• 齿兰环斑病毒外壳蛋白基因克隆及序列分析

    刘志昕,潘俊松,邵寒霜,郑学勤

    齿兰环斑病毒外壳蛋白基因克隆及序列分析刘志昕潘俊松邵寒霜郑学勤(中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海南儋州571737)关键词齿兰环斑病毒,外壳蛋白基因,序列分析兰花受病毒危害相当严重,齿兰环斑病毒(Odontoglosumrings...

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  • 人干扰素α1c/86DAB环突变文库的构建及细胞筛选

    马学军,胡荣,吕海,魏开坤,张丽兰,薛水星,侯云德

    人干扰素α1c/86DAB环突变文库的构建及细胞筛选马学军胡荣1吕海2魏开坤张丽兰薛水星侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所,病毒基因工程国家重点实验室北京100052)噬菌体表面呈现(phagedisplay)技术是由Smith〔1〕博士于19...

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  • 痘苗病毒天坛株4b启动子的转录效率

    崔虹,容敏清,王芝山,侯云德

    痘苗病毒天坛株4b启动子的转录效率崔虹容敏清王芝山侯云德(中国预防医学科学院病毒学研究所病毒基因工程国家重点实验室,北京100052)关键词痘苗病毒,4b启动子痘苗病毒载体在多价基因工程疫苗的研制中十分重要,外源基因在重组痘苗中的高效表达主要依靠启...

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  • 两株中国腮腺炎野毒SH基因cDNA直接测序和克隆测序

    武力,白植生,李益民,周旭,宁小军,杨朝晖

    对来源于兰州和上海两市的两株腮腺炎病毒野毒的小疏水蛋白(SH)基因及其旁侧区cDNA的PCR扩增产物,分别进行直接测序和克隆测序。用直接测序法测定2株腮腺炎野毒378个核苷酸序列,在此范围内存在16个核苷酸(4.2%)差异,其中11个(2.9%)位于编码区序列中,所推导的SH蛋白序列有6个氨基酸(10.5%)差异。克隆测序法测定的这两株腮腺炎野毒的核苷酸序列相当于直接法的78-378位核苷酸。两种方法在所测301个核苷酸(nt)的共同区域内序列完全一致。证明PCR产物直接测序用于腮腺炎病毒分子流行病学研究不仅特异性强,敏感度高,而且比克隆测序法更为快速简便,节省材料

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  • 朱既明同志生平

    朱既明同志生平中国共产党优秀党员、中国预防医学科学院科技顾问、中国预防医学科学院病毒学研究所名誉所长,中国科学院院士、著名科学家、病毒学家朱既明同志,因病医治无效,于1998年1月6日逝世,享年81岁。朱既明是江苏省宜兴市人,生于1917年9月12日...

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  • 乙型肝炎病毒表面抗原aa126 Ile→Ser变异株HBsAg的暂时表达和抗原性鉴定

    房德兴,甘人宝,张倩,李载平,段恕诚,殷震

    曾在一个儿童患者体内,发现一个新的乙型肝炎病毒(HBV)变异株,其HBsAg主蛋白aa126发生Ile(ATT)到Ser(AGT)的取代。已知adr/ayr亚型HBsAg126位为Ile,而adw/ayw亚型HBsAg126位为Thr,表明HBsAg126Ser是一个新的变异株。用计算机做结构分析的结果表明,突变体HBsAg126Ser主蛋白aa120-aa130区段的二级结构与野生型adrHBVHBsAg126Ile相比发生明显的改变。这种构象的变化可能会影响a抗原决定簇(a124-aa147)的抗原性。为了证实这一点,构建了突变S基因表达质粒,在SV40早期启动子的控制下进行抗原表达。利用HBsAg9肽(Thr-Ile126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗i单克隆抗体和9肽(Thr-Thr126-Pro-Ala-Gln-Gly-Thr-Ser-Met)抗t单克隆抗体进行放射免疫测定,结果表明,这种Ser126突变蛋白对抗i单克隆抗体的反应性比野生蛋白减弱,对抗t单克隆抗体的反应性则与HBsAg126Thr接近。但用三种抗-a单克隆抗体的检测结果揭示,突变蛋白HBsAg126?

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  • 乙型肝炎病毒与肿瘤抑制基因p53相互作用的生物学功能及意义

    朱明华

    以前的研究发现:HBVX蛋白能与肿瘤抑制基因p53蛋白结合,在原发性肝癌的发生中具有重要意义。为进一步探讨二者之间的关系,经过计算机比较分析发现,在HBV基因组中存在与经典的p53DNA-蛋白质结合位点类似的序列(TGCCT),用含有此序列的HBV基因片段作探针,与肝癌细胞核蛋白作用,通过凝胶电泳迁移率移位实验、凝胶电泳迁移率超移位实验和原位紫外线交联实验,确定其HBVDNA与p53蛋白的特异性结合;进一步用p53与HBVDNA共转染和定量PCR分析,探讨二者结合对HBVDNA复制的影响和意义。结果显示,HBV基因组中存在能与p53蛋白特异性结合的序列,使细胞内p53蛋白积聚,并反式激活,增强HBVDNA的复制。这一结果对进一步揭示HBV感染与原发性肝癌发生的关系,具有非常重要的意义

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  • 单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达

    杨天忠,王晓丹,崔虹,颜子颖,侯云德

    从单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1tsK的混合毒株dvHSL。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞,可在其中表达LacZ基因,而在生理温度(37℃)下,混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。

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  • 鸡传染性支气管炎病毒免疫原基因cDNA的克隆和序列分析

    张玉根,郭玉璞,陈永福

    从含有鸡传染性支气管炎病毒(Infectiousbronchitisvirus,IBV)的鸡胚尿囊液中快速提取病毒RNA,得到约23kb全长IBVRNA。运用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)得到1.72kb编码全长IBV免疫原糖蛋白S1的基因片段。进一步将此基因片段插入到质粒pUC19中,进行全长片段的序列分析。结果表明,IBV北京株和Beaudete株的核酸同源性为97.8%,与M41株的核酸同源性达98.5%。

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  • 人乳头瘤病毒HPV16 E7蛋白基因在沙门氏菌疫苗菌株X4072中的表达

    金顺钱,陆士新,彭琼,谭文,陈瑞红,周春晓,杨晓,黄翠芬

    采用PCR方法,从HPV16型质粒中分离出HPV16E7基因片段,用EcoRI和SalI双酶解后,定向插入到表达质粒pYA3332(asd+)的Ptrc启动子下游,构建成pYA3332-HPV16-E7重组表达质粒。在大肠杆菌X6212上筛选出重组质粒后,通过中间菌株X3730的转化过渡,将重组质粒导入鼠伤寒沙门氏减毒疫苗菌株X4072(asd-),构建成宿主和载体之间具有平衡致死结构的HPV16型重组疫苗。SDS-PAGE染色和Westernblot法分析证实,该重组疫苗能特异地表达HPV16E7融合蛋白

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  • 鸡减蛋综合征病毒(EDSV)主要蛋白的结构分析

    曾力宇,金奇,章金钢,李茂祥,李虹,朱雷,殷震,侯云德

    鸡减蛋综合征病毒(EDSV)中国株AA-2基因组全长为32838bp,其编码病毒主要结构蛋白(52/55K、Ⅲa、五邻体、pVⅡ、pVⅠ、六邻体、100k、pVⅢ以及纤维蛋白等)的基因依次排列在基因组的中部,E2区编码DNA结合蛋白、DNA多聚酶、末端前体蛋白及IVaⅡ的基因也分别排列在EDSV基因组的负链上。对这些蛋白的氨基酸序列进行同源性比较后发现,EDSV的主要蛋白与羊腺病毒(OAV)同类物存在不同寻常的高同源性,说明EDSV与OAV很可能来源于同一个祖先

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  • 6株A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1(1D)基因的核苷酸序列分析

    刘在新,赵启祖,刘卫,周鹏程,朱彩珠,常慧芸,谢庆阁

    早期收集保藏的6株A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)(AL1-AL6),适应BHK21单层细胞后,提取6株细胞增殖病毒的RNA。用一对FMDV通用引物经反转录(RT)-PCR法扩增了约500bp的期望的DNA片段。克隆目的基因后,采用双脱氧DNA链末端终止法测得了6株病毒的VP1基因210-639核苷酸序列。分析表明,3株病毒缺失3个核苷酸,从推导的氨基酸序列比较,确定缺失的3个核苷酸正好是一个密码子,位于氨基酸序列的152或156位。6株病毒的VP1核苷酸序列的同源率是91%-98%,相应氨基酸序列的同源率为92.6%-97.5%。结果显示,核苷酸差异的频率高时,相应氨基酸的改变频度亦高。6株病毒VP1基因的核苷酸序列与已报导的A型FMDVA22的同源性较好(84%)。6株病毒的主要中和抗原位点VP1140-160位氨基酸序列差异较小,可能有相近的中和单抗表位和相同的抗原性。Goldkey软件分析表明,6株病毒间的遗传关系密切,在遗传系谱树上邻接。

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  • 烟草黄矮双生病毒中双向启动子的活性及其调节控制

    许煜泉,詹祥灿

    将烟草黄矮双生病毒(Tobacoyelowdwarfgeminivirus,简称TobYDV)中双向启动子的区域,以不同长度的片段和方向插入启动子分析载体pG1,与GUS报道基因和NOS终止子融合。同时,将各个TobYDV读码框区域插入表达载体pART7中,置于CaMV35S启动子和OCS终止子之间。用电穿孔法将各种启动子构建物个别地或者与读码框构建物成对地导入烟草和玉米原生质体,以考察TobYDV启动子控制下GUS基因瞬间表达的活性,以及TobYDV的读码框编码产物对启动子活性的调控作用。结果表明,在烟草原生质体中,C1+2基因的启动子活性最强,并受到C1+2读码框编码产物的抑制;而V1和V2读码框的启动子活性较弱,然而它为C1+2和V2,V2读码框构建物编码产物增强。在玉米原生质体中,与V1和V2基因的启动子相比,C1+2基因的启动子活性较低

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  • 广东两株人免疫缺陷病毒的分离和鉴定

    曾常红,江立敏,周惠琼,颜瑾,林鹏,徐慧芳,林恺生,赵茜茜,李美霞,温寿如

    从我省两名经性途径感染艾滋病的病人中采血,分离外周血单核细胞(PBMCs),将其与正常人PBMCs共培养分离人免疫缺陷病毒(HIV),3周后检测上清HIV-1p24抗原(ELISA法)超过阈值。将共培养第四周细胞和上清分别感染H9细胞(T细胞淋巴瘤传代细胞),一周后检测HIV-1p24抗原,证明有病毒生长。用HIV-1ENV基因引物的套式聚合酶链反应(NestedPCR)证实,两株新分离的病毒为HIV-1型。两株病毒分别命名为GD-1、GD-2,其中GD-1毒株经序列分析为E亚型。此毒株在H9细胞中连续传代后,仍能产生明显的细胞病变,并保持较高的滴度

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  • 我国脊髓灰质炎Ⅰ型野病毒JX基因型特异RNA探针及其应用

    郑渡平,朱宏,郑红,张礼璧

    及时发现脊髓灰质炎(脊灰)野病毒,是消灭脊灰工作中病毒学监测的首要任务。近期我国存在4个脊灰Ⅰ型野病毒基因型,其中P1/CHN-JX89和P1/CHN-R91为两个主要的流行基因型。在分析了我国大量脊灰野病毒VP1核酸序列的基础上,选取了1338JX89病毒VP15′端的96个核苷酸片段(2480-2575),经PCR扩增,克隆至pUC/T7质粒,线性化后,用T7RNA多聚酶制备RNA探针,并将Dig标记物渗入探针分子中。经杂交试验,两个主要基因型病毒全部与此探针呈阳性反应,而其它基因型和疫苗相关病毒均为阴性反应,体现了较好的特异性与敏感性,而且实验结果由核酸序列分析等证实。脊灰野毒探针的应用在国际上尚未见报道,它克服了疫苗探针杂交中容易遗漏野毒株的缺点,直接查出野病毒。这对疫苗株中混有少量野毒株的分离物有重要意义。

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  • 甜瓜品种对西瓜花叶病毒-2的抗性与过氧化物酶的关系

    赵荣乐,郑光宇

    甜瓜品种对西瓜花叶病毒-2的抗性与过氧化物酶的关系赵荣乐郑光宇(北京师范大学生物学系,北京100875)关键词西瓜花叶病毒-2,抗性,过氧化物酶植物受病毒感染而引起过氧化物酶活性和同工酶谱的变化已有一些研究〔1-3〕,但未见到关于西瓜花叶病毒-2感染...

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