- 谭文杰，苗季，丛旭，詹美云
从我国河南、内蒙、北京等地的ＨＤＶ健康携带者、慢性丁肝病人与重症肝炎病人中，筛选获得４份ＨＤＶ—ＲＮＡ阳性血清。经逆转录—聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）交叉扩增获得ＨＤＶ—ｃＤＮＡ片段（６５１—１６６０ｎｔ，按Ｍａｋｉｎｏｅｔａｌ定位），并克隆到ＰＧＥＭ—３ｚｆ（－）或ＰＧＥＭ－Ｔ载体上。经序列分析研究其基因结构特点，结果表明，同属基因Ⅰ型的４株中国丁型肝炎病毒，在基因序列上具有相似的保守区域，但与同亚型ＨＤＶ健康携带者相比，重症肝炎病人与慢性丁肝病人来源的ＨＤＶ毒株，在多个位点上发生了核苷酸的改变，由此推导的抗原编码区相应的氨基酸发生了替换。这些核苷酸与氨基酸的改变位点散在，但多集中于抗原编码区的羧基端。如慢性丁肝发生的６个氨基酸改变中，５个位于１６６—１８８位；重症肝炎发生的１２个氨基酸改变中，８个位于１７０—２１４位。有趣的是，在１７５位上发生了由脯氨酸向丝氨酸的共同替换。提示ＨＤＶ的感染致病可能与ＨＤＶ的基因结构相关。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 269k] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：355 ] - 王海林，夏宁邵，洪宁，胡黎明，郑延硕，刘敏，金冬雁，毕胜利，侯云德
从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ，他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常，肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期，血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性，抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性，但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性，核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失，对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ），从血清学检测和序列分析结果推测，在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中，ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态，抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 233k] [下载次数：50 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：340 ] - 夏宁邵，王海林，毕胜利，洪宁，田保平，郑延硕，刘敏，季维智，候云德
从用于接种猕猴的受ＨＣＶ感染的２份献血员的血清，第一代猕猴感染ＨＣＶ１１个月的１＃食蟹猴血清和第二代猕猴受第一代猕猴ＨＣＶ血清感染ＨＣＶ３个月后的１４＃恒河猴血清，提取ＫＮＡ，用自行设计的ＨＣＶ５＇非编码区和核心区（５＇ＮＴＲ—Ｃ区）引物进行逆转录ＰＣＲ，将扩增的７７９ｂｐｃＤＮＡ片段克隆到ｐＵＣ１９质粒上；每一株挑３个克隆用双脱氧链终止法测定其序列并矫正偏差。４株ＨＣＶ的５＇ＮＴＲ—Ｃ区序列，原代人Ａ株（ＣＸ１）ｃＤＮＡ全长７７９ｂｐ，原代人Ｂ株（ＣＸ２）ｃＤＮＡ全长７７８ｂｐ，第一代猕猴株（ＣＸ３）ｃＤＮＡ全长７７６ｂｐ，第二代猕猴株（ＣＸ４）ｃＤＮＡ全长均为７７７ｂｐ，ＣＸ１株和ＣＸ４株均在５＇ＮＴＲｎｔ—２１６有—Ｃ的插入，ＣＸ３和ＣＸ４Ｃ区ｎｔ３８５—３８７处的３个硷基缺失；ＣＸ１株与ＣＸ２、ＣＸ３、ＣＸ４比较，同源性分别为９８．０７％。９６．１５％、９５．２５％：ＣＸ２与ＣＸ３、ＣＸ４的同源性分别为９６．２８％、９５．７６％；ＣＸ３与ＣＸ４的同源性为９７．５６％。由克隆的ＨＣＶＣ区ｃＤＮＡ推导的氨基酸序列，从ＨＣＶ的启始密码起，ＣＸ１株、ＣＸ２株序列全长１６８个氨基酸，ＣＸ３株和ＣＸ４株序列全长
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 263k] [下载次数：76 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：359 ] - 毕胜利，江永珍，赵洪兰，李景元，鲁健，曹经瑗，刘崇柏
利用融合蛋白表达载体ｐＧＥＸ－３Ｘ表达了戊型肝炎病毒第二（ＯＲＦ２）和第三读码框（ＯＲＦ３）区的两个抗原表位，并利用ＯＲＦ２表位上游自然存在的限制性内切酶位点和ＯＲＦ３下游通过ＰＣＲ引入的限制性内切酶位点，使两个免疫表位区域形成嵌合。表达的三种抗原均溶于水。可利用商品化的谷胱甘肽－４Ｂ亲合层析柱得到纯化的抗原。经试用发现，基因重组抗原作为酶联免疫试剂的抗原用于检测血清中抗戊型肝炎病毒抗体，与新加坡进口试剂盒有高度的一致性。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 219k] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：51 ] |[阅读次数：362 ] - 王秋红，方肇寅，吕作芝，周德水，章青，吴狄
污染水体中生长的贝类是传播甲型肝炎的重要途径之一。本文介绍了一种抗体捕捉后进行ＰＣＲ扩增来检测贝肉中甲肝病毒（ｈｕｍａｎｈｅｐａｔｉｔｉｓＡｖｉｒｕｓ，ＨＡＶ）的方法。贝肉中ＨＡＶ的浓集回收采用洗脱一沉淀法井加以改进，用脊髓灰质炎病毒作为指示病毒，经二次沉淀后病毒的回收经率为２６％，３０克贝肉中的病毒浓集回收在１．０～１．５ｍｌ上清液中。此方法计算检测限＜３０－３００ＨＡＶ／３ｇ贝肉。从１４份大连海域标本中，用该法检测出阳性标本７份，阳性率为５０％。此浓集病毒的方法还可应用于检测贝肉中污染的脊髓灰质炎病毒、诺瓦克病毒、轮状病毒等其它病毒。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 305k] [下载次数：68 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：312 ] - 谷淑燕，董温平，朱秋屏
用间接免疫酶方法在硝酸纤维膜上检查、筛选和回收重组痘苗病毒。作为人用疫苗株的筛选，此法较核酸杂交方法更简便、直观和准确，在筛选重组病毒的同时确定了病毒在感染细胞上的表达。构建了含痘苗病毒７．５ｋ启动子和ＥＢ病毒膜抗原基因的转移载体，从转染细胞的病毒混合液中用特异性ＭｃＡｂ和间接免疫酶方法直接筛选表达ＥＢ病毒膜抗原的重组痘苗病毒，并从阳性酶斑中回收具感染性病毒。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 373k] [下载次数：63 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：355 ] - 卢大儒，邱晓云，郑冰，邱信芳，薛京伦
在反转录病毒介导的基因治疗研究的过程中，建立了有复制能力的反转录病毒（ＲＣＲ）的检测系统，包括ＤＮＡ聚合酶链式反应（ＰCＲ）、反转录ＰＣＲ（ＲＴ／ＰＣＲ）、Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交以及ｎｅｃ基因和β－ｇａｌ基因的补救分析（Ｒｅｓｃｕｅａｓｓａｙ）。从ＤＮＡ水平、ＲＮＡ水平和病毒活体水平对野生型病毒进行了灵敏而特异的检测，套式ＰＣＲ灵敏度达２．５个拷贝，并利用该检测系统检测了血友病Ｂ基因治疗和脑胶质瘤基因治疗的靶细胞及有关样品，所有结果均为阴性，没有检测到野生型反转录病毒。为基因治疗临床试验的安全进行奠定了基础。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 408k] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：283 ] - 陈庆华，宋永胜，李小宇，张智清，郭应禄，侯云德
本文报道制备转基因膀胱癌瘤细胞疫苗的可行性。将ＣＭＶ启动子片段和人粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ，克隆进逆转录病毒载体Ｎ２Ａ，构建逆转录病毒表达载体Ｎ２Ａ／ＣＭＶ／ＧＭ—ＣＳＦ，经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ包装并转染包装细胞，获得重组逆转录病毒。选择较高滴度的重组病毒（滴度为１×１０￣５～２×１０￣６ＣＦＵ／ｍｌ）感染人膀胱癌细胞株ＢＩＵ—８７，经Ｇ４１８筛选出转基因瘤细胞株ＢＩＵ￣Ｒ。ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测证实ＧＭ—ＣＳＦ基因已整合到其ＤＮＡ上，ＲＴ—ＰＣＲ可检测到转基因细胞中ＧＭ—ＣＳＦ基因的表达。细胞培养上清经ＴＦ—１细胞检测，其ＧＭ—ＣＳＦ分泌量为０．７～７０．７ｎｇ／１０￣６细胞／２４小时。荧光免疫测定发现转基因瘤细胞表面有ＨＬＡ—Ⅰ、Ⅱ类抗原表达。转基因瘤细胞株经６０００ｒａｄＸ射线照射灭活，细胞逐渐死亡，但能持续分泌ＧＭ—ＣＳＦ达两周以上。初步动物试验结果表明，转ＧＭ—ＣＳＦ基因的瘤细胞疫苗具有明显的抑制肿瘤生长的能力。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 395k] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：300 ] - 陈宙涛，梁臣，刘淑红，耿运琪
牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）的长末端重复序列（ＬＴＲ）含有病毒的启动子，调控病毒在真核细胞中的表达。我们将ＢＩＶＬＴＲ与萤火虫荧光素酶基因连接构建成重组质粒ｐＢＩＶ一Ｌｕｃ，该质粒能在Ｅｃｏｌｉ中有效地表达出荧光素酶的活性，从而证明ＢＩＶＬＴＲ在大肠杆菌中也具有启动子功能。Ｍｕｎｇｂｅａｎ核酸酶作图分析发现，ＢＩＶＬＴＲ在Ｅｃｏｌｉ中的转录起始位点位于Ｕ_３区，而不是在真核细胞中的Ｕ＿３一Ｒ交界处。同时我们也证实了ＢＩＶＬＴＲ在Ｅ，ｃｏｌｉ中仍可被ＢＩＶｔａｔ蛋白特异性地反式激活，为研究ｔａｔ蛋白的作用机制提供了一条新的途径。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 371k] [下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：286 ] - 张兹钧，胡木枝，金由辛
根据对ＥＤＳ一ＤＮＡ重组质粒ｐＴＥＺ.Ｐ３和ｐＴＥＺ．Ｐ２８的核酸序列分析结果，设计了两对引物，它们均能从ＥＤＳ一ＤＮＡ上扩增出一个特异片段，其长度分别为２３８ｂｐ和２０９ｂｐ。经比较，ＰＣＲ比血球凝集试验至少灵敏２００倍，比核酸杂交试验灵敏千万倍；对１００份自然发病鸡的肛拭子、血液和软壳蛋等样品的检测结果表明：ＰＣＲ的阳性检出率远高于核酸杂交试验，并用病毒分离方法证实了ＰＣＲ对野外病料的检出结果是可信的，对常规的ＰＣＲ条件还作了改进，使试剂的用量减少了１０倍以上，并简化了一些烦琐操作。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 325k] [下载次数：90 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：309 ] - 李华平，胡晋生，范怀忠
构建了侵染香蕉的黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）两个株系（ＢＳ和ＨＩ）的衣壳蛋白（ＣＰ）基因的植物表达载体，并通过农杆菌共培养法和基因枪法，分别将两个株系的ＣＰ基因转化入了两种烟草植株。其ＣＰ基因转化频率及植株再生率研究结果表明，农杆菌共培养法比基因枪法、土耳其烟比本生烟、农杆菌１：１０倍稀释液比培养原液和１：１００倍稀释液，具有更高的转化频率和植株再生能力。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＰＣＲ一Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｏｌｔ检测ＣＰ基因整合研究结果表明，在两株系ＣＰ基因转化的各１２株烟草中，各有９株含有各自的ＣＰ基因。Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｏｌｔ分析表明，在各７株转基因植株中，各有５株具有各自ＣＰ基因的ｍＲＮＡ的转录。ＤＡＳ一ＥＬＩＳＡ检测表明，各５株转基因植株中都含有各自株系不等量表达的ＣＰ。用ＨＩ株系进行攻击接种表明，具有ｍＲＮＡ转录和翻译的两株系的各５株转基因植株都显示了较高的抗病水平。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 367k] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：281 ] - 朱反修，黄永秀，齐义鹏，胡建红
以ＡｃＮＰＶｐ１０基因为侧翼序列，用ＡｃＮＰＶ的ＩＥ１基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体，并将新霉素抗性基因（ｎｅｏ）插入ＩＥ１基因启动子下游，得到转移载体ｐＡｃＰＩｎｅｏ。将它和野生型ＡｃＮＰＶＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ９，由于ｎｅｏ基因的表达，通过Ｇ４１８的选择和富集作用，得到重组病毒ｖＡｃＰＩｎｅｏ的纯培养。用酶切和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交证明，ｎｅｏ基因整合于ＡｃＮＰＶ基因组的ｐ１０基因位相。用重组病毒感染昆虫细胞，不同时间取样提取ＲＮＡ并进行杂交，结果表明ｎｅｏ基因在受染细胞内从早期到晚期都可发生转录。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 441k] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：374 ] - 王汉中，梁莉
从猪细小病毒（ＰＰＶ）基因组的ＶＰ２基因上，选择两对引物进行套式聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）体外扩增，产物经２％ａｇａｒｏｓｅ凝胶电泳和生物素标记的探针鉴定，证实具有特异性。敏感性实验证明，套式ＰＣＲ能检测到１ＴＣＩＤ＿５０的病毒量，在临床上应用本方法能从不同的组织样品和粪便中检测出猪细小病毒，具有很高的敏感性。
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 319k] [下载次数：236 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：59 ] |[阅读次数：317 ] - 王海林，夏宁邵，谭文杰，詹美云，苏文金，侯云德
从我国肝炎患者中检出ＧＢＶ一Ｃ型肝炎病毒ＲＮＡ王海林，夏宁邵，谭文杰，詹美云，苏文金，侯云德（中国预防医学科学院病毒研究所，北京１０００５２）关键词ＧＢ一Ｃ型肝炎病毒，逆转录多聚酶链式反应在我国病毒性肝炎病人中，约有１０％的病人为非甲一戊型肝炎，这些...
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 170k] [下载次数：39 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：16 ] |[阅读次数：310 ] - 谷淑燕，刘展，周为民，韩春卉
在昆虫细胞中表达Ｅｐｓｔｅｉｎ一Ｂａｒｒ病毒膜蛋白谷淑燕，刘展，周为民，韩春卉Ｈ，Ｗｏｌｆ（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词ＥＢ病毒，膜蛋白，昆虫杆状病毒，基因表达ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ一ＢａｒｒＶｉｒｕｓ，ＥＢＶ）与人的多...
1996年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 197k] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：274 ] - 陈京，胡伟贞，于嘉林，韩成贵
应用反转录聚合酶链式反应快速检测蕃茄环斑病毒陈京，胡伟贞，于嘉林，韩成贵关键词反转录聚合酶链式反应，蕃茄环斑病毒近年来发展起来的分子生物学新技术一聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）已在检测和分子生物学研究等许多领...
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