- 梁米芳,李德新,杭长寿,吴兴安,朱公文,薛颍,李川,宋干
运用噬菌体表面表达（Ｐｈａｇｅｄｉｓｐｌａｙ）技术，获得人源中和性抗汉滩病毒汉滩型Ｇ１基因工程单克隆抗体（单抗）Ｆａｂ段基因及其表达，并同时获得抗汉滩病毒核蛋白（ＮＰ）的Ｆａｂ抗体。从肾综合征出血热疫区恢复期病人抗凝血中分离到的外周淋巴细胞中，提取了总细胞ＲＮＡ。通过ＲＴ－ＰＣＲ方法，用一组人ＩｇＧＦａｂ基因特异性引物，从合成的ｃＤＮＡ中经ＰＣＲ扩增了一组轻链和重链Ｆａｂ段基因，将轻链和重链先后插入噬菌体载体ｐＣｏｍｂ３，成功地建立了抗汉滩病毒抗体基因库，并用纯化的汉滩病毒颗粒及抗汉滩病毒糖蛋白鼠单抗捕捉糖蛋白抗体原的方法，对此抗体库进行了富集筛选，在短期内成功地获得了抗汉滩病毒核蛋白和糖蛋白Ｇ１的人源单抗Ｆａｂ段基因，并在大肠杆菌中获得有效表达。核苷酸序列分析证实，所获得的基因为人源ＩｇＧＦａｂ基因。用特异性放射免疫沉淀（ＩＰ）、ＩＦＡＴ和ＥＬＩＳＡ以及空斑减少中和试验鉴定表明，表达的人Ｆａｂ抗体能识别汉滩病毒结构蛋白，其中抗Ｇ１人Ｆａｂ抗体具有体外中和活性。人源抗汉滩病毒基因工程抗体的获得，为今后可能的临床应用提供了良好前景。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 239k] [下载次数：144 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：3 ] - 乔健,颜子颖,贡惠宇,王海林,钱振超,侯云德
在先前的体外实验中，我们利用半乳糖基化组蛋白与带荧光素酶报告基因的ＥＢ病毒复制子载体ｐＥＢｌｕｃ，在体外组建了一种核酸蛋白质复合物。它可被肝细胞表面特异存在的脱唾液酸糖蛋白（Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＳＧＰ）受体识别，并通过该受体介导的内吞作用将外源基因特异性导入培养的肝细胞素中表达。在此基础上，我们对该核酸蛋白复合物进行的电子显微镜观察表明，其大小在１００ｎｍ以内。在动物体内试验中证实了通过体液循环将此复合物靶向传递到肝组织的可能性。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：31 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 于文,琦祖和
将核心抗原基因起始码下游的序列，构建两个ＣＡＴ报告基因表达质粒，即ｐＣＡＴＮⅠ和ｐＣＡＴＮⅡ，转染ＨｅｐＧ２与ＣＶ－１细胞后，均可使ＣＡＴ报告基因表达，表现出启动子活性。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 85k] [下载次数：32 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 闻玉梅,马张妹
对１８份不同类型的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者血清及４份肝癌组织，用套式ＰＣＲ扩增ＰｒｅＣ／Ｃ基因，结果１５份标本（２份重症乙肝，３份慢性乙肝，８份肝癌患者血清及２份肝癌组织）可供进行核苷酸序列分析。１２份血清标本在Ｃ区均出现点突变（７－２５个核苷酸）并导致氨基酸改变（２－１２个氨基酸）。１份肝癌患者的血清及癌组织与另１份癌组织中获得的Ｃ基因克隆有２１３－３２４个核苷酸缺失。氨基酸的改变分布于３７个氨基酸，但很少见于第１３９－１８３位氨基酸。根据已知Ｃ基因编码的功能区分析，以诱生ＨＢｃＡｇ抗体的Ｂ细胞表位及ＨＢｅ１的Ｂ细胞表位相对较多见。比较不同类型ＨＢＶ感染者中ＨＢＶＣ基因变异率，未见明显差别，尚需对更多例数作研究。有４个氨基酸（第１９，６３，９３，９７位）改变在３份以上标本中重复出现。对这些密码子的核苷酸作定位点突变及抗原表达将进一步阐明其意义。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 55k] [下载次数：55 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 李迎秋,龙綮新,徐帆,江立敏,庞义
通过ＰＣＲ获得长度为６４０ｂｐ的ＨＢＶｐｒｅＣ／Ｃ基因片段，将其克隆入转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４，构建出重组质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４－ｐＣ／Ｃ。利用共转染的方法，构建出既能形成多角体又能表达ｐｒｅＣ／Ｃ基因的重组毒株ＴｎＮＰＶ－ｐＣ／Ｃ－ＯＣＣ＋。该重组毒株中ｐｒｅＣ／Ｃ基因受到串联的双启动子－合成启动子和含ＨｉｎｄⅢ接头的ＸＩＶ启动子的双重调控。对感染重组毒株的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ，Ｓｆ）细胞及其培养上清分别进行ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｇ固相放射免疫检测，发现受感染细胞及其培养上清均呈ＨＢｅＡｇ阳性，ＨＢｃＡｇ阴性；进一步做Ｗｅｓｔｅｒｎ分析表明，受感染细胞总蛋白中２６ｋＤ及培养上清１５ｋＤ处，呈现与ＨＢｅＡｇ单克隆抗体特异性反应条带。结果表明，克隆的乙肝病毒ｐｒｅＣ／Ｃ基因在杆状病毒载体系统中得到正确表达和加工，加工产物能够有效分泌。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 92k] [下载次数：61 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 侯晓辉,张礼璧,Ｔ．Ｙｏｎｅｙａｍａ,Ｋ．Ｙｏｓｈiｉ,Ｈ．Ｓｈｉｍｉｚｕ,Ｈ．Ｙｏｓｈｉｄａ,李杰,郑红,方勇,朱宏,Ｍ．Ｈａｒａ,Ａｋｉｏ,Ｈａｇｉｗａｒａ
对１９９４年中国分离的１３株脊髓灰质炎Ⅱ型疫苗相关株进行了ＰＣＲ－ＲＦＬＰ分析，发现７株为重组病毒，毒力较疫苗株有回复。在Ⅱ型脊髓灰质炎病毒基因序列上，对于神经毒力有重要影响的第４８１位核苷酸发生了突变（Ｃ→Ｇ），另一个被视为重要位点的第２９０８位核苷酸无一发生变化，反而在第２９０９位核苷发生了高频率的点突变，意味着２９０９位点在中国Ⅱ型疫苗相关株的自然变异中可能起着重要作用。根据转基因小鼠实验和温度敏感实验（Ｒｃｔ－ｍａｒｋｅｒ），脊髓灰质炎病毒的神经毒力大小并不与温度敏感实验所显示的毒力特征呈正相关性。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 99k] [下载次数：65 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 白旭华,管永军,张远志,邵一鸣,王冬莉,苏玲,刘小良,赵全壁,杜大卫,ＪｏｓｅｆＫｏｓｔｌｅｒ,ＨａｎｓＷｏｌｆ
应用ＰＣＲ方法对７份１９９６年３－５月采集于新疆乌鲁木齐ＨＩＶ－１阳性静脉吸毒者的外周血单核细胞（ＰＢＭＣｓ）样品进行扩增，获得了ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因的核酸片段，并对其Ｃ２－Ｖ３区及邻区３５０－４５０个核苷酸序列进行了测定和分析。研究结果表明，７份样品都为Ｃ亚型的ＨＩＶ－１毒株序列，其组内的基因离散率为１．０％；与Ａ－Ｅ参考亚型及部分Ｃ亚型代表株序列相比较，这７个毒株与代表印度Ｃ亚型毒株及云南德宏州Ｃ亚型毒株的序列十分相似，其组间的基因离散率均为３．５％，与非洲Ｃ亚型毒株ｎｏｆ的基因离散率为１４．０％。根据以上数据及其它资料提示，ＨＩＶ－１在新疆乌鲁木齐的流行时间不长，且其毒株的传入与流行在云南德宏州的相同亚型ＨＩＶ－１毒株密切相关。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 53k] [下载次数：83 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：3 ] - 陈庆华,张智清,宋永胜,郭应禄,侯云德
转细胞因子基因的肿瘤细胞疫苗是当今肿瘤免疫－基因治疗研究的热点。本文用逆转录病毒载体将人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因转入大鼠Ｗａｌｋｅｒ瘤细胞株ＷＲＣ２５６，经Ｘ－射线灭活制备肿瘤疫苗。经ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ检测证实。ＧＭ－ＣＳＦ基因已成功地导入ＷＲＣ２５６细胞。生物学活性检测表明，灭活前后的转基因瘤细胞均能持续分泌ＧＭ－ＣＳＦ。动物试验结果表明，转基因瘤苗具有明显的抗肿瘤活性。并能诱导具有杀死瘤细胞功能的特异性细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）。本工作对细胞因子基因瘤苗的研究及临床应用将具有重要意义。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 96k] [下载次数：45 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 曾力宇,金奇,章金钢,李茂祥,姚二梅,殷震,侯云德
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒弱毒株ＡＡ－２，经常规方法提取其病毒核酸后，组建了完整的限制性内切酶ＰｓｔⅠ及ＨｉｎｄⅢ水解片段的基因文库，并对其中ＨｉｎｄⅢ（２１．０ｍ．ｕ．）－ＳａｃⅠ（３３．２ｕ．）进行了序列测定。同源比较分析证明：其Ｌ链含编码病毒末端前体蛋白，容量为５８０个氨基酸残基（ａａ）的开放读码框架（Ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ，ＯＲＦ）。由此推导的多肽氨基酸序列及结构特点，如保守序列、核定位信号（Ｎｕｃｌｅａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎｓｉｇｎａｌ）。等与其他腺病毒的相应多肽存在较大差异。本文为阐明腺病毒末端前体蛋白参与ＤＮＡ复制起始的机制提供了新的依据。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 83k] [下载次数：58 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 刘淑红,陈荷新,陈家童,陈启民,耿运琪,ＣＷｏｏｄ,秦贞奎,赵祥平,候艳梅,曾毅
从一头标号为９２０４４的进口奶牛分离外周血淋巴细胞，将此淋巴细胞与正常胎牛肺细胞（ＦＢＬ）进行共培养，一个月后共培养物出现合胞体。此时电镜观察可见病毒的出芽过程。免疫染色显示，此培养物可与牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）外膜蛋白的单克隆抗体特异性结合。对共培养物裂解产物进行ＰＣＲ，可分别得到ＢＩＶ反转录酶（ＲＴ）编码区和外膜蛋白编码区（ｅｎｖ）的特异性带。序列分析显示，ＰＣＲ的ＲＴ产物与美国的ＢＩＶＲ２９毒株有两个碱基的改变，从而证明我们在中国分离到一株ＢＩＶ。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 146k] [下载次数：66 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 王林川,廖明,王红宁,黄勇,辛朝安
用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了禽传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）标准毒株Ｍ４１、Ｈ５２、Ａ５９６８和国内分离株Ｄ４１、Ｆ、Ｇ的Ｓ１基因，对它们做ＲＦＬＰ分析，发现Ｄ４１、Ｆ株属于马萨诸塞血清型、Ｇ株为变异株。对用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ来区分ＩＢＶ的分型方法的应用理论和前景进行了论述。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 59k] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：3 ] - 祝海涛,陈晓英,罗宗礼,方荣祥,高东明
从水稻黄矮病毒（ＲＹＳＶ）基因组的ｃＤＮＡ文库中，获得了包含邻接核衣壳蛋白基因的基因２的克隆，并测定了其核苷酸序列。ＲＹＳＶ基因２的５′端起始序列推测为５′－ＡＡＣＡＣ－３′，该起始序列与ＲＹＳＶ其他基因及其他弹状病毒基因的５′端起始序列高度同源。通过测定感病水稻体内ＲＹＳＶ基因２的转录物的３′端序列，精确地定位了ＲＹＳＶ基因２的３′端终止位点。由此确定ＲＹＳＶ基因２全长１２１１个核苷酸，它含有４２个核苷酸的５′端非翻译区，９６９个核苷酸的蛋白质编码区（包括一个终止密码子）及２００个核苷酸的３′端非翻译区。ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白质的氨基酸序列与其它弹状病毒基因２编码的磷酸化蛋白（ＶＳＶ的Ｐ蛋白，ＲＶ的Ｍ１蛋白和ＳＹＮＶ的Ｍ２蛋白）相比，缺乏广泛的同源性，但尚存在一个长约３０个氨基酸的序列保守区域。而且ＲＹＳＶ基因２编码的蛋白中含有７个可被ＣａｓｅｉｎｋｉｎａｓｅⅡ磷酸化的位点（Ｓ／Ｔ－Ｘ－Ｘ－Ｄ／Ｅ），有可能它也是一个磷酸化蛋白。因此推测ＲＹＳＶ基因２编码ＲＹＳＶＮＳ蛋白。
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 78k] [下载次数：69 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 李国华,靖宇,钱渊
我国Ｇ９型轮状病毒ＶＰ７编码基因的序列分析李国华靖宇钱渊（首都儿科研究所北京市感染与免疫中心实验室，北京１０００２０）关键词轮状病毒，ＶＰ７，序列分析Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最重要病原，也是导致发展中国家婴幼儿死亡的主要原因之一〔１〕。轮状...
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 79k] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：3 ] - 沈中建,陈梅琴,吴祥甫
蓖麻蚕血细胞系的建立及同源核型多角体病毒的体外复制沈中建陈梅琴吴祥甫（复旦大学生命科学学院病毒研究室，上海２００４３３）关键词蓖麻蚕，细胞系，核型多角体病毒，体外复制细胞培养技术已成为昆虫病毒基础和应用研究中极其有用的手段。尤其在人们利用杆状病毒作...
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 94k] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：3 ] - 杨茂,陶佩珍
单纯疱疹病毒Ⅰ型基因表达调控研究的进展杨茂陶佩珍（中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所，北京１０００５０）单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨｅｒｐｅｓＳｉｍｐｌｅｘＶｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＳＶ－１）属疱疹病毒科α亚科。由于该病毒毒能引起多种感染，且能在...
1997年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 62k] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] 下载本期数据