见细胞病变。 11株病毒对乳鼠 2~ 4天致死 ,对成年鼠 2~ 5天致死。选取 6株病毒进行理化性质鉴定 ,4株病毒 (90 2 6 0、910 0 2、910 0 4和 910 2 8)对 5 氟脱氧尿苷耐受 ,对乙醚和酸敏感 ,提示为有膜RNA病毒 ;一株病毒 (90 2 6 5 )对 5 氟脱氧尿苷、乙醚和酸均敏感 ,提示为有膜DNA病毒 ;另一株病毒 (90 5 9)对 5 氟脱氧尿苷耐受 ,对乙醚和酸也耐受 ,提示可能为无膜RNA肠道病毒。 2 0株病毒中 ,17株病毒与甲病毒、乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的特异性免疫腹水不反应 ,提示这些病毒中可能不存在甲病毒、黄病毒和布尼亚病毒 ;3株病毒 (90 2 6 0、910 0 2和 910 0 4)只与甲病毒的特异性免疫腹水反应 ,与乙型脑炎病毒和布尼亚病毒的不反应 ,提示这三株病毒为甲病毒。
2001年02期 112-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 50k] [下载次数:167 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:520 ] - 刘扬,王健伟,屈建国,王春晓,洪涛
应用PCR技术分别扩增出编码白喉毒素氨基端 389个氨基酸 (DT3 89)的基因片段及人IL 2全基因 ,将两基因串连插入 pET3a载体 ,构建成含有DT3 89 IL 2融合基因的表达载体 ,转化大肠杆菌BL2 1,经表达、纯化后 ,用3 H Leucine掺入法测定其对HUT 10 2细胞的蛋白合成抑制作用。SDS PAGE电泳分析表明 ,表达产物分子质量 (Mr)约为 5 8kD ;重组嵌合毒素能够特异性地抑制高表达IL 2受体的HUT 10 2细胞的蛋白生物合成 ,且有一定的剂量反应关系 ,其细胞半数抑制浓度 (IC50 )约为 3 3× 10 -11mol/L。为进一步研制特异性的抗IL 2受体高表达肿瘤和相关疾病的药物打下了基础。
2001年02期 117-121页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k] [下载次数:121 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:322 ] - 何金生,王健伟,温乐英,徐倏焱木,屈建国,姜慧英,洪涛
为探索利用重组腺病毒表达轮状病毒的结构抗原以制备轮状病毒基因工程疫苗的可行性 ,构建了一株可表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7的重组腺病毒AdEasyCVP7。AdEasyCVP7感染 2 93细胞后 ,RT PCR证明VP7基因有转录 ,Westernblotting试验可检测到VP7的表达。随后 ,用AdEasyCVP7通过灌胃和滴鼻两种不同途径免疫小鼠 ,并对免疫后小鼠的血清抗体和粘膜抗体进行了比较。初次免疫后 ,两组小鼠均有应答 ,但血清抗体滴度及阳转率不同。再次免疫后 ,滴鼻组小鼠显示出明显的加强效果。对肺灌洗液中的sIgA及肺、肠粘膜组织匀浆中的IgA进行检测 ,发现滴鼻组的免疫学效果明显优于灌胃组。对血清中和抗体的检测表明 ,初次和再次免疫后 ,两组小鼠血清中均有中和抗体产生。该研究为轮状病毒基因工程疫苗的免疫方案、免疫途径及免疫保护作用等的进一步研究奠定了基础。
2001年02期 122-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 71k] [下载次数:161 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:31 ] |[阅读次数:343 ] - 安乃莉,徐春晓,姚立红,陈爱君,曾革非,张立国,张智清
TNF与多种疾病密切相关。为了获得大量具有生物学活性的可溶性TNF受体用以拮抗TNF的毒性作用 ,在原核表达系统中表达了TNFR(P5 5 )的胞外区与TrxA的融合蛋白。将TNFR(P5 5 )胞外区去信号肽的前三个结构域基因克隆入融合蛋白表达载体 pET 32a ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中高效表达了TrxA TNFR融合蛋白。表达产物以包涵体形式存在 ,经过变性和复性 ,并经镍金属鳌和柱亲和层析纯化 ,得到了纯度较高的可溶性受体蛋白的初纯品。免疫学实验及L92 9细胞体外实验均表明 :该蛋白具有TNFR(P5 5 )特异的抗原性、与TNF结合的活性以及良好的抑制TNF的生物学活性。
2001年02期 127-131页 [查看摘要][在线阅读][下载 76k] [下载次数:95 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:420 ] - 徐春晓,姚立红,陈爱君,安乃莉,曾革非,张立国,张智清
肿瘤坏死因子 (TNF)是一种多功能性的细胞因子 ,与许多重大疾病有关。为了抑制TNF的生物学活性 ,将TNF受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中进行了可溶性表达 ,并通过金属鳌合层析柱纯化重组蛋白。结果表明 ,纯化的重组蛋白能够识别并结合TNF ,同时能中和TNF的生物学活性 ,抑制其对细胞的杀伤作用 ,具有潜在的临床应用前景。
2001年02期 132-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 52k] [下载次数:83 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:388 ] - 刘岳龙,崔治中,秦爱建,金文杰,孙春根
在已构建鸡贫血病毒 (CAV)全基因组体外克隆 (pCAV2 4)的基础上 ,设计一对特定引物 ,用PCR定向点突变方法扩增出含有完整的EcoRI位点的CAV全基因组 (2 3kb) ,并克隆入pUC18载体中 ,获得阳性克隆 ,命名为pCAVE+ 。经酶切鉴定和序列分析EcoRI位点两侧序列 ,原先不完整的EcoRI位点 ( GACTTC )已被定向点突变为完整的EcoRI位点 ( GAATTC )。对重组质粒pCAVE+ 以EcoRI酶切回收CAV全基因组DNA ,在体外连接并经纯化后 ,经Effectene转染易感宿主细胞MSB1。将转染细胞培养上清连续传代 8次以后 ,出现病毒复制 (MSB1细胞培养基颜色不再变黄 )。取此时细胞培养液感染无CAV的 1日龄SPF小鸡 ,14天出现典型的鸡贫血症状和胸腺萎缩、骨髓脂肪变性等病变。获得了能在体外自主复制并组装成完整CAV病毒子的感染性核酸。
2001年02期 136-139页 [查看摘要][在线阅读][下载 44k] [下载次数:151 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:350 ] - 邱涛,张菁,陆仁后,朱作言
草鱼出血病病毒基因组由 11条dsRNA片段组成。最近在研究其基因组时发现 ,在病毒基因组外存在许多核酸成份 ,但在核苷酸数量上少于基因组成份 ,表现为较小分子量的RNA片段。在完整地克隆了这些片段的全长cDNA后 ,测定了其中两个克隆的序列组成 ,发现它们为病毒基因组经剪切后的部分片段 ,已经重新装配 ,而且都含有原基因组某一片段 3′端和 5′端的保守区和倒转重复区 ,缺失中间部分。根据其特点来看 ,它们应为目前病毒学研究的重要材料———缺损性干扰颗粒的亚基因组成份。
2001年02期 140-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k] [下载次数:174 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:24 ] |[阅读次数:349 ] - 魏太云,林含新,吴祖建,林奇英,谢联辉
应用反转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)和单链构象多态性 (single strandconformationpolymorphism ,SSCP)技术快速检测我国水稻条纹病毒 (RSV)RNA4基因间隔区 (intergenicregion ,IR)的分子变异 ,结果表明 ,我国RSVRNA4IR存在分子变异。供试的 7个分离物共有 4种泳动带型 ,其中YL、BS、JD、LY分离物完全一致 ,而SQ、PJ、JN各不相同。序列测定证实了PCR SSCP结果。各分离物RNA4IR序列均由 6 5 4个核苷酸组成 ,其中YL、BS、YL及JD 4个分离物序列完全一致 ;JN、PJ、SQ 3个分离物各不一样 ,序列之间的同源性均在 92 %~ 94%之间。IR序列内部具有两个重要的结构特征 :(1)有两处反向重复序列 ,可形成两个明显的发夹结构 ,其中一个序列比较保守 ,形成的发夹结构稳定 ;但另一个发夹结构由于碱基变异导致其稳定性在各个分离物中差异较大 ;(2 )具有插入序列 ,相对于日本M分离物 ,我国 7个分离物都有一段长 19bp的插入序列 ,这段插入序列比较保守 ,各分离物之间仅有 1~ 2个碱基的差异。
2001年02期 144-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 97k] [下载次数:137 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:34 ] |[阅读次数:261 ] - 龙钢,陈新文,Just M.Vlak,胡志红
对中国棉铃虫单粒包埋核多角体病毒 (HaSNPV)基因组中的HindⅢ Ⅰ片段的序列进行分析 ,该片段全长75 0 1nt,包括 10个开放阅读框 :AcMNPVORF111的同源基因 (Ac111) ,晚期表达因子 2 (lef 2 )基因 ,病毒核壳结构蛋白 p2 4基因、gp16 基因、多角体包膜蛋白 (polyhedronenvelopeprotein ,pep)基因、AcMNPVORF6 3的同源基因(Ac6 3) ,38 7kD基因 ,晚期表达因子 1(lef 1) 基因 ,及两个特有基因HaSNPV orf5 91和HaSNPV orf435。基因组的排列比较分析发现与AcMNPV有较大区别。
2001年02期 150-157页 [查看摘要][在线阅读][下载 164k] [下载次数:71 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:324 ] - 易新萍,单文鲁,冉多良,王宁,岳城,恩特马克
聚合酶链反应 (PCR)可作为一种快速检测并鉴别马疱疹病毒 1型 (EHV 1)和马疱疹病毒 4型 (EHV 4)的诊断方法。PCR引物是根据编码EHV 1和EHV 4的糖蛋白B(gB)基因上的共有的核苷酸序列或型特有的核苷酸序列设计的。利用这两种病毒的型特异性混合引物 ,在一步PCR反应中检测并鉴别EHV 1和EHV 4,而同一疱疹病毒科的单纯疱疹病毒 1型 (HSV 1)、伪狂犬病毒 (PRV)、马立克氏病病毒 (MDV)均无特异性扩增。应用建立的PCR方法检测了普氏野马流产胎儿病料 ,实验结果表明 ,这种PCR方法是一种直接检测并鉴定EHV 1和EHV 4的快速、敏感的诊断方法 ,同时 ,它可在一步PCR反应中直接鉴别这两种病毒 ,可用于病料中EHV 1和EHV 4检测的初步筛选。
2001年02期 158-160页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k] [下载次数:221 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:11 ] |[阅读次数:332 ] - 何海怀,杨益良,付士红,李蕾,周国林,吕新军,梁国栋2001年02期 161-165页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k] [下载次数:67 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:375 ]
- 周天戟,张雪怡,罗玲,今井章介,高田贤藏2001年02期 166-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k] [下载次数:60 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:291 ]
- 周小林,刘云霞,崔梅萍,谷娟娟,张伟,孙兰英2001年02期 169-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 26k] [下载次数:53 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:304 ]
- 段招军,赵军,王红艳,魏开坤,吕宏亮,李武平,李玉英,侯云德2001年02期 172-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 34k] [下载次数:100 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:368 ]
- 娄华,白挨泉,顾万军,贺东生,杨德威,刘福安2001年02期 175-179页 [查看摘要][在线阅读][下载 66k] [下载次数:119 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] |[阅读次数:417 ]
- 刘存仁,梁志清2001年02期 180-182页 [查看摘要][在线阅读][下载 25k] [下载次数:34 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:249 ]
- 刘强,丁翠2001年02期 183-187页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k] [下载次数:181 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:368 ]
- 刘德立,齐义鹏2001年02期 188-191页 [查看摘要][在线阅读][下载 72k] [下载次数:197 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] |[阅读次数:325 ]
- 陈心春,周伯平,马为民,张明程,江永珍,鲁健,徐六妹2001年02期 192页 [查看摘要][在线阅读][下载 9k] [下载次数:45 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:346 ]
- 李英,张鹤龄,哈斯阿古拉2001年02期 193页 [查看摘要][在线阅读][下载 5k] [下载次数:63 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:2 ] |[阅读次数:259 ]
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