- 曾力宇,金奇,朱雷,章金钢,殷震,侯云德
鸡减蛋综合征病毒(EggDropSyndromeVirus,EDSV)巯基内肽酶的基因序列分析曾力宇1金奇1朱雷1章金钢2殷震2侯云德1关键词鸡减蛋综合征病毒(EDSV),巯基内肽酶(Thiol-endopeptidase),核苷酸序列分析EDS病毒...
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 79k] [下载次数:43 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:15 ] |[阅读次数:362 ] - 刘文军,杨芙蓉,阮力,任贵方,朱既明
三种病毒启动子在中国地鼠卵巢(CHO)细胞中表达活性的比较刘文军杨芙蓉阮力任贵方朱既明(中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052)关键词CHOdhfr-细胞,启动子,瞬时表达,HBsAg基因,CAT基因目前大多数哺乳动物细胞表达载体中的启动子-...
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 44k] [下载次数:229 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:28 ] |[阅读次数:420 ] - 颜子颖,乔健,贡惠宇,王海林,李艳春,侯云德
发展了一种高效的、能将携带外源基因的质粒型EB病毒载体特异性地导入肝细胞表达的方法。将EB病毒复制子载体pDR2经改造得到携带外源基因的pEBluc质粒。将pEBluc与人工制备的、既保留了DNA结合活性又能为肝细胞受体识别并内在化的半乳糖基化组蛋白的fl组分结合,形成pEBluc-半乳糖基化组蛋白复合物。该复合物通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞进入肝细胞并表达。pEBluc质粒在细胞内能稳定存在并自主复制。该系统具有应用于以肝细胞为靶组织的基因治疗的前景。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 55k] [下载次数:56 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:420 ] - 刘文军,杨芙蓉,阮力,任贵方,朱既明
利用谷氨酰胺合成酶基因(GS)[1]作扩增选择标记,结合CMV-IE启动子,在CHO细胞中高效表达乙型肝炎表面抗原基因。初筛克隆表达水平RPHA检测为1:64,经过谷氨酰胺合成酶基因的抑制剂MSX的两轮基因扩增,HBsAg的表达水平RPHA在1:256以上。方瓶静置培养收液,RIA检测HBsAg最高产量为9.5μg/毫升。表达水平较以前利用dhfr基因扩增选择系统所得到的高表达细胞系B43高一倍以上。利用GS基因扩增选择系统可以在哺乳动物细胞中高水平表达外源基因。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 82k] [下载次数:315 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:9 ] |[阅读次数:339 ] - 韩保光,孟莉,马贤凯,宋晓国,邹民吉,凌世淦,王嘉玺
在大肠杆菌中,利用新构建的含T7噬菌体g-10核糖体结合位点(RBS),以及λ噬菌体PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24(CA)的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N-端7个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致,在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95%以上的纯度。ELISA分析表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 128k] [下载次数:263 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:4 ] |[阅读次数:416 ] - 邱建明,董泽平,杭长寿,谢蔚玫,宋干
采用5′端生物素标记汉滩病毒特异性寡核苷酸探针,结合磁性分离技术和异硫氰酸胍-酚一步法(胍酚法)提取病毒RNA,进行反转录-套式PCR,检测肾综合征出血热(HFRS)病人血清样本,胍酚法能检测血清中至少几个PFU病毒的RNA,比磁珠法敏感10倍,整个检测过程在5小时完成。应用该方法对137份汉滩型和汉城型HFRS病人血清进行检测分型,总阳性率达60.50%。其中,病程在7日以内(急性期)的病人血清仍能检测到22.73%阳性率。扩增产物经打点杂交检测证实为特异性扩增,并能准确分型。与空斑减少中和试验(PRNT)分型的符合率为100%。对20份正常人及24份非HFRS患者血清进行PCR扩增,结果均为阴性。将全部试剂做成试剂盒,为基层单位早期诊断肾综合征出血热病人提供了操作简便、特异、敏感、快速、直接的诊断方法。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 75k] [下载次数:157 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:31 ] |[阅读次数:373 ] - 童葵塘,宋一鸣,应国光,王光娟,王韦,庄晨杰,侯云德,张智清
用带有表达质粒pBV220(含有γ干扰素基因)的大肠杆菌DH5α株进行发酵培养,3批中试的菌产量平均为14.1克/L,γ干扰素的表达量平均为1.02×109IU/L,收集的菌体经高压匀质破菌后收集包涵体,用7mol/L盐酸胍提取干扰素,此过程可去除78.4%菌体蛋白,而干扰素活性仅损失10.41%,粗制干扰素经复性可使干扰素活性提高405%,比活也有明显提高,3批平均为1.76×107IU/mg蛋白,复性γ干扰素用三步柱层析法进行纯化,其其得率平均为28.13%,其比活分别为3.22、2.78和3.01×107IU/mg蛋白。3批中试的纯化γ干扰素纯度在SDS-PAGE测定均>99%,高效液相层析(HPLC)测定>98%,其它检定项目也均合乎规程要求。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 42k] [下载次数:109 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:10 ] |[阅读次数:316 ] - 李伍举,吴加金
运用基于螺旋区随机堆积的RNA二级结构预测与密码子偏性计算等序列分析技术,分析了pBV220载体中携带的人白细胞介素2、人白细胞介素4等22个外源基因的表达水平。结果表明:5′端-30~39区域和3′端30~-39区域的二级结构自由能与表达水平具有显著的统计学意义;其次是3′端9bp的局部密码子偏性,SD序列与起始密码子ATG之间碱基数在8±3范围内与表达水平无显著关系。另外,运用判别分析方法构建了判别函数,判别符合率高达95.5%。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 61k] [下载次数:279 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:45 ] |[阅读次数:376 ] - 刘淑红,陈荷新,陈家童,梁栋,陈启民,耿运琪,Wood.C.
从一头牛免疫缺陷病毒(BIV)检测阳性的3026号牛外周血中,分离到一株病毒,即3026病毒株。体外细胞培养和反转录分析证明,此病毒是一反转录病毒,可在胎牛肺细胞中引起典型的泡沫样病变,形成合胞体。PCR扩增和Southern杂交显示,此病毒的cDNA和PCR产物均可与牛泡沫病毒(BSV)阳性对照的HirtDNA杂交。3′LTR上游一段330bp的PCR产物序列分析表明,3026毒株与BSV阳性对照相比发生了两个碱基的改变。所有这些表明,3026病毒是一株新发现的BSV毒株。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 90k] [下载次数:103 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:16 ] |[阅读次数:364 ] - 陈细法,吴定虎,黄槐,陈平,池信才
应用电镜超薄切片及光学石蜡切片和环氧树脂薄片技术,观察健康对照组、疾病始发组和濒临死亡组的草虾、中国对虾、日本对虾和长毛对虾的肝胰腺和中肠,结果在3组4种对虾中均检测到病毒,只在濒临死亡组的4种对虾中发现病毒与细菌的合并感染。合并感染的病毒有MBV、球形病毒和淋巴样细胞核型杆状病毒。细菌以弧菌为主,其病理变化表现为器官和组织的保护层受损、溶解样坏死和凝固样坏死。仅以病毒和细菌合并感染作为养殖对虾病毒病早期诊断的指标是不够的,仅可作为辅助性诊断指标。但合并感染对评估对虾病毒病的预后以指导捕捞,却有一定意义。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 90k] [下载次数:128 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] |[阅读次数:298 ] - 马学军,杜东毅,尹华丽,侯云德
特异结合人IFNα1b中和抗体的两个短肽马学军杜东毅尹华丽侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052)关键词噬菌体表面呈现,肽库,人干扰素α1b噬菌体表面呈现(Phagedisplay)技术是Smith博士[1]于1985年建立起来的,...
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 39k] [下载次数:38 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:510 ] - 杜东毅,马学军,张丽兰,郭德本,侯云德
小鼠单链抗体文库的构建和抗人的IFNα-1b抗体的筛选杜东毅马学军张丽兰郭德本侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052)关键词噬菌体表面呈现,抗体库,rIFNα-1b(重组干抗素α1b)目前,抗体的研究与生产主要依赖于单克隆抗体技术,...
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 28k] [下载次数:61 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:369 ] - 林广云,龙綮新,何代芬,曲士芮,庞义
利用空斑技术,从既能形成多角体又含TK酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒AcMNPV-TK中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株AcMNPV-TKmt513。用EcoRI、PstⅠ、BglⅡ及KpnⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第25位的氨基酸密码子由GGT变为GAT,该位氨基酸由甘氨酸(Gly)变为天冬氨酸(Aspq)还利用PCR技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒pEV55,与不形成多角体的重组病毒TnNPV-HBsD4DNA共转染Sf9细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 141k] [下载次数:71 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:364 ] - 胡勤学,张春立,陈捷,吴德喜,林木兰
分别用生物素肼化学标记和DIG标记我国柑桔裂皮病类病毒(CEVd)全长克隆cDNA,用以上探针对不同来源的核酸样品进行斑点杂交。两种探针可检出病柑桔总核酸的最低含量约为400ng/斑点和80ng/斑点;生物素肼标记CEVd-cDNA探针,可检出CEVd-cDNA的最低含量约为10pg/斑点。研制的CEVd检测试剂盒能检测出发病和隐性带毒苗木中的CEVd,灵敏、特异、简便、快速、试剂盒已被用于检测来自我国主要裂皮病病区、湖南、湖北、福建等地的柑桔和香橼材料。
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 56k] [下载次数:94 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:17 ] |[阅读次数:416 ] - 程宁辉,杨金水,濮祖芹,方中达,方荣祥
宁沪杭地区黄瓜花叶病毒(CMV)株系群划分的初步研究程宁辉1杨金水1濮祖芹2方中达2方荣祥3关键词黄瓜花叶病毒,鉴别寄主,株系,毒力黄瓜花叶病毒(CucumberMosaicVirus,CMV)是由蚜虫以非持久性方式传播的世界性分布的植物病毒种群,已...
1997年02期 [查看摘要][在线阅读][下载 48k] [下载次数:127 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:20 ] |[阅读次数:344 ] - 张英,李爱民
噬菌体表面表达技术及其在抗病毒研究中的应用现状和前景张英李爱民(中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室,北京100052)噬菌体表面表达技术(PhageDisplayTechniques,PDT技术),是由美国Misouri大学Sm...
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