- 石立成,杭长寿,李德新,袁劲松,金冬雁,宋干
用标准的cDNA合成与多聚酶链式反应(PCR)相结合的方法,克隆了我国家鼠型出血热病毒R22株M片段cDNA,完成了全部核苷酸序列分析。病毒M片段由3656个核苷酸组成,病毒互补的RNA由一个单一的开放读码框架组成,编码1134个氨基酸。其核苷酸序列与SR-11、Hantaan、HallnasB1病毒相比同源性分别为95％、76％和52％,推导的氨基酸序列同源性为96％、74％和53％。在R22G1编码的序列中有5个糖基化位点,全部与SR-11保守,与Hanta-an和HallnasB1分别有4个和3个保守,G2编码的序列中有1个糖基化位点,4株病毒全部保守,而且4株病毒M片段在其开放读码框架内的半胱氨酸残基高度保守,亲、疏水基团的分布也表现出很高的相似性,提示G1和G2蛋白可能具有相似的结构与功能。
1991年04期 295-302页 [查看摘要][在线阅读][下载 472k] [下载次数：36 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 王双平,阮力,刘洪迪,朱既明
本文利用DNA多聚酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)技术克隆了天坛株痘苗病毒J6R启动子(F_(12)启动子),表明PCR技术可以一次性地对需克隆的痘苗病毒启动子进行扩增与修饰。对J6R启动子的功能研究结果显示,J6R启动子能有效启始lacZ基因在大肠杆菌中的表达。该启动子为早期启动子,但有部分晚期活性,在哺乳动物细胞中的功能较报道的WR株F12启动子弱。对此进行了分析和讨论。
1991年04期 303-308页 [查看摘要][在线阅读][下载 397k] [下载次数：56 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 赵小侠,曹雷,毛冬丽,张爱臣,王平,侯云德
将含有乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)基因的DNA片段,按转录的相反方向插入痘苗病毒P11启动子下游,构建成重组质粒pJ16/HBS和pHBS-1。使用磷酸钙沉淀技术将这些质粒转染能分泌HBsAg并已被痘苗病毒感染的细胞,观察到HBsAg的合成被特异性地抑制,抑制率最高达95％以上。
1991年04期 309-314页 [查看摘要][在线阅读][下载 220k] [下载次数：31 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 杨安道,姜文榕,袁刚,张惠芳,歧天茂
构建了同时带有乙型肝炎病毒表面抗原基因和大肠杆菌的β-半乳糖苷酶基因的杆状病毒转移载体质粒pVL941lacHBS。应用磷酸钙沉淀技术将pVL941lacHBS DNA转入事先用AcNPV感染过的Sf9细胞,在显色剂X-gal存在下,筛选无多角体的蓝色蚀斑。经过若干次蚀斑纯化,最后获得含乙肝病毒表面抗原基因和β-半乳糖苷酶基因的重组杆状病毒R-AcV941LS。 用R-AcV941LS感染Sf9细胞,在感染后72～96小时,用RPHA和RIA分别检测组织培养上清液和细胞裂解液中的乙型肝炎病毒表面抗原含量。结果,组织培养上清液为3.83μg/1×10~6～2×10~6细胞;细胞裂解液为4.39μg/1×10~6～2×10~6细胞。乙型肝炎病毒表面抗原的合成总量为8.22μg/1×10~6～2×10~6细胞。免疫电镜观察显示表达产物呈约22nm的球形颗粒。小鼠免疫接种实验结果表明,以R-AcV941LS感染Sf9细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原与在哺乳动物细胞系表达的乙型肝炎病毒表面抗原具有相近似的免疫原性。
1991年04期 315-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 825k] [下载次数：63 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 曾蔚蓝,刘崇柏
乙型肝炎病毒C基因3’端切去至少119个碱基,加上终止信号,插入到质粒pBV220中,它具有噬菌体P_RP_L串联启动子和CItS857温度敏感基因,表达条件从30℃上升到 42℃。HBeAg获得高效表达,ELISA效价大于40 000,只含少量HBeAg。用抗-HBe和抗-HBc对表达的HBeAg做阻断抑制试验显示,表达的HBeAg与血清HBeAg特异性完全相同,分子量在15 000道尔顿左右,表达产物呈稳定状态。
1991年04期 323-330页 [查看摘要][在线阅读][下载 600k] [下载次数：59 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 梅雅芳,任贵方,朱既明
研究了哺乳动物细胞分泌的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)纯品的理化及生物学性状。结果表明:此种HBsAg在CsCl中的浮力密度是1.21g/cm~3;快速液相层析的SuperoseHR6层析柱上呈现3个峰,中间是一个主峰,两侧各一小峰;经Mono Q柱层析呈现一个对称峰,证明了HBsAg颗粒所带电荷的均一性;以SDS-PAGE和凝胶扫描方法分析HBsAg的多肽,P23、gp27和gp30各占65％、20％和10％,另有5％的二聚体存在;N-末端的氨基酸序列与转入细胞的目的基因所编码的序列相同;HBsAg在4℃和-20℃储存较稳定,室温条件保存时间不宜过长。动物实验证明:用与血源HBsAg疫苗同等剂量的基因工程HBsAg疫苗接种Balb/C小鼠,可获得比血源疫苗高2.64倍的免疫效果。此外,经过福尔马林处理的疫苗较未处理的疫苗有较强的免疫原性。
1991年04期 331-337页 [查看摘要][在线阅读][下载 665k] [下载次数：75 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 陈晓红,严冬,郑葆芬,陶鸿根,丁令玫,Hung Fan
质粒pSF11含有小鼠白血病病毒(SRSV)基因组5kb Bam H Ⅰ片段。应用限制性内切酶分析及Southern印迹杂交技术,确定了长末端重复区(Long terminal repeats,LTR)在pSF11上的位置。pSF11经Bg1 Ⅱ酶解,Klenow酶补平5’粘性末端,碱性磷酸酯酶脱磷后与EcoR Ⅰ Linker连接,转化大肠杆菌C600,经EcoRⅠ酶切筛选得到重组子 pER 1。pER 1经ClaⅠ+EcoR Ⅰ酶切,电泳回收含SRSV LTR的2.55kbDNA,与p63-2(含Moloney小鼠白血病病毒(leukemia virus,M-MuLV)完整基因组)的ClaⅠ+EcoRⅠ14.1kbDNA连接,转化C600受体菌,得到一个M-MuLV 3’LTR被SRSV LTR取代的重组质粒pMS。纯化后转染NIH 3T3细胞,经XC合胞试验及逆转录酶活性测定证明,转染细胞含有M-MuLV与SR-SV的重组病毒MSV,将MSV经皮下接种到新生的NIH Swiss小鼠,通过对小鼠发病阶段血像、大体解剖以及组织病理学检查,发现该重组病毒MSV具有与SRSV极其相似的致病特征。
1991年04期 338-345+387页 [查看摘要][在线阅读][下载 1397k] [下载次数：28 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 陈立宽,辛朝安,黄伟明,王恒栋,卓金换,庄琰,朱广勤,李建全
从疑似鸡病毒性关节炎的自然病鸡中,分离到一株病毒(VAV-1)。将VAV-1接种鸡胚卵黄囊,可使鸡胚死亡,胚体出血呈紫红色。该病毒可在鸡胚成纤维(CEF)、幼鸡肾(CK)、绿猴肾(Vero)和幼仓鼠肾(BHK-21)等细胞上增殖,引起细胞病变(CPE)。幼鸡人工感染VAV-1后,可从发病鸡分离到相似病毒。病毒抵抗乙醚、氯仿、pH3、3％甲醛溶液和胰蛋白酶,60℃6小时病毒未完全灭活。为双链RNA病毒.电镜观察,病毒颗粒呈球形或近似六角形,有双层衣壳,外径63～75nm。琼脂凝胶沉淀(AGP)试验,出现禽呼肠孤病毒(ARV)特异性交叉反应,证明分离病毒VAV-1株为ARV。
1991年04期 346-350+388页 [查看摘要][在线阅读][下载 651k] [下载次数：153 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：3 ] - 夏咸柱,钟志宏,林庆年,袁书智,武银莲
研究了人工感染犬传染性肝炎病毒(Infectious canine hepatitis virus,ICHV)的犬的肝组织血凝特性,发现以往患传染性肝炎(ICH)的犬肝中HA抗原检测不出的原因,不是因为肝组织中的病毒量不足或病毒不完整,而是因为组织中含有不耐热的血凝抑制物和可与完整ICHV竞争红细胞膜上的HA受体的游离单价HA抗原之故。通过加热处理消除非特异性血凝抑制物和加入具有共同亚群抗原的犬Ⅱ型腺病毒的免疫血清,使此种游离单价HA抗原凝聚成具有HA活性的多价HA抗原的办法,能用于ICH微量HA诊断。
1991年04期 351-354页 [查看摘要][在线阅读][下载 187k] [下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 刘中大,彭学贤,曲士绵,张鹤龄,莽克强,Wing Lam Sung
本文采用双股交换接头(Crossover linker)技术对已建立的大麦条纹花叶病毒新疆株(BSMV-XJ)RNA_2 cDNA重组质粒pUBS_(112)进行修饰。使cDNA两端不必要的poly(dG):poly(dC)尾准确地缺失,同时补上了cDNA中相对于RNA_2 5’端区缺少的三个核苷酸TAA,并在cDNA末端插入了预定的限制酶切顺序。通过原位杂交筛选、酶切图谱分析、cDNA两端序列测定等手段,证明已获得BSMV-XJ RNA_2组分的全长cDNA克隆。
1991年04期 355-361页 [查看摘要][在线阅读][下载 831k] [下载次数：26 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 关书奎,张建红,张立人,李淑琴,张力军
山楂粉蝶核型多角体病毒多角体在扫描电镜下为不规则的多面体,表面有一个乳头状凸起。内部蛋白质晶格亚单位呈规则的排列,晶格亚单位中心之间的距离约为59.8埃。该病毒为多粒包埋型,病毒束大多数包含1～10个病毒粒子。病毒DNA为环状大分子。 多角体蛋白仅含有一种多肽,分子量为28 800道尔顿,病毒束含有至少17种结构多肽,分子量范围在10 600～95 500道尔顿之间。多角体蛋白中Asp、Glu、Lys、Val含量较多;Cys、Met、His含量较少。病毒DNA经Hind Ⅱ、Pst Ⅰ、BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ酶解,分别可得19、14、10和23个片段,总分子量是64.3×11~6道尔顿。
1991年04期 362-368+389-345页 [查看摘要][在线阅读][下载 1415k] [下载次数：38 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 王平,郭军,白春礼,侯云德
<正> 核酶(Ribozyme)是具有催化RNA切割反应功能的RNA,它可以特异性地切割RN-A。最近,核酶的一级结构已经被证实,其与底物结合时所形成的二级结构如锤头状(Hammerhead)、发夹型(Hairpin)结构,亦得到初步证实。因此,能够设计并人工合成核酶,通过特异性破坏RNA,阻断其功能,从而有效地阻止病毒的复制和繁殖。这是近年来继反义RNA之后发现的又一个抑制基因表达的有力工具,开辟了分子生物学的一个新领域。
1991年04期 369-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 297k] [下载次数：173 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 陶三菊,王焕琴,过迪,杨冬荣,孙晓梅,陈伯权,刘琴芝,郁文芳,孙月英,王树惠
<正> 用小鼠腹腔细胞等作为滋养细胞培养人杂交瘤,国内外均有报道。我们曾建立了人包皮传代细胞株。本文利用我们所建立的人包皮细胞做滋养细胞,并与小鼠腹腔细胞及不加滋养细胞的空白作对照,观察人包皮细胞对杂交瘤克隆生长的影响。 将人包皮细胞和小鼠腹腔细胞分别接种同一96孔板,次日将两株不同的人杂交瘤细胞1B4及1C8稀释至每毫升含10个或50个细胞,每孔接种0.1ml,使每孔分别含1个及5个细胞,经不同时间观察每孔杂交瘤克隆的生长情况,记录有杂交瘤生长的孔数。表1结果表明,
1991年04期 372-374页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k] [下载次数：14 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 聂子林,俞永新,王竟梅,曲晓素,严子林
<正> 我们曾发现,HEPES对流行性出血热病毒感染的组织培养细胞具有增强细胞病变(CPE)作用。为了进一步了解HEPES对其它病毒致细胞病变的诱导增强作用,本文选择在组织培养细胞内不易形成CPE的狂犬病毒进行实验观察。结果,狂犬病毒感染的BHK21细胞和Vero细胞经HEPES处理后均出现明显的CPE,且CPE能被抗狂犬病毒血清中和抑制。这一发现为建立以CPE为基础的狂犬病毒试验检测技术开辟了一条新的途径。 一、细胞 Vero细胞从ATCC引进;BHK21细胞来自美国泛里特军事医学研究所。两
1991年04期 375-377+390页 [查看摘要][在线阅读][下载 808k] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 谷淑燕,黄天民,苗懿红,赵玉和,韩春卉,肖瑶,阮力,朱既明,H·Wolf
<正> Epstein-Barr(EB)病毒的原发感染发生在儿童时期,在我国3～5岁儿童的感染率为70％～90％。感染后终生带毒,并经唾液不断排出病毒。我国南方是鼻咽癌高发区,其发病率和死亡率均占恶性肿瘤的第一位。早期诊断方法的改进和早期治疗,使鼻咽癌治疗后的5年生存率明显增加,但不能降低发病率。EB病毒疫苗有可能成为控制该病的有效手段之一。 Epstein等人从淋巴母细胞株(B95-8细胞)细胞表面提取EB病毒膜抗原(MA),用于免疫棉顶猴能产生中和抗体。免疫动物能抵抗EB病毒攻击后所诱发的恶性淋巴瘤。该中和抗体在体外能中和EB病毒的转化活性。EB病毒的主要膜抗原(MA)是由分子量220kD和
1991年04期 378-382页 [查看摘要][在线阅读][下载 178k] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 徐文忠,杜念兴,李光地
<正> 本世纪70年代基因工程的出现,给疫苗研制尤其是一些难以在细胞上培养的病毒或培养中很危险的病毒疫苗的研制,提供了一条新的途径。然而,将病原的特定保护性抗原基因单独表达或者与一些单体蛋白载体基因融合表达的所谓基因工程亚单位苗,存在一个明显的缺点,由于其抗原单价和分子可溶性,使其免疫原性较弱,达不到保护性免疫的效果。这是至今难以得到理想的基因工程苗的主要原因。近几年来,国外科学家正在探索新的蛋白载体以克服这个缺点。他们将病原中编码保护性抗原决定簇的基因片段插入到乙型肝炎病毒(H
1991年04期 383-386页 [查看摘要][在线阅读][下载 184k] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：3 ] - 1991年04期 391-398页 [查看摘要][在线阅读][下载 267k] [下载次数：15 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
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