病毒检测方法研究专题论著

  • H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用

    朱彤;商瑞;程凯慧;于志君;吴家强;

    H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,在病原监测工作中得到了广泛应用。本研究以H13亚型禽流感病毒的HA基因作为靶基因,设计了一对特异性荧光定量PCR检测引物,通过特异性试验、敏感性试验等,建立了H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对海鸥粪便样品进行核酸检测。实验结果发现,该检测方法的灵敏度为1.60×10~0拷贝/μL;该检测方法对H1、H3、H5、H6、H7和H9等6个亚型的禽流感病毒无交叉反应;该检测方法的敏感性是常规PCR的10倍;海鸥粪便样品中H13亚型禽流感病毒的核酸检测阳性率为18.8%。我们建立的H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强等特点,该检测方法可用于大量临床样品的快速检测,为H13亚型禽流感病毒监测工作的顺利开展提供了技术支撑。

    2022年01期 v.38 1-7页 [查看摘要][在线阅读][下载 1093K]
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  • 狂犬疫苗糖蛋白ELISA定量分析方法的建立及验证

    叶珂;张志高;何春辉;方浩霖;林冠峰;卞论;许四宏;吴英松;

    为狂犬疫苗生产质量控制建立简便、高效、精准的糖蛋白体外效力分析方法,研制适用于狂犬疫苗生产质量控制的狂犬病毒糖蛋白酶联免疫吸附(ELISA)定量分析试剂。采用双抗体夹心法建立狂犬病毒糖蛋白ELISA定量分析体系,优化反应各项参数后考核试剂性能。线性范围为1~180 mIU/mL,灵敏度为0.4497 mIU/mL,分析内变异系数为5.8%~8.2%,分析间变异系数为7.2%~14.4%。用自制试剂与National Institutes of Health(NIH)动物法平行检测10份疫苗相关样品,两种方法测定结果的相对系数r2为0.8943,相关性良好。自制ELISA试剂各项性能指标良好,且与NIH动物法检测结果相关性良好,有望推广用于狂犬疫苗生产质量控制。

    2022年01期 v.38 8-13页 [查看摘要][在线阅读][下载 1846K]
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  • 新型冠状病毒S蛋白抗体制备及双抗体夹心ELISA抗原检测方法的建立

    李妮;钏鸿云;吴晓燕;徐丽兰;欧阳圣洁;沈霏;廖国阳;

    由SARS-CoV-2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2)引起的新型冠状病毒肺炎(Corona virus disease 2019,COVID-19)自2019年底暴发以来,已导致上亿人次感染和数百万人死亡,严重威胁着全人类的生命健康。为了建立一种能快速对新冠病毒疫苗中S蛋白抗原进行定量检测的方法,本研究通过免疫山羊制备多克隆抗体作为包被抗体,通过杂交瘤细胞技术制备了S蛋白特异性单克隆抗体并作为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA抗原检测方法,并验证其线性范围、敏感性、特异性、稳定性及符合率。结果显示,建立的双抗体夹心ELISA检测方法线性范围为1U~64U,相关系数R~2大于0.99;特异性良好,敏感性为92.1%;批内和批间变异系数分别为2.5%~11.7%和1.3%~14.8%,检测已知背景样本符合率为96.7%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高、且稳定性和准确性高,可用于新冠疫苗中S蛋白抗原含量测定。

    2022年01期 v.38 14-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 1033K]
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  • GICA和CLIA联合检测SARS-CoV-2特异性抗体的检测策略研究

    卢小岚;汪光蓉;牟代勇;杜琴;郭晓兰;王强;

    评价胶体金免疫层析法(GICA)与化学发光法(CLIA)联合检测对降低新型冠状病毒(SARS-CoV-2)特异性抗体假阳性的效果。收集2020年1月22日至2020年3月5日就诊于川北医学院附属医院及南充市中心医院的19例SARS-CoV-2确诊患者不同时段的血清33份,55例非SARS-CoV-2、其他病原体感染及自身免疫性疾病患者的血清55份,采用GICA和CLIA分别对血清SARS-CoV-2 IgM、IgG进行检测,并对结果进行分析。GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为100.0%、94.74%,与CLIA(92.86%和100.0%)比较没有差异(P>0.05);GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的特异性分别为70.91%、74.55%,明显低于CLIA的特异性(98.18%和89.09%)(P<0.01);两种方法检测SARS-CoV-2 IgM、IgG结果具有一致性(P<0.001),Kappa值分别为0.434,0.406;ROC曲线分析发现,GCIA检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.855、0.846,明显低于CLIA(0.955和0.945)(P<0.05)。两种方法联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的敏感性分别为92.86%、94.74%,特异性分别为100.0%、100.0%;ROC曲线分析显示,联合检测SARS-CoV-2 IgM、IgG的AUC分别为0.964、0.974,高于两种方法的单独检测。GICA和CLIA联合检测能有效提高SARS-CoV-2 IgM和IgG的检测特异性,值得临床推广应用。

    2022年01期 v.38 21-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1021K]
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  • 腮腺炎病毒三种实验室常规灭活方法效果评价

    周杨子;朱贞;祝双利;刘莹;毛乃颖;崔爱利;

    探究几种实验室常规消毒灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果,为实验室进行腮腺炎病毒消毒工作提供基础数据。本研究采用热灭活、紫外线灭活和化学试剂灭活三种方法对腮腺炎病毒进行灭活处理,灭活处理后腮腺炎病毒采用细胞培养技术进行病毒滴定,评估上述灭活方法对腮腺炎病毒的灭活效果。热灭活方法显示,腮腺炎病毒对热敏感,随温度升高和热灭活时间增长对腮腺炎病毒灭活有明显加强作用。65℃30min、60min和70℃10min、30min、60min可有效灭活腮腺炎病毒;紫外线灭活方法显示,紫外线照射15min,30min,60min均可有效灭活涂抹在平皿表面的腮腺炎病毒,但对毒株液倾倒导致的MuV液体不能达到完全灭活效果;化学试剂灭活方法显示,三氯异氰泡腾片、1%过氧化氢、3%过氧化氢和75%乙醇根据试剂说明书处理后病毒均能有效灭活腮腺炎病毒。三种灭活方法在一定条件下均能实现对腮腺炎病毒的灭活,可以作为实验室常规灭活腮腺炎病毒方法。建议使用65℃30min或70℃10min对腮腺炎病毒进行有效灭活。紫外线适用于对腮腺炎病毒进行表面消毒,但对液滴状病毒污染建议使用化学试剂进行有效灭活。

    2022年01期 v.38 28-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 963K]
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人类病毒研究论著

  • 广西1例本地新冠肺炎病例感染的溯源调查

    王晶;陈华凤;阳世雄;赵君宇;周树武;居昱;陈敏;黄君;莫建军;张超;汤洪洋;潘利花;徐红;王静;康宁;闭福银;赵翔;张睿孚;李永红;林玫;

    描述2021年1月广西1例本地新冠肺炎病例发现和感染的溯源过程,旨在为今后类似疫情溯源调查工作提供经验参考。按照《新型冠状病毒感染的肺炎病例流行病学调查方案(第七版)》对病例开展流行病学调查,收集病例的流行病学史、发病诊疗情况等,对病例、密接者标本采用荧光实时定量RT-PCR法检测新冠病毒核酸和胶体金法检测血清特异性抗体。同时对重点场所环境采样进行核酸检测,对核酸阳性标本开展全基因组测序和系统进化分析。全基因组序列比对发现本地病例A和印度尼西亚入境的无症状感染者C同属L基因型欧洲家系分支2.3,共享25个核苷酸变异位点;结合流行病学调查,推测本次疫情的感染来源与印度尼西亚入境的无症状感染者密切相关,可能的传播途径为无症状感染者污染入住隔离酒店环境,本地病例在对酒店消毒作业中因防护不规范暴露于病毒污染环境而导致感染。境外输入病例导致的本土疫情是我国新冠肺炎常态化防控的重点。

    2022年01期 v.38 33-40页 [查看摘要][在线阅读][下载 1305K]
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  • 新冠病毒刺突糖蛋白结构与功能的生物信息学分析及原核表达

    徐本锦;宣焱;杜淼;刘玲;吴惠文;宋彬妤;侯艳香;陈利荣;刘晓梁;

    SARS-CoV-2是一种高致病性且传播迅速的病原体,通过刺突糖蛋白(Spike glycoprotein,S蛋白)识别宿主细胞表面的受体来实现入侵和感染。对S蛋白进行系统的生物信息学分析和原核表达,有助于深入理解S蛋白的功能和阐明该蛋白介导病毒感染的分子机制。本文采用Protparam、Pfam、TMHMM、ExPASy-ProtScale、PSORTⅡ、SignalP、UniProt、NetPhos 3.1、NetNGlyc 1.0、NetOGlyc 4.0和BLAST等生物信息学软件和数据库对S蛋白的理化性质、亚细胞定位、翻译后修饰及相互作用网络等生物学特性进行了系统分析。利用Clustal X2和MEGA7.0软件对该蛋白进行了基于氨基酸序列的同源性分析和系统进化分析。最后,通过分子克隆技术构建重组表达载体pET-22b-S并进行原核表达。结果显示,S蛋白由1 273个氨基酸组成,分子量141.2 kD,等电点6.24,有两个卷曲螺旋结构,一个跨膜螺旋区,疏水性较强。S蛋白包含刺突受体结合结构域和S2糖蛋白结构域,主要分布于宿主细胞的内质网膜和细胞膜,含有136个潜在的磷酸化位点和20个可能的糖基化位点。与SARS-CoV-2 S蛋白序列一致性最高的是SARS冠状病毒、SARS冠状病毒WH20和蝙蝠冠状病毒HKU3,均为76%。SARS-CoV-2与SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒聚为一大支,提示它们可能具有共同的祖先。S蛋白主要在细菌裂解液离心之后的沉淀中表达,这为后续的结构分析和疫苗研发奠定了基础。S蛋白在SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒之间保守性较高,提示其在病毒入侵过程中具有重要功能。SARS-CoV-2与SARS冠状病毒和蝙蝠冠状病毒可能具有共同的祖先。本研究为SARS-CoV-2 S蛋白的表达纯化、结构与功能研究提供了重要的数据基础,有助于全面揭示S蛋白的生物学功能,同时为设计和筛选靶向S蛋白的新型抗病毒药物提供了科学依据。

    2022年01期 v.38 41-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 3670K]
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  • 广东省2020年首次报道E基因型柯萨奇病毒B组3型的鉴定及基因特征分析

    杨倩;曾汉日;郑焕英;严冬梅;祝双利;宋洋;王东艳;韩振志;李冀琛;张勇;许文波;

    柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)是肠道病毒中流行较为广泛的血清型之一,在全球多个国家和地区曾报道儿童急性心肌炎、无菌性脑膜炎、手足口病等的暴发流行,严重威胁儿童健康和公共卫生安全。本研究对广东省2020年手足口病患者标本中分离到的8株CVB3进行基因特征和进化分析,结果显示分离到的8株CVB3 VP1区核苷酸序列相似性为98.2%~99.5%,与原型株Nancy的核苷酸序列相似性在77.9%~78.5%之间,与其他CVB3中国大陆流行株的核苷酸序列相似性为79.6%~82.2%。8株CVB3均为E基因型,为广东省首次报道。8株CVB3分离株在进化树上聚集,提示病毒发生了局部传播。全基因组序列分析提示2株广东CVB3分离株在非结构蛋白区有重组现象的发生。本研究为E基因型CVB3在我国的流行传播和疾病防控提供基础资料。

    2022年01期 v.38 57-63页 [查看摘要][在线阅读][下载 1392K]
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  • 基于RNA-seq技术研究埃可病毒30型感染RD细胞前后的差异表达基因

    李冀琛;张国艳;张珂艺;杨倩;刘志军;孙强;张勇;

    埃可病毒30型(Echovirus 30,E30)是一种全球传播的B组肠道病毒,常与无菌性脑膜炎等疾病暴发有关,分析E30在感染人横纹肌肉瘤(Human rhabdomyosarcoma,RD)细胞前后的差异表达基因有助于了解该病毒的复制周期以及宿主感染机制。本研究通过转录组测序技术探究E30感染RD细胞前后的基因表达谱变化,共检测到的1 281个差异表达基因,其中包括730个下调基因和551个上调基因。基因本体论(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析表明,显著差异表达基因主要参与细胞受体信号通路的调节、炎症反应、免疫细胞活化、调控细胞生命周期等。利用荧光定量PCR(Realtime quantitative PCR,qPCR)对其中9个与炎症和免疫反应相关的差异表达基因进行验证,发现DEAD-box解旋酶3(DEAD-box RNA helicase 3,DDX3)表达上调,这与转录组学分析一致。利用RK-33(DDX3的小分子抑制剂)靶向抑制DDX3的表达,发现RK-33能够抑制E30的复制,并且qPCR结果显示在抑制DDX3的表达后,GTP酶激活蛋白结合蛋白1(GTPase-activating protein-binding protein1,G3BP1)和干扰素调节因子3(Interferon Regulatory Factor 3,IRF3)的表达也出现不同程度地降低。本研究的结果提示DDX3表达可能影响E30复制,这一发现为进一步探索E30在感染宿主过程中的分子机制奠定基础。

    2022年01期 v.38 64-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 1414K]
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  • 江苏泰州地区HIV感染人群的血浆病毒群落研究

    窦安华;韩崇旭;周成林;李旺;张文;

    为探讨人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染人群血浆病毒群落组成,分析HIV感染人群血浆病毒群落的特点,研究病毒载量对HIV感染人群血浆病毒群落的影响,本研究通过Miseq高通量测序,对江苏泰州地区203份HIV感染人群的血浆样本进行了病毒宏基因组学分析。结果显示,高通量测序共得到243 824条注释为病毒的序列,可注释到至少17个不同的病毒科(包括未分类病毒),包括12种哺乳动物类病毒(占99.87%),2种昆虫病毒(占0.05%),1种植物病毒(占不到0.01%),2种其他病毒(占0.02%)及未分类病毒;检出HIV病毒载量组的病毒群落中占据主导地位的是细小病毒科,其次是黄病毒科和指环病毒科,未检出病毒载量组中的主要病毒为黄病毒科,其次为指环病毒科和细小病毒科;系统进化分析显示,注释为细小病毒的序列与已知病毒的同源性较高,而注释为指环病毒和人佩吉病毒的序列中有部分序列与已知病毒同源性较高,另有部分序列与已知病毒的差异较大,疑似有新型病毒的存在;应用PCR扩增对部分病毒序列进行验证,将验证后的部分序列与原始序列进行比对,一致性达到近99%。

    2022年01期 v.38 72-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 1219K]
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  • 血浆microRNA与HIV感染及治疗关系的研究

    闫新丽;李晓非;吕松琴;杨瑾;王玉明;

    本次研究分析了Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)感染者血浆中miRNA表达特点,探讨了血浆miRNA作为HIV-1感染及治疗监测生物学标志物的潜在可行性。选取2017年7月-2018年7月期间在昆明市第三人民医院就诊的HIV-1感染未经抗病毒治疗患者50例作为未治疗组,HIV-1感染经抗病毒治疗患者50例作为治疗组,选取同期本院健康体检者50例作为对照组,应用qPCR技术检测三组对象血浆miR-29a、miR-122,miR-155的相对表达量。结果显示,与健康对照组相比HIV-1感染未经抗病毒治疗组血浆miR-29a、miR-155、miR-122表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);未治疗组与治疗组相比较血浆miR-29a、miR-155和miR-122表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。对未治疗组的研究显示,血浆miR-29a、miR-155表达水平与HIV-1RNA病毒载量呈正相关(P<0.05),miR-122与HIV-1RNA病毒载量无显著相关(P>0.05),miR-29a、miR-155表达水平与CD4~+T细胞计数呈负相关(P<0.05)。本研究提示HIV-1感染后血浆miRNA有变化,血浆miR-29a、miR-122,miR-155与HIV-1感染相关,可能是HIV-1感染的潜在生物学标志物。而抗病毒治疗可以诱导miR-29a、miR-155和miR-122表达降低,这些miRNA可能具有成为监测HIV-1感染抗病毒治疗效果观察指标的潜在价值。未治疗组血浆miR-29a、miR-155与HIV-1RNA呈正相关,表明其与HIV-1病毒复制相关。

    2022年01期 v.38 84-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 990K]
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  • 浙江省2019年儿童腺病毒肺炎流行病学特征分析

    叶青;许承鲜;张莹莹;韩秀翠;毛建华;

    为了解浙江地区腺病毒肺炎的流行病学和病原学特征,本研究统计分析了2019年1月至2019年12月浙江大学医学院附属儿童医院腺病毒肺炎患儿的基本临床资料;并前瞻性的通过聚合酶链式反应(PCR)随机对部分的腺病毒阳性的肺炎患儿咽拭子进行基因扩增、测序和分型鉴定;进而构建系统发育树分析其核苷酸序列进化情况。本研究共检测咽拭子标本19 650份,其中腺病毒阳性标本有4 032份,腺病毒检出率为20.5%;春季和夏季腺病毒肺炎的患病率相对较高,患儿年龄主要在1~7岁。本研究所检测的99株腺病毒阳性标本经与GenBank数据库比对均为HAdV-3,通过Hexon基因全长系统进化分析得出,所检出的HAdV-3腺病毒均为Clade2进化分支。2019年浙江地区存在儿童HAdV-3肺炎的暴发流行,该病毒株未发生大的变异,均为Clade2进化分支。1~7岁的儿童为主要的易感人群。

    2022年01期 v.38 90-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 1585K]
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  • 抗GⅡ.3型诺如病毒阻断型单克隆抗体的制备和鉴定

    霍玉奇;郑礼钧;刘金瑾;

    诺如病毒(norovirus,NoV)是引起非细菌性急性肠胃炎的主要病原体之一。目前国内外还没有关于抗GⅡ.3NoV组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)阻断型单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)的报道,本研究制备了抗GⅡ.3型NoV HBGA阻断型mAbs,并对这些抗体特性进行了初步的鉴定。采用纯化的GⅡ.3型(GenBank登录号:KY767665)NoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)免疫BALB/c小鼠。将GⅡ.3,GⅡ.4(GenBank登录号,KF306214),GⅡ.3S/GⅡ.6P,GⅡ.6S/GⅡ.3P,GⅡ.4-VP1/GⅡ.3-P2主要衣壳蛋白(VP1)抗原或嵌合抗原作为包被抗原采用间接ELISA方法分别对细胞克隆株进行筛选,采用体外HBGA-VLP结合阻断实验对筛选的mAbs进行阻断活性鉴定,利用基于涵盖GⅡ.3突环区(protruding domain,P区)的重叠多肽ELISA和western blot(WB)对阻断抗体结合位点进行特性分析。体外HBGA-VLPs阻断实验显示三株细胞分泌抗体具有阻断活性。挑选目标株制备腹水并对mAbs进行纯化。WB结果显示三株HBGA阻断型mAbs只识别非变性的GⅡ.3 VP1蛋白;基于GⅡ.3 P区重叠多肽的间接ELISA结果显示三株HBGA阻断型mAbs与被检测多肽无结合活性。本研究制备了具有HBGAs阻断活性的GⅡ.3 NoV特异性mAbs,全部只识别非变性的GⅡ.3 VP1蛋白,且结合位点位于GⅡ.3 VP1 P2区。抗GⅡ.3 NoV HBGAs阻断型mAbs的获得为后续研究GⅡ.3 NoV的进化、感染机制和HBGAs结合位点提供了原材料。

    2022年01期 v.38 98-105页 [查看摘要][在线阅读][下载 1064K]
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  • 一株GⅠ.3[P13]型诺如病毒的全基因组序列分析

    李焱;张益;吴瑞;余鹏博;喻勇新;张辉;马超锋;

    诺如病毒(Norovirus,NoV)是人类非菌性急性肠胃炎的主要病原,GⅠ和GⅡ基因群在人类中流行较广,但对GⅠ群少有研究。为分析西安市2018年一株GⅠ型诺如病毒CHN/Xian/18N239的全基因组基因特征,本研究对某幼儿园急性肠胃炎病例肛拭子检出的一株GⅠ型诺如病毒,使用下一代测序方法对其全基因组测序,用Blastn比对和诺如病毒在线定型工具分析CHN/Xian/18N239的基因型,用MEGA-X对其进化分析,用Bioedit对其同源性、氨基酸变异和熵值进行计算,并用SWⅠSS-MODEL和PyMOL2.3.2预测和可视化三维结构。CHN/Xian/18N239株全长7 684 nt,开放阅读框(ORF)1~3分别长5 316 nt(84~5 399 nt)、1 635 nt(5 383~7 017 nt)和648 nt(7 017~7 664nt),ORF1和ORF2的重叠区长17 nt。Blastn比对显示其与GⅠ.3[P13]型2019年中国台湾株(MN922738)核苷酸同源性最高(98.91%)。系统进化分析表明其为GⅠ.3[P13]型,与韩国2017-2018年、中国台湾2018-2019年流行株核苷酸同源性为98.7%~99.3%。与参考序列U04469比,变异位点共75个,主要在P2区,其中在人外周血抗原结合位点Ⅱ有1个,且在A-Loop、T-loop、U-loop和S-loop区的三维结构改变较大。VP2区熵值为0的位点最少,VP1区易突变位点最多。应加强对本地区诺如病毒分子型别监测,提高防控能力。

    2022年01期 v.38 106-114页 [查看摘要][在线阅读][下载 1155K]
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  • CV-A16感染沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化分析

    蔡思铭;岑红霞;廖赵妹;陈剑标;

    柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)是导致手足口病的病原体之一,CV-A16感染后宿主的外周血细胞的细胞因子表达变化的报道较少,也未见有关血清中细胞因子含量在感染前后的表达变化。为了分析CV-A16感染的不同严重程度的沙鼠细胞因子和趋化因子的动态变化。通过腹腔注射CV-A16构建CV-A16感染发病模型,应用流式细胞术、实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测病毒载量、血清炎症因子和趋化因子水平动态变化。CV-A16感染后重症沙鼠的临床症状,包括体重下降程度、临床症状分值以及死亡率均显著高于轻症沙鼠,并且重症沙鼠外周血白细胞比例和升高趋势总体上高于轻症感染沙鼠;重症感染沙鼠全血中细胞因子IL-2、IL-12、IFN-γ和TNF-α的mRNA转录水平上调,IL-4、IL-10、IL-8和IP-10的mRNA转录水平下调;并且CV-A16感染后重症沙鼠血清中的TNF-α和IFN-γ含量显著上升,IL-8和IP-10的含量显著下降。结论为重症沙鼠全血和血清中存在多种趋化和炎症因子上调,可能与Th1炎症失调有关。

    2022年01期 v.38 115-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 1068K]
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  • 发热伴血小板减少综合征患者血清内抗体IgG中和活性及其影响因素分析

    曹卫友;王欣;刘硕;曹峻鸣;闫旭;卢武哲;乔媛媛;王佑春;

    发热伴血小板减少综合征(SFTS)的病原体为发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒,目前尚无特异性防治措施。本研究旨在明确SFTS患者不同时期血清内抗体的中和活性,为将来开发单克隆中和抗体药物和疫苗设计提供可靠的血源。7名患者15份血清收集后采用protein A亲和纯化抗体,SDS-PAGE分析抗体的纯度和分子量大小,中和实验评估抗体的中和能力,结果发现7个患者15份血清中4个恢复期患者血清内抗体具有广谱中和能力,其余3个患者未产生中和抗体,所有患者急性期均未产生IgG中和抗体,产生中和抗体的个体内抗体的中和能力随病毒消长而发生改变。因此,机体感染后部分康复者建立了特异性体液免疫力。此外,SFTS患者年龄亦影响中和抗体的产生,高龄并不预示着免疫力逐渐丧失,推测个体差异决定了免疫力强弱。具有广谱中和能力的血源将为开发治疗SFTS的候选抗体药物以及疫苗设计提供可能。

    2022年01期 v.38 123-128页 [查看摘要][在线阅读][下载 973K]
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  • 人疱疹病毒6型感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达的变化及生物学意义

    王锋存;刘军莉;双杰;

    人疱疹病毒6A型(Human Herpesvirus 6A,HHV6A)感染与神经胶质瘤的发病有关,但具体机制尚不清楚。HHV6A感染能够增加miR-301a的表达,而miR-301a表达在胶质瘤发病中起促进作用。为了观察HHV6A感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达的变化及生物学意义,本研究培养了神经胶质瘤细胞株U87、U251、U373,HHV6A感染后检测了miR-301a及RUNX3(Runt-Related Transcription Factor 3,RUNX3)的表达;U87细胞在感染HHV6A的同时分别转染阴性对照(Negative Control,NC)miR、miR301a抑制物、NC siRNA、RUNX3 siRNA,检测细胞增殖、迁移、侵袭;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-301a靶向RUNX3。结果显示,HHV6感染的U87、U251、U373细胞中miR-301a表达增加、RUNX3表达降低且HHV6感染的U87中miR-301a上调、RUNX3下调幅度最大。在U87细胞中,与对照组比较,HHV6组增殖、迁移、侵袭增强,RUNX3表达降低;与miR-NC+HHV6组比较,miR-301a敲低+HHV6组增殖、迁移、侵袭减弱,RUNX3表达增加;与HHV6+miR-301a敲低+si-NC组比较,HHV6+miR-301a敲低+si-RUNX3组增殖、迁移、侵袭增强,RUNX3表达降低;经双荧光素酶报告基因验证,miR-301a靶向RUNX3基因mRNA 3'UTR。结果表明,HHV6A感染神经胶质瘤细胞中miR-301a表达增加,进而通过靶向抑制RUNX3促进细胞增殖、迁移、侵袭。本研究初步探究了HHV6A感染促进神经胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的作用及分子机制,进而为深入认识神经胶质瘤恶性生物学行为的调控机制及发病机制提供了实验依据,也为今后发现神经胶质瘤新的防治靶点提供思路。

    2022年01期 v.38 129-138页 [查看摘要][在线阅读][下载 1457K]
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  • 轮状病毒感染患者外周血单个核细胞的转录组学分析

    李伯阳;赵艳玲;田玉玲;李慧莹;章青;李丹地;孙利伟;庞立丽;裴银辉;段招军;

    轮状病毒(Rotavirus,RV)是引起急性肠胃炎的主要病原体,分析RV感染患者的人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中差异表达基因(Differentially expressed genes,DEGs)有利于探讨人PBMC在清除RV中的作用。为此,本研究采集2019年2月-2019年6月长春儿童医院中RV感染患者和健康儿童血液,分离PBMC,通过转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术比较RV感染患者与健康儿童之间的RNA表达图谱,借助基因本体论(Gene Ontology,GO)数据库功能富集分析、京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、Reactome通路富集分析DEGs,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)技术进行验证。结果显示,与健康对照组相比,RV感染轻症患者PBMC中有1 619个DEGs;重症患者PBMC中有2 816个DEGs,主要与干扰素(Interferon,IFN)反应、中性粒细胞、溶酶体、核小体、染色质等相关。qPCR验证轻症患者干扰素刺激基因(IFN-stimulated genes,ISGs)15表达上调,白介素(Interleukin,IL)1β表达下调;重症患者IL15、ISG15表达上调,IL1β表达下调,与转录组结果相一致。本研究提示,RV感染可能激活人I型和II型IFNs反应抵御病毒感染,但也会抑制溶酶体相关基因,对细胞自噬过程产生影响。

    2022年01期 v.38 139-148页 [查看摘要][在线阅读][下载 1735K]
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  • 2018-2019年云南省部分地区鼠类携带汉坦病毒基因型别分析

    尚翠;杨丽芬;杜珊珊;Joseph O.Shaibu;周济华;黄晓霞;韩茜;李川;李阿茜;王芹;梁米芳;王世文;李德新;冯云;李建东;

    为了解云南省汉坦病毒的分子流行病学特征,本研究在云南省祥云县、泸西县、禄丰县和楚雄市4个地区布点,采集鼠类动物标本,运用实时荧光RT-PCR检测鼠肺标本中的汉坦病毒中的汉滩病毒和首尔病毒核酸,通过PCR扩增S节段的全基因序列,并进行核苷酸同源性分析和遗传进化分析。结果共捕获鼠类动物70份,包含10个鼠种,其中褐家鼠30只,占42.9%,其次是鼩鼱12只,占17.1%;核酸检测阳性标本19份,均为首尔病毒,检出率为27.1%,源自祥云县的标本检出率在四个地区中最高(32.0%)。从鼠肺标本中扩增得到8条汉坦病毒S节段全基因序列,相似性为87.0%~99.7%,遗传进化分析显示基因序列聚集形成2个分支,一个分支属于S1亚型,另一个分支在遗传进化分析和blast比对分析中与其他亚型同源性均小于90%,属首尔病毒中独立的新的遗传进化分支,提示了云南省鼠类动物间多基因亚型首尔汉坦病毒流行,应进一步关注由宿主动物溢出感染人的潜力。

    2022年01期 v.38 149-155页 [查看摘要][在线阅读][下载 970K]
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动物病毒研究论著

  • 草原毛虫核型多角体病毒新分离株的基因组测序与分析

    王金昌;周敏;邓菲;范兆军;李鹏;占智高;况文东;关丽梅;靳亮;王君;

    草原毛虫(Gynaephora ruergensis Chou et yin)是我国高原牧草中的一种有害害虫。草原毛虫核型多角体病毒新分离株(EupsNPV-Gr)具有典型的杆状病毒特征,呈单粒包埋型病毒粒子,ODV颗粒呈不规则的多边形,直径为1.0μm~1.35μm。EupsNPV-Gr能有效杀灭草原毛虫幼虫,它对草原毛虫的半致死浓度LC_(50)为4×10~4PIB/mL,是一种理想的生物防治剂。本研究对第一个EupsNPV-Gr基因组进行了测序和鉴定。EupsNPV-Gr基因组全长140 684bp,包含134个开放阅读框。它与茶毛虫核型多角体病毒(EupsNPV)关系最为密切,序列同源性高达99%。系统进化分析表明,EupsNPV-Gr属于杆状病毒科alpha杆状病毒属,根据公认的种属划分标准,EupsNPV-Gr是EupsNPV的一个株系。新报道的基因组为研究该物种毒力的分子机制提供了基础。

    2022年01期 v.38 156-167页 [查看摘要][在线阅读][下载 1363K]
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  • 基因Ⅲ型新城疫病毒感染鸡外周血单个核细胞后的靶细胞分析

    孙一帆;陆小龙;王晓泉;胡顺林;刘秀梵;刘晓文;

    新城疫(ND)是鸡新城疫强毒株引起的一种鸡的烈性传染病,目前疫苗接种是防治该病的主要手段。临床上曾分离到与中等毒力疫苗株Mukteswar高度同源的强毒株JS/7/05/Ch,其通过静脉注射后毒力显著增强。为了探究JS/7/05/Ch经血液途径毒力增强的机制,本研究选用鸡外周血单个核细胞(PBMC)作为研究模型,分析基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞。细胞分选结果表明病毒感染可诱导PBMC中单核细胞的增殖。实验组病毒感染后单核细胞相对占比上升,感染后1d Mukteswar组(Muk组)单核细胞占比16.3%,JS/7/05/Ch组(JS组)为13.21%,而对照组单核细胞仅占比3.18%。荧光定量PCR测定分选后各细胞中的病毒载量,感染后3d JS组单核细胞中的病毒含量与感染后1d相比极显著性增加(P<0.01)。感染后1d病毒以感染淋巴细胞为主,而在感染后3d单核细胞的相对病毒含量均超过淋巴细胞占据主导地位,Muk组和JS组分别为54.2%和60.2%。综上所述,基因Ⅲ型NDV在PBMC中的靶细胞是单核巨噬细胞。这为进一步研究这对基因Ⅲ型模式病毒毒力差异的机制奠定了一定基础。

    2022年01期 v.38 168-174页 [查看摘要][在线阅读][下载 1298K]
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综述

  • SARS-CoV-2核衣壳蛋白相分离研究进展

    姜子玮;李晨辉;赵颖;付温爽;赵铁军;金志刚;

    新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndromes coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引发的新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 19,COVID-19)目前正在全球范围内对公众健康和安全造成重大威胁。冠状病毒的核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白主要作为病毒关键结构蛋白,负责与病毒基因组RNA结合组装成核衣壳,并进一步与膜(Membrane,M)蛋白结合组装成病毒体(Virion)。此外,N蛋白兼具调节蛋白功能,在抑制宿主天然免疫反应以及通过结合复制-转录复合体(Replication transcription complex,RTC)促进病毒转录和复制等过程中也发挥了重要作用。最近一些研究相继揭示了SARS-CoV-2 N蛋白具有与RNA或其他蛋白发生液-液相分离(Liquid-liquid phase separation,LLPS)的能力,并且N蛋白的相分离正逐渐被证实在其发挥结构蛋白和调节蛋白功能的过程中均具有重要作用。本文主要就SARS-CoV-2 N蛋白相分离的最新研究成果进行综述,并就N蛋白相分离作为治疗COVID-19的潜在药物靶点加以讨论。

    2022年01期 v.38 175-186页 [查看摘要][在线阅读][下载 1118K]
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  • 抗病毒肽作为COVID-19潜在治疗药物的研究进展

    祁均梅;宋昕宇;高艺恬;吴迪;

    随着新型冠状病毒(SARS-CoV-2)疫情的迅速蔓延,目前该疾病已发展成为世界范围流行病。世界卫生组织WHO在2020年2月11日将该疾病正式命名为Coronavirus disease(COVID-19)。新型冠状病毒肺炎严重威胁着人们的生命财产安全,安全高效抗病毒类药物的开发是目前亟需解决的重要问题。研究报道,很多抗病毒肽(Antiviral peptides,AVPs)显示出良好的抗病毒活性,结合当前临床抗新冠病毒乏力的情况,本文对冠状病毒感染过程以及抗病毒肽的潜在应用前景进行概述,以期为开发新型抗病毒药物提供新的思路。

    2022年01期 v.38 187-195页 [查看摘要][在线阅读][下载 1018K]
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  • 流感相关中枢神经系统并发症研究进展

    雷雨璇;舒跃龙;房师松;

    流感病毒是一种传染性强、传播速度快,可引起急性呼吸道感染的病毒。流感病毒感染后主要引起上呼吸道系统疾病,也可能导致肺炎等临床症状。近年来,流感相关中枢神经系统并发症逐渐引起了国际上的关注,美国、英国、澳大利亚、日本、中国台湾、中国香港等国家和地区均有相关的病例报道。其中大部分中枢神经系统并发症为热性惊厥,症状较轻,预后普遍良好,但由于各种原因少部分患者可能患流感相关脑病/脑炎,其中急性坏死性脑病死亡率较高并可能导致患者长久神经后遗症,因此应得到医疗工作者的重视。本文围绕流感中枢神经系统并发症,介绍其发病特征、易感人群、诊断与治疗等方面研究进展。

    2022年01期 v.38 196-204页 [查看摘要][在线阅读][下载 1032K]
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  • 欧亚类禽猪流感病毒病原学研究进展

    冯兆民;朱闻斐;舒跃龙;

    欧亚类禽猪流感病毒被认为是引起下次流感大流行可能性最大的动物流感病毒之一。1979年,第一次在猪群中分离到欧亚类禽猪流感病毒,该病毒随后在欧洲流行。欧亚类禽猪流感病毒从2005年起在我国猪群中广泛存在,偶尔可突破种属屏障感染人;在江苏、河北和湖南等地区已出现人感染欧亚类禽猪流感病毒,由此对公共卫生和生猪养殖业均有一定的威胁和影响。本文综述了欧亚类禽猪流感病毒的流行情况、病原学特征及其相关致病分子机制研究进展,旨在为欧亚类禽猪流感病毒的风险评估提供科学依据。

    2022年01期 v.38 205-211页 [查看摘要][在线阅读][下载 982K]
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  • 肠道病毒71型致神经元病变的机制研究进展

    陈天扬;刘正芸;王欢;

    中枢神经系统感染是由病原体侵犯中枢神经系统引起的一类具有较高的发病率和死亡率的疾病。病毒是引起中枢神经系统感染的重要病原体之一,其中肠道病毒71型在继发神经系统症状的重症手足口病患儿中较为常见。EV71致神经元病变是其感染中枢神经系统的基础,阐明肠道病毒71型致神经元病变的机制,不仅可以促进基础病毒学研究,也能为抗病毒药物的开发提供思路,对临床肠道病毒71型致中枢神经系统感染的治疗提供支持。本文主要从肠道病毒71型侵入神经元的受体途径、损伤神经元的线粒体途径、诱导凋亡与自噬、感染胶质细胞后对神经元的旁观者效应、免疫病理机制以及病毒自身因素等多个方面,对肠道病毒71型致神经元病变机制展开综述。

    2022年01期 v.38 212-218页 [查看摘要][在线阅读][下载 1175K]
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  • 肠道菌群与病毒性肺炎关系的研究进展

    王方岩;章启豪;周锦慧;岑建柯;邹咪莎;李睿心;陈佳静;钱范宇;薛向阳;李校堃;

    在21世纪头20年里,呼吸道病毒造成的地区性乃至世界性的流行已经发生多次,而疫情的暴发严重威胁人类健康与生存,但临床上,仍缺乏针对病毒的特异性治疗手段。随着肠道微生态相关研究的广泛开展,肠道菌群在哮喘,纤维化及细菌性感染等多种肺部疾病的发病及防治中发挥着重要作用,成为"肠-肺轴"的关键枢纽。病毒性肺炎与肠道微生态间也存在着紧密的相互联系,通过改善肠道菌群,对呼吸病毒感染具有较好的防治作用。其内在机制主要涉及到:通过增强肠道黏膜屏障功能、减少继发性细菌的感染;通过菌体成分或者代谢产物如短链脂肪酸,色氨酸代谢产物等提高固有样淋巴细胞(Innate lymphoid cells,ILC)、单核-巨噬细胞、树突状细胞、自然杀伤细胞(Natural killer,NK)、粒细胞等固有免疫细胞的抗病毒免疫功能及调节Th17/Treg平衡抑制过度的炎症反应等。本文将系统回顾已发表的文章,对肠道菌群在病毒性肺炎方面的研究作系统的阐述,以求为研究者在病毒性肺炎的机制探究和防治方面提供帮助。

    2022年01期 v.38 219-234页 [查看摘要][在线阅读][下载 1284K]
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  • 猪流行性腹泻病毒单克隆抗体及其抗原表位的研究进展

    张志榜;彭维祺;

    猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(PED virus,PEDV)引起的一种严重危害养猪生产的常见疫病。近年来,由于新的PEDV变异毒株的出现,许多国家的养猪业遭受了巨大的经济损失。PEDV也因此受到更多关注,关于PEDV的研究报道也日渐增多。基于国内外有关PEDV的最新研究进展,本文系统归纳和分析了PEDV结构蛋白和非结构蛋白单克隆抗体以及单克隆抗体识别的特异性抗原表位,以期为开发鉴别诊断方法和表位疫苗等提供信息。

    2022年01期 v.38 235-245页 [查看摘要][在线阅读][下载 1029K]
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  • 非洲猪瘟病毒研究进展:组学视角

    潘力;罗瑞;王涛;罗玉子;孙元;仇华吉;

    非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种致死率可高达100%的猪烈性传染病。ASF的传播方式复杂多样,目前无商品化疫苗可用,仅能依靠检疫结合扑杀进行防控,严重威胁全球养猪及相关行业的健康发展。阻碍ASF疫苗研发的主要因素是ASFV的基因型众多、结构复杂,以及对ASFV致病和免疫逃逸机制的认识不足。本文从基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等层面多角度综述ASFV的生物学特性及其致病和免疫逃逸机制,以期揭开ASF这个"杀手"的神秘面纱,为ASFV的致病机制研究和ASF的防控提供参考。

    2022年01期 v.38 246-256页 [查看摘要][在线阅读][下载 1235K]
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