• 水稻矮缩病毒基因组第九号片段的cDNA克隆及序列分析

    曲林,辛毅,朱玉贤,陈章良

    水稻矮缩病毒基因组第九号片段的cDNA克隆及序列分析曲林,辛毅,朱玉贤,陈章良(北京大学生命科学学院,蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室北京1ll871)关键词水稻矮缩病毒,第九号片段,序列分析水稻矮缩病毒(RiceDwarfVirus,RDV)...

    1995年03期 [查看摘要][在线阅读][下载 212k]
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  • 甲型肝炎的免疫球蛋白-补体循环免疫复合物

    彭宣宪,万雅各,张文军,黄作美,袁水斌,罗华平

    采用捕捉法-ELISA检测115例甲型肝炎患者的IgM、IgG和IgA特异性激活补体类循环免疫复合物(IgM/C3-CIC、IgG/C3-CIC和IgA/C3-CIC),其阳性率依次为47.8%、56.5%和47.8%。分别与患者的性别、年龄、病程、丙氨酸转氨酶(ALT)、黄疸指数(BT)、免疫球蛋白(Ig)和补体作比较后发现,IgM/C3-CIC与这些指标均无相关性;IgG/C3-CIC与ALT、BT和IgA有关,IgA/C3-CIC与病程、ALT、BT和IgA有关。结果提示,不同免疫球蛋白类型的激活补体类CIC在甲型肝炎中的病理生理意义不同,其中IgG和IgA/C3-CIC可能参与肝损害过程。甲型肝炎具有一定程度的免疫应答紊乱。

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  • 我国河南株丁型肝炎病毒抗原在原核细胞中的高效表达及分泌

    刘善虑,丛旭,詹美云

    将我国河南株丁型肝炎(丁肝)病毒抗原的编码基因,克隆到分泌性原核表达载体pET-12a的T7启动子下游,构建了保留和去除终止子(Terminator)的两个表达载体pETDAg和pETDAg-1。将重组的表达质粒转化宿主菌BL21,经IPTG诱导,成功地高效表达了丁肝病毒抗原(HDAg)。SDS-PAGE及westemblot表明,分泌到细胞周间质和包涵体中的HDAg的分子量约为27kD和28kD。ELISA分析表明,分泌性HDAg的活性优于包涵体中的HDAg,分泌性HDAg的ELISA滴度高于1:32000比活性为10000ELISA滴度/mg蛋白;包涵体HDAg的ELISA滴度可达1:25600,比活性为4500ELISA滴度/mg蛋白。另外,利用本室建立的6株抗美国株HDAg单克隆抗体对该河南株重组丁肝病毒抗原(rHDAg)进行了鉴定分析,表明它可与其中5株McAb起特异性结合反应,而与另一株McAb反应不好,推测可能与其HDAg的不同空间结构有关。

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  • 在我国腹泻患儿中发现诺瓦克样病霉感染

    方肇寅,温乐英,晋圣瑾,赵章华

    诺瓦克病毒是引起无菌性急性胃肠炎爆发的重要病原。1990年10月至1991年1月从河南省急性腹泻门诊患儿便样中发现了诺瓦克样病毒。经电镜观察,病毒直径约为28nm,病毒壳似由有结构的亚单位组成,进一步用诺瓦克病毒特异的寡核苷酸引物做逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR),检定为阳性。由PCR产物测得的核苷酸序列与诺瓦克病毒原型株相应序列比较,同源性为72%。以上结果证实,在我国腹泻病人中有诺瓦克样病毒感染。这对我国病毒性胃肠炎流行的防治研究具有重要意义。

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  • 汉滩病毒包膜糖蛋白G1和G2重组杆状病毒表达载体的构建与表达及其免疫原性

    石晓宏,杭长寿,宋干,梁米芳

    将汉滩病毒(HTNV)M基因插入杆状病毒转移质粒pAcYMIB多角体启动子下游附近,与Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染Sf9细胞,经空斑筛选获得了表达包膜糖蛋白(G1、G2)的重组杆状病毒(AcvHanM)。经纯化AcVHanMDNA的Southemblot证实,M基因正确插入了杆状病毒基因组中。用抗糖蛋白混合单克隆抗体和病人血清做免疫荧光染色,观察到细小的特异性荧光颗粒,呈典型的核周分布。免疫荧光检测还证实,重组糖蛋白与9株抗糖蛋白单抗均起反应,提示重组糖蛋白的抗原位点分布与病毒毒粒糖蛋白相同或相似,用放射免疫沉淀(RIP)分析仅显示G2带,且表达的G2分子量略小于病毒G2,这可能与两者的糖基化程度不同有关。研究还表明,重组糖蛋白具有细胞融合活性。

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  • 中国株和德国株兔出血症病毒的基因组比较

    崔治中,段玉友,王永坤,朱国强

    以兔出血症病毒(RHDV)德国株基因组cDNA的部分片段为探针,与中国的NJ株和LW株RHDV的基因组做分子杂交,结果表明,它们属于同一病毒。将中国株RHDV感染兔肝组织,用硫氰酸胍-氯化铯超速离心法提取的核酸沉淀,或将提纯病毒悬液经苯酚抽提法获取的核酸沉淀,在用RNase或DNase,消化后直接做Dotblot,或将相应样品做PCR后再做Dotblot或Southernblot,再与经Digoxigenin标记的cDNA探针做分子杂交,结果证明,在中国的二个不同来源的兔出血症病料中,与德国株RHDV基因组cDNA同源的病毒是一种ssRNA病毒。本文还讨论了在中国兔出血症病料中存在另一种DNA病毒的可能性。

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  • 传染性法氏囊病病毒CJ-801bkf毒株VP2 cDNA基因结构的分析

    崔静,周顺伍,郭玉璞

    以传染性法氏囊病病毒(IBDN)中国毒株CJ-801bkf的基因组A片段dsRMA为模板,经反向转录和PCR扩增,克隆了保护性抗原VP2cDNA基因。经Sanger法测序,确定了VP2cDNA基因有1484个核苷酸,推测了VP2氨基酸的顺序,与已报导的6株IBDV毒株CuI、PBG98、52/70、002-73、STC和VariantE的VP2区做了比较,证明:克隆的CJ-801bkfVP2cDNA基因是全长的,含有正确的起始密码子ATG;CJ-801bkf与毒株Cul和pBG98同源性最高;CJ-801bkfVP2高可变区内两个亲水区的氨基酸顺序与CuI、PBG98、52/70、002-73和STC完全相同;7肽区内第三个丝氨酸残基则变异为精氨酸。这些结果提示,中国CJ-801bkf毒株应属标准血清I型IBDV弱毒株。

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  • 表达HSV-2 gD基因的重组痘苗病毒保护小鼠对抗致死量HSV病霉攻击

    容敏清,阎辉,阮力,侯云德,何南祥,朱既明

    利用PCR方法对单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D(HSV-2gD)基因进行了修饰,在其5'端删去约500bp的非编码区,仅保留ATG上游7个bp。将修饰后的HSV-2gD基因插入到带有痘苗病毒天坛株TK基因区段的痘苗表达质粒pJSA1175,置于痘苗病毒P7.5k早/晚期启动子控制下。将此重组质粒用脂质体Lipofectin方法转染已受野型TK ̄+痘苗病毒天坛株感染的TK ̄-143细胞,通过同源重组机制和标志基因LacZ产物的蓝斑显色作用,以及BudR试剂对TK表型的选择压力,筛选出整合有HSV-2gD基因的重组痘苗病毒。Southem杂交表明,HSV-2gD基因已正确地插入痘苗病毒TK基因区内;间接免疫荧光检测显示,HSV-2gD蛋白已得到有效表达,且主要分布于细胞膜。重组病毒免疫家兔可产生明显的抗HSV-2gD中和抗体。用重组病毒免疫小鼠,3周后可使94%(17/18)的小鼠对抗HSV-2的致死量攻击,表明重组病毒具有明显的免疫保护作用。

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  • 人T细胞白血病病霉Ⅰ型env基因的克隆与表达

    段震峰,滕智平,曾毅

    本文通过聚合酶链式反应(PCR),从整合有人T细胞白血病病毒Ⅰ型(HTLV-I)的MT-2细胞株中,扩增出HTLV-I外膜蛋白(env)的全基因(1.45kb),并成功地克隆入pUC19载体,构建成env基因克隆env/pUC19.利用原核高效表达载体pGEX-2T,在大肠杆菌中有效地表达了与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合的env羧基末端抗原的重组蛋白,融合基因的转录由tac启动子调控。SDS-PAGE结果表明,有一约52kD的目的蛋白带,表达量占菌体总蛋白的10%;WesterNblott及ELISA结果显示,表达产物能与HTLV-I多抗血清结合。本研究为研制HTLV-I的诊断试剂及进一步了解env的免疫学和生物学性质打下了基础。

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  • 家蚕核多角体病毒P10基因启动子结构与功能分析

    张燕,张颖,张志芳,吴祥甫

    前文曾报导过家蚕核多角体病毒(BmNPV)P10结构基因和启动子全顺序 ̄[1]。经突变法消除起始码ATG,并分离上游-230位-+1位含完整启动子片段,在此P10启动子片段后拼接报导基因(昆虫荧光素酶基因,Luc,Luciferase)构建成表达质粒pBmp10-Luc。质粒pBmp10-LucDNA转染有野生型BmNPV感染的家蚕Bm-N细胞可测出Luc基因的瞬时表达。由启动子5’端(-230位)向Luc基因节律缺失删节,获得缺失至-135、-111、-38位的各质粒(pBmp10-135Luc、pBmp10-111Luc、pBmp10-38Luc)。功能检测证实除pBmp10-38Luc外,其它质粒都有Luc基因瞬时表达,说明-38--111位结构顺序是P10启动子功能所必须的。在苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcMNPV)感染的BmNPV非敏感细胞Sf-9中也得到相同的结果,说明BmNPVP10启动子和AcMNPVP10启动子的调节因子可能是相似的。

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  • 一种中国发生的真菌传小麦花叶病毒RNA-13'末端核苷酸序列分析

    于嘉林,晏立英,冯继东,李大伟,蔡祝南,刘仪

    以采自河南的真菌传小麦花叶病毒(FWMV-C)为材料,抽提病毒RNA,合成互补DNA(cDNA)。对杂交筛选所得cDNA克隆进行亚克隆及序列分析,结果表明,亚克隆pGSI含有一个长度为891个核苷酸的不完整开放阅读框架(ORF)和长度为258个核苷酸的3'末端非编码区(NTR),并带有Poly(A)尾序。此段序列与大麦黄花叶病毒(BaYMV)及法国报道的一种小麦梭条花叶病毒(WSSMV-F)的RNA-13'末端分别具有67.6%和69.9%的同源性。由所测序列编码区(1-891nt)可推导产生296个氢基酸,并与WSSMV-F及BaYMV外壳蛋白氨基酸序列分别具有75.9%和71%的同源性。此结果表明,FWMV-C为另外一种不同于WSSMV-F的大麦黄花叶病毒组(Baymovirus)病毒,所测基因组片段应为RNA-13'末端序列,其中可能包括了病毒全长外壳蛋白编码区域。

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  • Epstein-Barr病毒核抗原Ⅱ(EBNA2)重组质粒pSG5-EBNA2-Hyg的构建及其在哺乳动物传代细胞中的表达

    纪志武, 李宝民,曾毅

    Eptein-Barr病毒,EBNA2短暂表达,类风湿关节炎

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  • 利用PCR技术体外转录丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶区的cDNA

    邹正升,王升启,施红,韩凤连,陈菊酶,马立人,雷周云,王玉芝

    利用PCR技术体外转录丁型肝炎病毒基因组RNA中核酶区的cDNA邹正升,王升启,施红,韩凤连,陈菊酶,马立人,雷周云,王玉芝关键词丁型肝炎病毒,核酶,体外转录,聚合酶链反应丁型肝炎病毒(HDV)是目前已知的动物病毒中唯一具有环状单股负链的RNA病毒。...

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  • 马铃薯Y病毒6kD和NIa基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建

    项瑜,杨兰英,彭学贤,魏宁生

    马铃薯Y病毒6kD和NIa基因的克隆与序列分析及其植物表达载体的构建项瑜,杨兰英,彭学贤,魏宁生关键词马铃薯Y病毒,6kD基因,NIa基因,序列分析,植物表达载体马铃薯Y病毒(PotatovirusY,PVY)是马铃薯Y病毒组(Potyvirusgr...

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  • 杆状病毒早期基因的结构与功能

    王家旺,齐义鹏

    杆状病毒早期基因的结构与功能王家旺,齐义鹏(武汉大学病毒学研究所武汉430072)在感染的昆虫细胞中,杆状病毒基因的表达和DNA的复制是级联式的 ̄[1,2]。用受染细胞脉冲标记的特异性蛋白、蛋白质合成抑制剂(如放线菌酮)和DNA复制抑制剂(如Aphi...

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  • 用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒

    陈纯贤,万蜀渊

    用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤,万蜀渊(武汉华中农业大学柑桔研究所430070)关键词柑桔裂皮病类病毒,F20探针,光生物素,斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强,也广泛用于病毒和类病毒的检测。最初,一般采用放射性同位素...

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