- 李小锋,王家旺,金海陵,黄永秀,齐义鹏
粘虫核多角体病毒0.6kbSalI/HindⅢ片段序列的测定及分析李小锋,王家旺,金海陵,黄永秀,齐义鹏(武汉大学病毒研究所,武汉430072)关键词粘虫,核多角体病毒,序列测定,早期基因核多角体病毒(NuclearPloyhedrosisVirus...
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 169k] [下载次数:30 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:311 ] - 刘哲伟,冯燕玲,张霆,韩玉龙,马官福,张建成
本文通过融合柯萨奇B3病毒(CVB3))VP1基因与人凝血酌基因,仗CVB3的VP1在大肠杆菌中得到稳定的表达。经蛋白扫描仪等测定,表达的融合蛋白占菌体可溶性蛋白的11%左右。表达的VP1产物勺抗CVB3VP1单克隆抗体和小鼠抗CVB3血清产生较强的免疫反应,与天然的CVB3蛋白抗原性相同。应用无关单抗和载体质粒对照均呈现阴性反应。应用表达的VP1作为抗原,我们对临床部分急性病毒性心肌炎患者血清进行了特异性IgM免疫印迹法检测,其结果与组织培养的CVB3制备的蛋白抗原对患者血清的特异性IgM反应基本一致。采用基因上程方法制备CVB3抗原产最高,易纯化,免疫原性没有改变。故可以试用表达的VP1抗原代替目的有实验室感染危险的病毒培养及抗原制备方法,快速、特异地诊断CVB3感染。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 478k] [下载次数:85 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:8 ] |[阅读次数:292 ] - 刘振声,李宝民,刘彦仿,曾毅
将EB病毒感染的人胎儿鼻咽粘膜移植于22只Balb/c裸鼠皮下,每周一次皮下注射丁酸和佛波醇二酯(TPA)。约10天后肿物逐渐增大,15周内行病理学检查,诊断为恶性淋巴瘤4例(其中T淋巴细胞型3例),未分化癌3例。PCR和原位杂交显示,两种肿瘤组织和细胞中均含有EB病毒LMP1基因,核苷酸序列分析表明,与B95一8细胞LMP1基因相应序列的同源性约为96%和99%。说明EB病毒感染人胎儿新鲜鼻咽上皮细胞和淋巴细胞,引起细胞恶性转化后,EB病毒DNA仍存在于癌细胞中。本研究在国际上首次证明,完整的EB病毒和促癌物协同作用可以诱发未分化癌。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 611k] [下载次数:143 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:35 ] |[阅读次数:319 ] - 邵一鸣,管永军,赵全壁,曾毅,张家鹏,张勇,段一娟,杨贵林
从1995年瑞丽静脉注射毒品者及其配偶26人的血样中,经PCR扩增细胞内HIV基因并对其envC2-V3区进行测序,结果发现18人为B亚型HIV1,8人为C亚型HIV1毒株。在瑞丽以B亚型毒株为主,与我们以往报告一致。C亚型毒株的出现曾有报导,我们进一步分析发现,C亚型毒株感染者多在1994和1995年被感染。根据其核苷酸序列测定的基因离散率(2.25%),远小于B型毒株(6.7%),也说明它是近两年才在瑞丽流行的。C亚型毒株感染者明显聚集于城周,而B亚型毒株感染者均匀分布,提示其传染源的定向性。对它的可能来源文中进行了讨论。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 302k] [下载次数:109 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:52 ] |[阅读次数:417 ] - 王斌,邵一鸣,曾毅
运用基因重组技术,将HIV-1SF2株编码外膜蛋白gp120的env基因片段与原核载体pBV220进行重组,构建成质粒pBVSF2env,并在肠杆菌(ECoilDH10b)中获得表达,经Westernblot反应证实,该重组蛋白可与来自HIV-1感染者的血清(含多克隆抗体)发生特异性反应。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 262k] [下载次数:59 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:345 ] - 张海林,米竹青,张云智
用5株乙型脑炎病毒(JEvirus)经口感染白纹伊蚊,证明该蚊能感染和传播乙型脑炎病毒。对感染雌蚊的子1和子2代卵3443粒、幼虫7021只和成虫4853只,分171批检查乙型脑炎病毒,子1代的批阳性率:卵为46.67%(14/30)幼虫为21.21%(7/33)雌性成虫为23.68%(9/38),雄性成虫为15,00%(3/20);子2代幼虫、雌性和雄性成虫的批阳性率依次为23.53%(4/17)、27.27%(6/22)和18.18%(2/11)。此结果表明,白纹伊蚊具有将乙型脑炎病毒垂直传播给后代的能力。认为该蚊在乙型脑炎病毒自然循环中起重要作用。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 225k] [下载次数:113 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:38 ] |[阅读次数:274 ] - 王志亮,彭大新,张如宽,焦新安,崔虹,侯云德,刘秀梵
在对中国鸡痘病毒疫苗株282E4基因组DNA进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入Pll一LacZ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出3个为病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段。为了便于外源基因的插入,特将P7.5一Pll一LacZ基因框转移至BLUESCRIPTSKM13一的BdmHI位点,在P7.5下导人多克隆位点(MCS),建立了载体插入标记pSGM1175。以SstII和ApaI将MCS一P7.5一Pll一LacZ框切下,置入一个亚充隆的非必需片段中,构建成中国鸡痘病毒插入载体pFG1175一1。以PstI和SmaI酶切pVLgB分离MDVgB基因的开放阅读框,并将其插入pFG1175中P7.5的下游,得到携带gB基因的质粒pFGB1175一1。将此质粒以脂质体转染282E4株感染3一4小时的鸡胚成纤维细胞,同样采用蓝斑筛选技术得到重组的蓝斑病毒。以MDVgB单克隆抗体进行间接免疫荧光,证实了感染细胞中gB抗原的存在,从而成功地建立了可表达MDVgB糖蛋白的以中国疫苗株为基础的重组鸡痘病毒。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 309k] [下载次数:143 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:47 ] |[阅读次数:385 ] - 周常勇,赵学源,蒋元晖
采用洋酸浆(Physalisforidana)繁殖温州蜜柑萎缩病毒(SDV),改进提纯方法,经5%一25%酒石酸钾密度梯度离心获得的提纯制剂,在220一300nm下呈单一吸收峰曲线,峰在259nm,谷在237nm,OD_(259)/OD_(237)=1.60,OD_(259)/OD_(280)=1.73。病毒得率约为13mg/kg病叶。电镜观察各视野布满了直径约26nm的球状病毒颗粒。病毒粒子外壳蛋白有两个组分,分子量分别约为46kD和23kD。免疫兔血清用A蛋白DAS一ELBA法简称PAS一ELBA测得效价为1/81“920一1/163”840,用微量沉淀法测得效价为1/2“560一1/5”120。用此血清对各地从日本引进的温州蜜柑品系及重庆市柑桔良种无病毒繁育计划中的甜橙、柚等品种共94个样品进行测定,同时用日本制备的SDV抗血清和柑桔花叶病毒(CiMV)抗血清进行比较鉴定。自制SDV抗血清检测结果和日本抗血清及草本指示植物(白芝麻)检测结果一致。此外,对宫本特早熟温州蜜柑茎尖嫁接苗检测18样次,确认了脱毒效果。对SDV是否可根传作了6年观察检测,明确其未能根传。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 379k] [下载次数:74 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:277 ] - 邹正升,陈菊梅,王升启,马立人,施红,韩凤连,程云,雷周云,王玉芝
设计一时PCR引物,其中上淤引物的5’端除目的基因外,还加T7RNA聚合酶启动子序列。以质粒(pSVLD3)为模板,通过PCR扩增出带有T7RNA聚合酶启动子序列的139bp的cDNA片段,它含有丁型肝炎病毒(HDV)基因组RNA中核酶(Ribozyme)区的cDNA,该核酶具有自身裂解功能。经测序发现该cDNA有2个碱基变异。以此PCR产物为模板,通过T7RNA聚合酶,转录出核酶的前体,并观察到其自身裂解产物,自裂率达71%。针对该核酶唯一的自裂位点及两个重要的单链区,设计并合成3条反义寡核苷酸(ASODN)。当在转录反应中间时加入合成的3条ASODN后,核酶的自裂率均下降较明显,其中,针对核酶自裂位点的ASODN效果更突出,当其浓度为40μmol/L时,核酶自裂率为2%,当浓度为1μmol/L时,核酶的自裂完全消失。结果启示ASODN可与核酶的自裂位点区及两个重要的单链区结合,从而抑制核酶的自裂活性。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 291k] [下载次数:52 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:409 ] - 江永珍,毕胜利,杨永平,曹经瑷,鲁健,李景源,占美云,刘崇柏
利用基因工程重组技术获得了三种嵌合抗原,两种为丙型肝炎病毒(HCV)结构区核壳蛋白C22和NS3非结构区C33c双表位的嵌合抗原B1和B2,另一种是既具有上述两段优势抗原,还包括NS4非结构区C100多表位的嵌合抗原C25。在大肠杆菌水解酶阴性的B株菌中表达的产物,经SDS一PAGE分析,B1、B2和C25嵌合抗原分子量分别为43、53和70kD,抗原蛋白表达量分别各占电泳蛋白条带的40%、10%和35%左右。3个嵌合抗原的免疫活性分析证明,它们都具有相应区段的免疫活性。用嵌合抗原分别组装成EIA试剂盒,经国家HCV诊断试剂质控参比血清验证,B1嵌合抗原的抗体检出率为95%B2嵌合抗原为91%,C25为94%,均高于C33c和MAPCP19混合抗原(88%)。B1嵌合抗原与核壳蛋白C区和非结构NS4区(C一NS4)双表位化学嵌合多肽抗原联合应用,抗体检出率高达97%,完全符合国家HCV诊断试剂质控要求。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 246k] [下载次数:74 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:462 ] - 叶荣,于善谦,韦石泉
用芜菁花叶病毒辽宁分离物(TuMV一LN)、山东分离物(TuMV一SD)和榨菜分离物(TuMV一ZC)作抗原,分别免疫BALB/c小鼠,经脾细胞与SP2/O一Ag14骨髓细胞融合,共获得7个单克隆抗体分泌细胞株。为研究3个分离物的抗原差异,用胰蛋白酶消化TuMV的外壳蛋白(CP),分别形成4、2和1条降解带,经SDS一15%PAGE后,转移至硝酸纤维薄膜上,用3个分离物的抗血清和7种单隆抗体分别做Westem一blot,结果表明:多抗均能与降解带呈现不同程度的反应;2个单抗反应极弱或不反应;2个单抗与所有降解带反应;3个单抗与不同的降解带呈现的反应。3个TuMV分离物的病毒颗粒与多抗及单抗分别做ELISA,结果显示:同源抗血清与抗原的反应都高于与异源抗血清的反应,不同分离物作抗原制备的单抗有交叉反应,但与同源分离物的反应强度远远大于异源分离物。这些结果为TuMV分离物之间的鉴别提供了重要的抗原组成与结构信息。
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 291k] [下载次数:43 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:298 ] - 唐晨辉,庄美宝,徐帆,王章,龙綮新,庞义
利用能形成多角体的杆状病毒载体系统pSXIVVI~+X3,把萤火虫荧光素酶(Fireflyluciferase,Luc)cDNA克隆到转移载体质粒pSXIVVI ̄+3/3,通过共转染草地夜蛾(Spodopterafrugiperda,Sf)细胞,得到重组毒株ThNPV一Luc-OCC~+。在该重组杆状病毒株中Luc基因受到合成启动子和XIV启动子的双重调控。该重组杆状病毒株在Sf9细胞中能形成多角体,有X一gal时形成白斑,而且可以通过口服途径大规模感染银纹夜蛾(Pluisiaagnata)幼虫。把Luc基因克隆到带组合启动子的杆状病毒载体pDSXIVVI~+X3系统中,其表达水平比无包含体的杆状病毒载体系统提高了7一9倍。重组毒株TnNPV一Luc一OCC~+中Luc基因在昆虫细胞中的表达水平,为Luc基因在相同启动子组件调控之下在大肠杆菌中的表达水平的200倍以上。在重组病毒ThNPV一Luc一OCC ̄~+感染的银纹夜蛾幼虫中,表达产物约占虫体总可溶性蛋白的6%一9%。用磷酸钙胶亲和吸附法可得到纯度为64%的提纯产物,再经磷酸钙胶/Spharose4B层析可使纯度提高到83%。纯化后的Luc融合蛋白具有与天?
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 591k] [下载次数:233 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:342 ] - 王晓洁,王全颖,伊瑶,郭可謇
甲型肝炎病毒5'非翻译区对重组痘苗病毒表达甲肝抗原的影响王晓洁,王全颖,伊瑶,郭可謇(中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052)关键词:甲肝5'非翻译区,甲肝重组痘苗病毒,甲肝抗原表达甲型肝炎病毒(HAV)属小核糖核酸病毒科(Picomavi...
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 198k] [下载次数:38 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:319 ] - 娄元梅,阮力,朱既明
痘苗病毒毒力相关基因的研究进展娄元梅,阮力,朱既明(中国预防医学科学院病毒学研究所遗传室,北京100052)52)近十几年来,痘苗病毒已新兴成为一哺乳动物表达载体。但它仍存在一些鲜为人知的毒副作用,特别是免疫缺陷患者,尚有1/百万的机率出现全身性发痘...
1996年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 495k] [下载次数:181 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:5 ] |[阅读次数:337 ] 下载本期数据