- 辛伟,郭斐,陆柔剑,王世峰,邓瑶,王文玲,张相民,李仁清,吕亦晨,阮力
从含人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV 1)BostwanaC亚型全基因的质粒pJM4 HIV中克隆了nef基因,并利用非复制型痘苗病毒载体构建表达Nef蛋白的重组病毒NTVJ1175nef,经PCR和Southernblot鉴定,nef基因正确整合到痘苗病毒基因组的J片段上;感染人源细胞后,经Westernblot和免疫荧光检测表明,重组病毒能很好地表达Nef蛋白,并定位于细胞质中。NTVJ1175nef免疫BALB/c小鼠后,经Pep IFN ′γ Assay法检测,可诱导产生针对表位肽P1特异的可分泌IFN ′γ的CD+8T细胞(占脾细胞总数0 20%);经乳酸脱氢酶(LDH)法检测证实,诱导的细胞毒性T细胞(CTL)可特异性地杀伤表位肽P1特异P815靶细胞。这些结果表明,NTVJ1175nef具有良好的细胞免疫原性,为下一步构建表达包含HIV早期抗原的多组分重组痘苗病毒候选疫苗奠定了免疫学基础。
2004年02期 97-103页 [查看摘要][在线阅读][下载 137k] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：459 ] - 张军,顾颖,欧山海,王颖彬,叶祥忠,林鉴,葛胜祥,夏宁邵
重组蛋白NE2包含了戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白(pORF2)的aa394～606片段。在NE2上已鉴定出了2个HEV中和表位,并获得了3个识别中和表位的单克隆抗体(MAb)8C11、13D8和8H3。这3个MAb间的交叉阻断ELISA实验发现,8C11和13D8可以彼此完全阻断,8H3对8C11和13D8均不能阻断,而8C11非但不能阻断8H3,反而显著增强了8H3与抗原的结合。用生物传感器进行的抗体与抗原结合的动力学分析也证实了这一现象。这些结果提示,在NE2上8H3表位区域受到抗原上某些结构的掩盖,而8C11与NE2的结合引起了抗原空间结构的改变,导致了掩盖8H3表位的结构的去除和8H3表位的充分暴露。免疫捕获RT PCR发现,8C11同样可以显著增强8H3对天然HEV病毒的捕获能力,提示这种结合诱导的衣壳蛋白空间构象改变在天然HEV病毒颗粒上同样存在。
2004年02期 104-109页 [查看摘要][在线阅读][下载 91k] [下载次数：259 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：384 ] - 刘合宾,刘克洲,翁景清,朱智勇
汉坦病毒是引起肾综合征出血热(HFRS)和汉坦病毒型肺炎综合征(HPS)的主要病原体。其基因组由三节段的单股负链RNA组成,即S、M与L基因片段。汉坦病毒基因组的一个重要特点是每个基因片段的两个末端都有一段长18个核苷酸的高度保守的反向重复序列,互补可形成双链发夹结构,并且这一特点为不同型病毒所共有。为了研究该基因组末端保守的反向重复序列的功能,首先构建了汉坦病毒中国疫苗株Z10(汉滩型)及Z37(汉城型)的核蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达。经NI NAT亲和柱和HiPrep16/10DEAE离子交换柱液相色谱(FPLC)二步提纯,获得高纯度的重组核蛋白,并分别以胰蛋白酶消化后,用Westernblotting进行区分和鉴定。以T4DNA激酶同位素标记一对人工合成互补的18个核苷酸反向重复序列,制备双链探针。然后将该探针与纯化的Z10、Z37株的核蛋白NP进行非变性凝胶电泳迁移改变实验(EMSA)后发现,重组的Z10、Z37株的核蛋白NP,在体外均可特异地结合其基因组末端反向重复序列形成的双链探针。该结果表明,汉坦病毒基因组末端的反向重复序列是核蛋白重要结合位点,这对理解汉坦病毒核蛋白功能以及病毒复制过程中病毒粒子的包装机制有重要的意义。
2004年02期 110-117页 [查看摘要][在线阅读][下载 136k] [下载次数：187 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：493 ] - 陈岚,张瑾,肖新莉,韩俊,高建梅,张宝云,许彩民,董小平
为了探讨羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织中星形胶质细胞和神经元的数量及功能改变,利用免疫印迹、免疫组化方法研究了胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)和神经元特异性烯醇化酶(neuron specificenolase,NSE)在受染仓鼠各脑区中表达变化的特点,同时比较其与神经病理学改变及PrPSc沉积的关系。结果表明,感染终末期仓鼠的脑组织中GFAP表达量明显增高,与正常对照相比,大脑皮质、脑干和小脑区域GFAP着色细胞数量分别增高3 69、2 41和1 56倍。感染仓鼠脑组织NSE表达量低于正常对照,小脑、海马CA1区和大脑皮质NSE着色细胞数量分别仅为正常对照相应区域的22 5%、54 2%和53 9%。这些变化与PrPSc在脑组织中的沉积程度和空泡样变性程度相吻合。结果提示,GFAP和NSE的检测可分别很好地反映星形胶质细胞和神经元的数量及功能状态,成为在朊病毒病发病过程中重要的病理变化指标。
2004年02期 118-123页 [查看摘要][在线阅读][下载 459k] [下载次数：77 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：385 ] - 张成海,李武平,衣作安,王刚,吕宏亮,段招军,侯云德
为了获得人干扰素 ω(huIFN ω)在大肠杆菌中的高效表达,根据大肠杆菌的偏爱密码子,人工设计并合成了huIFN ω高表达基因,并克隆到原核表达载体pBV220,在大肠杆菌DH5α中实现了高效表达,目的蛋白占细胞总蛋白的15%左右,以包涵体形式存在。表达产物经变性、复性及阳离子和分子筛层析纯化,纯度达90%以上,产物的抗病毒活性约为1.0×108IU/mg,并具有体外促NK杀伤活性。此结果为进一步研究和开发重组huIFN ω奠定了基础。
2004年02期 124-127页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k] [下载次数：218 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：359 ] - 彭建强,谭淑萍,董小岩,伍志坚,袁洪,陈方平,吴小兵
为揭示2型重组腺相关病毒感染哺乳动物细胞的一些转导特征,构建并制备了一种携带萤火虫荧光素酶基因的重组2型腺相关病毒rAAV2 Luc,研究了该重组病毒体外转导哺乳动物细胞的量效关系;肝素对转导的拮抗作用;rAAV2的竞争抑制作用;丁酸钠对表达水平的增强作用。结果显示,在一定范围内,随着rAAV2 Luc感染细胞的感染复数(MOI即每个细胞感染的病毒基因组数)值增高,荧光素酶的表达水平也增高;但更高的MOI(>107)反而使荧光素酶的表达水平下降。肝素可特异性阻断rAAV2介导的荧光素酶表达。携带不同基因的2种rAAV2病毒相互具有明显的竞争抑制作用。丁酸钠可显著增强rAAV2介导的荧光素酶表达水平。本研究对rAAV2载体介导的基因转移研究具有一定的指导意义。
2004年02期 128-132页 [查看摘要][在线阅读][下载 84k] [下载次数：207 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：333 ] - 吕建强,陈焕春,赵俊龙,方六荣,何启盖,熊符
根据Bergeron等报道的猪细小病毒(PPV)基因组,设计一对包含VP2全基因的PCR引物,上下游均引入一个BamHⅠ位点,扩增得到VP2基因后,将其插入到pUSK载体中,构建了转移载体pUSK VP2。采用脂质体介导的转染方法,将伪狂犬病毒TK-/gG-/LacZ+株的基因组DNA与pUSK VP2共转染PK 15细胞,待细胞病变后收集病毒液,在空斑纯化的同时,利用检测PPVVP2基因和LacZ基因的PCR方法筛选重组病毒TK-/gG-/VP+2株,Southernblotting、SDS PAGE、Westernblotting和电镜观察鉴定重组病毒,并在不同细胞上测定重组病毒的增殖滴度,接种小鼠进行安全性试验。结果发现,外源基因VP2已成功地插入到TK-/gG-/LacZ+亲本株的基因组中,并获得了表达。表达的VP2蛋白可以与猪细小病毒阳性血清反应,而且可以自行装配成病毒样颗粒。同时发现,VP2基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力与亲本株相当。
2004年02期 133-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 80k] [下载次数：524 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：71 ] |[阅读次数：461 ] - 杨怡姝,陈国敏,陈启民,耿运琪,曾毅
为探讨牛免疫缺陷病毒(BIV)Tat能否在功能上取代HIVTat,构建用BIVtat取代HIVtat的嵌合人/牛免疫缺陷病毒(pHBIV 2)cDNA,将其转染人源MT4细胞。PCR、RT PCR法检测到嵌合基因组在MT4细胞中可稳定地存在并转录;套式Alu PCR法检测到嵌合基因组可整合到细胞基因组中;RTase活性测定及IFA检测显示,嵌合基因在MT4细胞中得到了翻译。结果表明,HIV的tat基因用BIVtat取代后产生的传染性cDNA克隆,仍能在人源MT4细胞中产生有复制性的重组病毒。
2004年02期 138-142页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k] [下载次数：83 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：383 ] - 胡建和,刘湘涛,郭东升,张淼涛,田宏,张彦明,谢庆阁
用SrfⅠ限制性内切酶将构建的猪瘟病毒兔化弱毒株(C 株)全长cDNA线性化,体外转录获得其基因组RNA,利用脂质体将基因组RNA转染至SK 6细胞系,连续传代,收集5代以后培养细胞,采用RT PCR、荧光抗体直接法、夹心ELISA进行鉴定。结果表明,所构建的全长cDNA具有感染性。猪瘟病毒C 株全长感染性cDNA的成功构建,为在分子水平上进一步研究中国猪瘟病毒兔化弱毒株提供了极有价值的研究工具。
2004年02期 143-147页 [查看摘要][在线阅读][下载 66k] [下载次数：218 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：310 ] - 阎玉河,邵一鸣,潘品良,贾斌,沈荣显
为研究尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶(dUTPase)在马传染性贫血病毒(equineinfectousanemiavirus,EIAV)致弱过程中的作用,探索dUTPase结构与功能的关系,分别对EIAV强、弱毒株dUTPase的编码基因进行了结构分析,并在大肠杆菌中进行了表达。经镍-次氮基三乙酸(Ni NTA)金属亲合层析方法对表达产物纯化后,用3H标记底物的方法测定了重组强、弱毒株dUTPase的活性。证明所表达的两种重组dUTPase均具有水解dUTP的功能,但重组弱毒株dUTPase的活性显著高于重组强毒株dUTPase的活性。结果提示,由于EIAV疫苗株在驴白细胞上连续传代培养,使病毒dUTPase的活性增强和复制能力提高,而决定酶活性改变的分子基础是dUTPase编码基因中的两个氨基酸发生了突变。此结果对其它慢病毒病的免疫预防具有重要参考价值。
2004年02期 148-153页 [查看摘要][在线阅读][下载 100k] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：362 ] - 王颖彬,张军,林长青,徐颖潇,罗文新,吴婷,彭耿,夏宁邵
为研制灵敏、特异的抗人类T淋巴细胞白血病病毒(HTLV)抗体诊断试剂,将一段HTLV Ⅰ和HTLV Ⅱenv区嵌合基因在大肠杆菌中表达,获得的重组抗原具有良好活性。将该抗原作为酶标记抗原建立双抗原夹心法ELISA(dsELISA),对31份HTLV Ⅰ型血清和19份HTLV Ⅱ型血清均能100%检出,而在5065份各种阴性血清中特异度为99 94%。用dsELISA试剂与进口间接法试剂(GeneLabs试剂)平行检测18份HTLV Ⅰ参比血清、17份HTLV Ⅱ参比血清和1024份献血员血清,结果dsELISA试剂正确率为100%,对HTLV Ⅰ型血清和HTLV Ⅱ型血清的反应性基本相同,平均s/co值显著高于GeneLabs试剂。而GeneLabs试剂对HTLV Ⅱ型血清的反应性显著弱于Ⅰ型,并有2份BBI参比血清中的Ⅱ型血清漏检。另外,GeneLabs试剂在献血员血清中出现9例假阳性,特异性显著低于dsELISA试剂。这些结果表明:所研制的dsELISA试剂可用于HTLV Ⅰ型和Ⅱ型血清的检测,其灵敏度和特异度均优于进口间接法诊断试剂。
2004年02期 154-159页 [查看摘要][在线阅读][下载 76k] [下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：429 ] - 崔爱利,许文波,李秀珠,胡家瑜,凌华,唐伟,杨智宏,张燕,陈立,Hiroyuki Shimizu
2002～2003年从上海市和重庆市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中上海9株,重庆1株。利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT PCR方法对病毒进行初步鉴别。根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,可初步判定出EV71和Cox.A16病毒的血清型别。RT PCR结果提示,上海分离到的9株病毒中,有2株为EV71,其余7株病毒为Cox.A16;重庆分离到的1株病毒为EV71。10株病毒的RT PCR产物经序列测定和分析证实,PCR定型结果正确,说明PCR法具有很高的特异性,可作为EV71初步鉴定的首选方法。对所分离的3株EV71病毒进行VP1区编码基因全序列的测定和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此3株EV71病毒和中国大陆已发表的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26和CHN 87)全部属于C基因型,与该型代表株比较,同源性为89 3%～94 6%;与A、B基因型代表株比较,同源性为81 3%～84 0%,差异较大。在C基因型中,此3株EV71病毒和中国大陆先前分离的6株病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26)的同源性较高,在94 5%～100%范围内。在系统发生树上,这9株病毒形成一个较独立的分支。与CHN 87株的同源性在92 1%～93 6%之间。与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,同源?
2004年02期 160-165页 [查看摘要][在线阅读][下载 91k] [下载次数：1303 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：200 ] |[阅读次数：653 ] - 舒跃龙,周蕊,刘丽琦,史智扬,朱凤才,赵静,李刚,唐震,林里卓,张丽兰,侯云德2004年02期 166-168页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k] [下载次数：173 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：526 ]
- 李国才,严华,季明春,申厚凤,陈红菊,焦红梅,万兵2004年02期 169-171页 [查看摘要][在线阅读][下载 31k] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：299 ]
- 刘萱,李平,石玉玲,易艳萍,任冽,匡铁吉,段昭辉,王云龙,马清钧,曹诚2004年02期 172-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 34k] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：358 ]
- 王志玉,王战勇,温红玲,宋绍霞,宋艳艳,许洪芝2004年02期 175-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 58k] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：397 ]
- 涂亚斌,王柳,仇华吉,温建新,谷守林,童光志2004年02期 179-181页 [查看摘要][在线阅读][下载 66k] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：304 ]
- 钱莺娟,张雪莲,陈德胜,陈溥言2004年02期 182-185页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k] [下载次数：186 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：313 ]
- 余莉,王明丽2004年02期 186-189页 [查看摘要][在线阅读][下载 52k] [下载次数：92 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：273 ]
- 马新英,彭文明,高轩2004年02期 190-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 33k] [下载次数：490 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：38 ] |[阅读次数：309 ]
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