病毒学报

2010, v.26(06) 425-431

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高嗜肝性8型重组腺相关病毒体内转导法制备乙型肝炎病毒持续感染小鼠模型
Establishment of Hepatitis B Virus(HBV) Chronic Infection Mouse Model by in vivo Transduction with a Recombinant Adeno-associated Virus 8 Carrying 1.3 Copies of HBV Genome(rAAV8-1.3HBV)

董小岩;尉迟捷;王刚;田文洪;陆月;张风卫;王文;王岳;谭文杰;吴小兵;

摘要(Abstract):

用高嗜肝性的重组8型腺相关病毒(Recombinant adeno-associated virus type8,rAAV8)载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)基因组(ayw亚型)体内转导法,建立持续表达HBV抗原的C57BL/6小鼠模型。首先,制备并纯化了携带1.3拷贝HBV基因组(ayw亚型)的重组8型腺相关病毒(rAAV8-1.3HBV);将rAAV8-1.3HBV以剂量2×10e11vg/只注射C57BL/6小鼠(Viralgenome,vg);在不同时间点实施尾静脉采血,采用ELISA方法监测血清中HBsAg和HBeAg的水平及动力学变化;10周后处死小鼠,取血液、肝组织样本,提取基因组DNA,荧光定量PCR检测HBVDNA拷贝数;利用鉴定HBVDNA环化形式的特异性引物进行PCR扩增以检测肝组织中环化的HBVDNA,并检测HBV抗原特异性的免疫组化和肝脏病理变化。结果显示,注射rAAV8-1.3HBV的3只C57BL/6小鼠第1周开始在血液中检测到HBsAg和HBeAg的表达,并持续至第10周均为阳性,其中HBsAg的表达水平经历了一个上升-下降-再上升的过程(注射后第4周时最低,第6周后维持较高水平),而HBeAg表达水平则持续阳性且比较稳定。荧光定量PCR结果显示,3只小鼠10周后血清中HBV DNA的拷贝数分别为4.2×103、3.6×103、3.6×103、2.5×103、2.5×103copies/mL,肝脏中则分别为8.0×103copies/mL,肝脏中则分别为8.0×106、5.7×106、5.7×106、2.6×106、2.6×106copies/g肝组织。在3只小鼠肝组织中均检测到环化HBV DNA,提示AAV8载体携带的线性HBV DNA成功回复成环化HB VDNA。免疫组化分析显示3只小鼠肝脏中均存在HBsAg和HBcAg表达;体内转染10周后肝脏组织切片的HE染色分析显示未见明显的炎性细胞浸润及组织结构异常。结果表明,本研究利用高嗜肝性重组8型腺相关病毒载体携带1.3拷贝乙型肝炎病毒基因组(ayw亚型)体内转导C57BL/6小鼠,成功地建立了HBV病毒在肝内稳定复制并持续表达HBV抗原的小鼠模型,为进一步研究HBV慢性持续感染的机制与应用于药物以及疫苗评价打下了基础。

关键词(KeyWords): 动物模型;乙型肝炎病毒;AAV8;持续感染

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 肝炎相关肝癌生物治疗新途径新制品的研究和应用(No.2008ZX10002-023);; 病毒基因工程国家重点实验室开放课题(2008-S-0003);; 新药创制科技重大专项(No.2009ZX09102-237)资助

作者(Authors): 董小岩;尉迟捷;王刚;田文洪;陆月;张风卫;王文;王岳;谭文杰;吴小兵;

DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.002130

参考文献(References):

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