- 金奇,陈南海,姚二梅,黄静,侯云德
本文分析了我国痘苗病毒天坛株基因组两端的ＨｉｎｄⅢ－Ｃ和－Ｂ片段所编码的多肽，并与其他痘苗病毒株和正痘病毒进行了比较。结果表明，天坛株基因组ＨｉｎｄＩＩ－Ｃ和－Ｂ片段共有４６个主要的开放读码框架（ＰＲＦｓ），其中一个ＯＲＦ属于痘苗病毒基因组中第一次发现的与天花病毒相似的基因编码区。此外，天坛株基因组丝氨酸蛋白酶抑制剂Ⅱ的编码区由于移码变异而分成两个不同ＯＲＦｓ。与其他痘苗病毒株相比，天坛株基因组有多个ＯＲＦｓ的缺失，以上现象提示，天坛株在生物学性状上与其他毒株的差异可能与此有关。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 37k] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 白龙川,袁建刚,强伯勤
Ｔａｔ（Ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ）是人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）基因组编码的反式激活因子，突变分析表明它含有几个重要的功能域。为寻找控制ＨＩＶ复制的途径，构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ（－１５８－＋８０）为启动子的ＴａｔｃＤＮＡ全长反义表达质粒ｐＡＳ－Ｔａｔ，并用已经构建的以ＨＩＶＬＴＲ－１５８到＋８０为启动子，具有不同突变点的突变Ｔａｔ基因表达质粒，以荧光酶基因为报告基因，共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞，结果发现无论是反义Ｔａｔ表达质粒还是突变Ｔａｔ表达质粒，在瞬时转染体系中均能不同程度地抑制Ｔａｔ的活性，其中以ｐＭ５（５２位Ａｒｇ由Ｌｅｕ替代）和反义ＴａｔＲＮＡ的抑制效果最好。结果说明，反义ＴａｔＲＮＡ和突变Ｔａｔ均可用于抗ＨＩＶ感染的进一步研究
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 60k] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 杨克俭,阮力,孙朝辉,陆柔剑,朱既明
在利用ＰＣＲ方法克隆麻疹病毒Ｌ４株血凝素（ＨＡ）基因的过程中，获得了一个助融合活性丢失的Ｂ号克隆。其氨基酸序列与具有助融合活性的Ａ号克隆相比，有４个位点不同，分别位于９６、１１７、１４８及５４３位。通过基因间部分序列的交换及定点回复突变，获得了相应位点的突变体。对这些突变体的助融合活性研究发现，１１７、１４８及５４３位氨基酸的改变不影响助融合活性，而当９６位脯氨酸定点回复突变为亮氨酸后，Ｂ克隆血凝素蛋白获得了助融合活性。提示ＨＡ蛋白９６位氨基酸是影响助融合活性的一个重要氨基酸。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 99k] [下载次数：46 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 谭文杰,丛郁,李光三,毕胜利,杜淼,詹美云
为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构基因在ＨＣＶ感染中的致病性，构建了中国丙型肝炎病毒５ＵＴＲ区与结构基因区（Ｃ＋Ｅ１＋Ｅ２）的表达质粒，并通过显微注射法将其接种入小鼠受精卵内制备转基因小鼠。共注射受精卵４１０枚，存活３１２枚，植入后产仔６０只；转基因鼠尾部组织ＰＣＲ法ＤＮＡ检测证明有靶基因的整合；转基因小鼠的肝、肾、脾、心、肺、小肠、血中均有靶基因的转录，而在脑组织中无转录。３只Ｇｏ代整合小鼠经与正常ＩＣＲ小鼠配种，获Ｇ１代小鼠３２只，其中１３只有ＨＣＶ结构基因的整合。这一结果表明，ＨＣＶ结构基因转基因小鼠动物模型已建成。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 76k] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：3 ] - 李刚,姚集鲁,彭文伟
采用微粒吸附法从广东省一慢性丙型肝炎病人血清中提取丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，经随机引物逆转录为ｃＤＮＡ，再经聚合酶链反应（ＰＣＲ），获得包膜蛋白区（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１）两个部分重叠的产物片段，分别为４８９ｂｐ和８０６ｂｐ。其中，４８９ｂｐ片段主要位于Ｅ１区，小部分位于Ｃ区；８０６ｂｐ片段位于Ｅ２／ＮＳ１区。将４８９ｂｐ片段插入ｐＵＣ１９载体，再亚克隆进ｐＵＣ１８质粒载体。８０６ｂｐ片段则插入到ｐＢＶ２２０质粒及Ｍ１３ｍｐ１８、Ｍ１３ｍｐ１９噬菌体。将所测定的序列（共为１２４６ｂｐ）与多个已知分离株相应序列比较后发现，核苷酸同源性介乎６１．００％－８９．４１％，与Ⅱ（１ｂ）型同源性最大，超过８６％；推导的氨基酸同源性为６０．２４％－８７．２３％。与其它株比较，ＨＣＶ广东株（ＨＣＶ－ＧＤ）较大变异区包括２５１－２５８、３８３－４０６、４３４－４４６及４７５－４８０位氨基酸。其中两个与公认的高变异区（３８３－４０８、４７５－４８０）相对应。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 55k] [下载次数：19 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 刘文军,杨芙蓉,阮力,任贵方,朱既明
利用末端重叠ＰＣＲ法和定点突变技术，获得了去除Ｎ－连接多糖结构的乙肝表面抗原Ｓ突变基因，将乙肝表面抗原Ｓ－蛋白中结合Ｎ－连多糖结构序列Ａｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒ中的第１４８苏氨酸的密码子ＡＣＴ，改变为编码甘氨酸的密码子ＧＧＴ。构建了该突变基因的表达载体并在ＣＨＯ细胞中表达，筛选到两株表达水平较高的细胞系。对其中的一株细胞系Ｃ４１的表达产物做了初步纯化和鉴定。纯化样品经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析，只含有２３ｋＤ一条蛋白带，而对照原基因ＣＨＯ细胞的表达产物则含有２３ｋＤ、２７ｋＤ和３０ｋＤ三条蛋白带，证实经人工修饰后其哺乳动物细胞表达产物不再含有糖基，纯化样品在电镜下可清楚地显示２２ｎｍ的球形颗粒。单克隆抗体反应谱分析发现，ＣＨＯ细胞表达的无糖ＨＢｓＡｇ与含糖ＨＢｓＡｇ的抗原表位存在明显差别。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 102k] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 周玲,王汉明,刘海鹰,曾毅
将Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ（ＥＢ）病毒主要的膜抗原（ＭＡ）ＢＬＬＦ１基因片段插入ｐＨＤ１０１－３质粒的ＣＭＶ启动子下游，构建了真核表达质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０，并转染２９３细胞进行瞬间表达。用免疫荧光法从细胞膜检测到表达的抗原能与其单克隆抗体发生特异性结合，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法证实，表达的抗原分子量为３５０ｋＤ．用能在真核细胞表达的重组质粒ｐＨＤ－ｇｐ３５０的ＤＮＡ，经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ柱纯化后，注射经普鲁卡因预处理的Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠的四头肌，观察到ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ抗体水平比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ低，而ＥＢＶ－ＩｇＡ／ＭＡ的持续时间比ＥＢＶ－ＩｇＧ／ＭＡ长。采用表达ＥＢＶＭＡ的质粒ＤＮＡ与ＣＨＯ细胞表达的ＭＡ蛋白免疫小鼠，均获得抗ＥＢＶＭＡ的抗体。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 67k] [下载次数：57 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 侯宗柳,Ｆｒａｎｚ Ｘ Ｈｅｉｎｚ,Ｍｉｃｈｅａｌ Ｅｃｋｅｒ,白登云,刘瑞璋,俞永新
从我国东北林区死者脑组织中，分离到蜱传脑炎病毒ＨＬＪ－１株，测定了它的Ｅ蛋白基因序列和推导的氨基酸序列，以及Ｅ蛋白抗原位点反应图谱。将该株与远东亚型Ｓｏｆｙｎ株和中欧亚型Ｎｅｕｄｅｒｆｌ株做了同源性比较，ＨＬＪ－１株与Ｓｏｆｙｎ株Ｅ蛋白基因的核苷酸及氨基酸的同源性分别为９４．３％和９８．８％；与Ｎｅｕｄｏｅｒｆｌ的核苷酸和氨基酸的同源性分别为８３．７％和９６％，在Ｅ蛋白的核苷酸序列中，ＨＬＪ－１和Ｓｏｆｙｎ株之间存在着８５个碱基的变异和６个氨基酸的改变，变化的氨基酸分别是Ｓｅｒ－４３８→Ｇｌｙ，Ａｒｇ－４５１→Ｌｙｓ，Ａｌａ－６１２→Ｖａｌ，Ｍｅｔ－６３８→Ｉｌｅ，Ａｓｎ－６４６→Ｔｈｒ，Ｖａｌ－６８２→Ａｌａ。从Ｅ蛋白的模型得知，变异的氨基酸位于Ｅ蛋白的保守区域，故对抗原性影响不大。另Ｅ蛋白位点总图谱显示，ＨＬＪ－１与Ｓｏｆｙｎ株在Ｃ位点的反应存在差异，这可能是由于培养液低ｐＨ引起ＨＬＪ－１的空间结构改变所致。本文首次从基因水平证实了从东北林区分离的蜱传脑炎病毒属于远东型蜱传脑炎病毒。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 70k] [下载次数：118 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 赵永军,Ｊ．Ｂ．Ｃａｍｐｂｅlｌ,殷震
将两株１型犬腺病毒（Ｃａｎｉｎｅａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＣＡｄ１）ＤＮＡ片段（２９～４０ｍ．ｕ．）和两株２型犬腺病毒（ＣＡｄ２）ＤＮＡ片段（２８～４４ｍ．ｕ．），分别克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ中。经核苷酸序列测定和计算机分析表明，在上述克隆片段内，两株ＣＡｄ１（ＣＬＬ和Ｇｌａｘｏ）的序列相同，两株ＣＡｄ２（Ｔｏｒｏｎｔｏ和Ｃｈｉｎａ）的序列也相同；ＣＡｄ１与ＣＡｄ２具有９１．３％的序列一致性，而ＣＡｄ１与人腺病毒２型（ＨＡｄ２）有６０．５％的序列一致性。最重要的是发现１、２型犬腺病毒基因组均缺失ＶＡＲＮＡ编码区序列，因此表明ＶＡＲＮＡ与犬腺病毒两型之间的毒力差别，以及同型强弱毒株之间的毒力差异没有关联，ＶＡＲＮＡ在犬腺病毒持续感染中也不起作用。另外发现，犬腺病毒末端蛋白前体的主体外显子及其剪接受体位点是保守的。还推断了犬腺病毒５２．５５ｋＤ蛋白的启始密码子的可能位点。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 68k] [下载次数：112 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 许煜泉,胡小松,Ｂｒｅｔ Ｍｏｒrｉｓ
应用基因突变技术，在烟草黄矮双生病毒（Ｔｏｂａｃｏｙｅｌｏｗｄｗａｒｆｇｅｍｉｎｉｖｉｒｕｓ，简称ＴｏｂＹＤＶ）基因组的正义和反义链引入或缺失碱基，从而构建成一系列移码突变体。这些突变体在个别感染的情况下，全部丧失了系统侵染三生烟植株的能力，但是，成对地进行接种，能发生持久的互补作用，重新获得系统侵染的能力。突变体的互补作用发生在重组之前。在个别感染的叶块组织中，各种反义链突变体丧失了复制能力，然而，突变体Ｖ１－、Ｖ２－和Ｖ１－Ｖ２－能高度复制，表明反义链读码框编码产物为复制所必需，Ｖ１和Ｖ２读码框编码产物与复制无关，而为病毒的转移所必需。从Ｖ１－和Ｖ２－转化叶块中再生转基因植株，发现Ｖ１－和Ｖ２－都能在植株中维持复制，但是，只有Ｖ１－引起典型的病症，表明Ｖ１编码产物与病症出现无关。这些结果将为发展ＴｏｂＹＤＶ为载体，在寄主植物中高度复制和表达外源基因提供依据。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 115k] [下载次数：82 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 卢雄斌,周国瑛,吴建华,龚祖埙
通过有机试剂抽提，ＣＦ－１１纤维素柱层析，从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株（ＲｉｃｅＲａｇｇｅｄＳｔｕｎｔＶｉｒｕｓ，Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｉｓｏｌａｔｅ，简称ＲＲＳＶ－Ｐ）的水稻植株中获取该病毒的全基因组，即获得从Ｓｅｇｍｅｎｔ１到Ｓｅｇｍｅｎｔ１０（Ｓ１－Ｓ１０）的１０条双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ），然后设计合适的引物，用ＲＴ－ＰＣＲ方法得到Ｓ９的ｃＤＮＡ并将其克隆到ｐＵＣ１１９质粒上扩增，以双链测序法测定该ｃＤＮＡ的全序列。同时又将此ｃＤＮＡ克隆到大肠杆菌表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ上，在大肠杆菌菌株ＤＥ３中用ＩＰＴＧ诱导表达，经超声波破菌、离心、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，得到纯化的分子量为６４ｋＤ的融合蛋白。
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 105k] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ] - 王汉明,周玲,张晓梅,曾毅,Ｈ Ｗｏｌｆ
Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒ＢＬＲＦ２基因重组质粒的构建及其在真核细胞中的表达王汉明周玲张晓梅曾毅ＨＷｏｌｆ（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒ病毒，ｐＨＤ－ＢＬＲＦ２，短暂表达，Ｐ２３，鼻咽癌Ｅｐｓｔｅｉ...
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 47k] [下载次数：49 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 于善谦,吴政宏,朱乃硕,秦进,赵立山,章道道
两种核酶对烟草花叶病毒ＲＮＡ片段的体外剪切于善谦吴政宏朱乃硕秦进赵立山章道道（复旦大学微生物系，上海２００４３３）关键词核酶，烟草花叶病毒，体外剪切核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）是具有特殊结构的ＲＮＡ分子，表现酶解活性，对核酸的切割有顺序专一性。...
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 48k] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 王根,张传溪,贡成良,金伟,吴祥甫
棉铃虫核型多角体病毒多角体蛋白基因的克隆和核苷酸序列分析王根张传溪贡成良金伟吴祥甫（中国科学院上海生物化学研究所，上海２０００３１）关键词棉铃虫，核型多角体病毒，多角体蛋白基因，核苷酸序列，同源性棉铃虫Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ（Ｈｅｌｉｏｔｈｉ...
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 100k] [下载次数：136 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：3 ] - 黎路林,陈曲侯
已经鉴定的杆状病毒基因及其功能黎路林王章陈曲侯（华中师范大学昆虫学研究所，４３００７０）杆状病毒基因组是单一闭合环状双链ＤＮＡ分子，大小为８０－１６０ｋｂ，近几年有关杆状病毒基因结构、功能和表达调节的研究工作进展迅速，目前已经报道了近６０个杆状病...
1997年01期 [查看摘要][在线阅读][下载 123k] [下载次数：187 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：3 ] 下载本期数据