- 孙晓冬;李崇山;汤显;李智;张燕;唐伟;王静;王慧玲;杨彦基;李加;袁政安;许文波;
本文对中国首例输入性D8基因型麻疹病毒基因特征进行分析。用ELISA法检测血清麻疹病毒IgM抗体;用Vero/Slam细胞对采集的咽拭子标本进行病毒分离,分离到的麻疹毒株用RT-PCR方法扩增其核蛋白基因3′端的部分序列,并对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,以3′端456个核苷酸为目的片段进行基因亲缘性关系分析。结果表明,上海市2012年共报告1 105疑似麻疹病例,其中实验室确诊590例,临床符合病例2例,排除513例,报告发病率为2.52/10万;共采集到984份疑似麻疹病例咽拭子标本,分离到247株麻疹病毒,病毒分离阳性率为25.3%;除Shanghai12-239为D8基因型外,其他均为H1a基因亚型。Shanghai12-239与世界卫生组织(World Health Organization,WHO)参考株(Manchester.UNK30.94(D8)AF280803)核苷酸序列同源性为97.8%,氨基酸序列同源性为98.6%。与WHO其他基因型参考株核苷酸序列同源性为89.6%~94.5%,氨基酸序列同源性为88.7%~95.3%。
2013年06期 v.29 583-588页 [查看摘要][在线阅读][下载 216K] [下载次数:257 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:53 ] |[阅读次数:422 ] - 宋敬东;邹小辉;王敏;屈建国;鲁茁壮;洪涛;
为明确人腺病毒41型(Adenovirus type 41,Ad41)形态发生过程中形成的纤维丝状包涵体(Fibrillous inclusion body,FIB)是否含有Ad41的长纤维(Long fiber,LF)蛋白与短纤维(Short fiber,SF)蛋白。我们分别原核表达和纯化Ad41LF、SF的球部(Knob)蛋白,分别命名为LFK与SFK。以LFK和SFK分别免疫BALB/c小鼠,分别获得LFK抗血清和SFK抗血清。Western blot、间接免疫荧光和免疫负染结果表明,LFK抗血清和SFK抗血清分别与LF和SF结合,LFK抗血清和SFK抗血清之间无交叉反应,可以应用于免疫电镜标记。通过Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清分别对FIB进行免疫电镜胶体金标记,表明Ad41抗血清、腺病毒纤维单克隆抗体4D2、LFK抗血清与SFK抗血清均能标记FIB,说明FIB中含有Ad41长纤维蛋白和短纤维蛋白。
2013年06期 v.29 596-601页 [查看摘要][在线阅读][下载 421K] [下载次数:251 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:510 ] - 沈震;王刚;宰淑蓓;胡芸文;袁正宏;张军;
为了解上海地区诺如病毒相关急性胃肠炎疫情的流行病学特点及流行株基因型的演化情况,2012年3月至2013年2月,收集上海市两处哨点医院成人急性胃肠炎粪便样本进行诺如病毒的分子检测并对其基因特征进行系统分析。在502份样本中,GI群共检出19例,检出率3.78%,呈现低位流行、全年散发的状态,无明显的季节分布;GII群检出86例,检出率17.13%,在10~12月出现高位流行,并发现中老年人群GII群诺如病毒检出率显著高于青年个体(P<0.05)。同时首次于2012年9月在上海地区检出新型GII.4变异株Sydney_2012,证实是该变异株引发了2012年秋冬季诺如病毒急性胃肠炎的高位流行。序列分析表明该变异株为GII.e型开放阅读框(Open reading frame,ORF)1与GII.4型ORF2的重组体,目前已成为本地区的优势流行株。研究发现,2012年上海地区出现GII.4新型变异株Sydney_2012,并引发秋冬季诺如病毒急性胃肠炎的高位流行。
2013年06期 v.29 608-614页 [查看摘要][在线阅读][下载 458K] [下载次数:208 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:20 ] |[阅读次数:447 ] - 王潇娣;朱玲;蔡雨函;黄仆;徐志文;
为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对表达产物进行鉴定;纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;探讨最佳浓度的p65/p50对PRRSV体外感染增殖活力的影响,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70kD的p65/p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体;Western-blot显示p50和p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应。确定p65/p50最佳添加浓度为0.4μg/mL。通过实时荧光定量PCR技术研究PRRSV感染时相,结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;但CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P<0.05)。该结果为进一步研究PRRS的发病机理及治疗策略提供了新思路。
2013年06期 v.29 621-631页 [查看摘要][在线阅读][下载 810K] [下载次数:209 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:412 ]
- 李瑾;申红卫;秦萌;马学军;
急性呼吸道感染广泛分布于人群中,主要由呼吸道病毒引起,在老年人和婴幼儿中具有较高的发病率和死亡率,给社会带来严重的经济负担。快速、准确检测出病原体对临床早期诊断和指导治疗有重要意义。多重聚合酶链式反应(PCR)技术具有PCR的高灵敏度和快速检测的特点,还能实现多病原的高通量检测。基于多重PCR技术开发的商业化试剂盒能同时检测12种以上的呼吸道病毒,能达到与实时荧光定量PCR(real-time PCR)相当的灵敏度和特异性,为呼吸道病毒的检测与分型提供了新的选择。本文综合了近年来的发展成果,对新型多重PCR方法的原理及其在呼吸道病毒诊断上的应用进行了综述。
2013年06期 v.29 638-645页 [查看摘要][在线阅读][下载 213K] [下载次数:879 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:23 ] |[阅读次数:421 ] - 罗东玉;薛春宜;曹永长;
流感在全球范围内的不断暴发引起了世界的高度关注。预防流感最有效和最经济的手段是疫苗免疫。流感病毒的多宿主和高度变异性,使得流感疫苗的有效性受到限制。目前使用的疫苗只对与疫苗株相同或高度相近的病毒株具有保护效力。一旦变异较大或新亚型的流感病毒出现,现有疫苗就会失去其保护效力。因此,研制一种可抵御变异较大或不同亚型流感病毒的通用疫苗成为流感疫苗研究的热点。选择流感病毒的保守蛋白做抗原是研制流感通用疫苗的主要方法,已有至少3种流感通用疫苗进入临床研究阶段。改变疫苗免疫途径和免疫程序,也能提高疫苗的交叉免疫效果。本文对流感通用疫苗的研究进展进行了综述与展望。
2013年06期 v.29 646-650页 [查看摘要][在线阅读][下载 132K] [下载次数:687 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:401 ] - 于永忠;佟春玉;宋佰芬;安红波;余丽芸;于力;崔玉东;
羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染细胞过程中为了对抗宿主细胞的抗病毒作用,依靠种群长期培育的一系列功能性基因,如干扰素抗性基因、Bcl-2样基因和细胞周期蛋白抑制物基因等,遏制宿主细胞免疫清除和免疫调节作用。同时,ORFV也利用某种机制干预细胞泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)的信号调控途径,有效抑制胞内信号传导和CD8+T细胞活化,以庇护病毒粒子成熟和释放。本文综述了细胞UPS功能与病毒干预机制的内在联系及其相关元件的关键作用,探讨ORFV在选择压力下,主动采取的抑制宿主细胞免疫应答和设计胞内免疫逃逸的进化趋势。
2013年06期 v.29 662-666页 [查看摘要][在线阅读][下载 188K] [下载次数:198 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:5 ] |[阅读次数:537 ] - 陈蕾;朱玲;周远成;郭万柱;
猪环曲病毒在世界范围内广泛分布,猪群感染率高,在腹泻病例中检出率高,被认为是一种可能的猪腹泻病原。凸隆病毒的型间重组和抗原交叉反应,意味着猪环曲病毒存在人兽共患的风险。基于近年在我国部分地区因为仔猪腹泻导致了较大损失,本文介绍了猪环曲病毒发展历史,综述了该病毒基因组和蛋白特点、流行病学、实验室诊断等,以期为相关研究提供参考。
2013年06期 v.29 667-672页 [查看摘要][在线阅读][下载 144K] [下载次数:306 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:461 ] 下载本期数据