- 张世珍,梁米芳,郑海发,李维,董关木,侯云德
将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特异性单抗G10Fab的基因 ,克隆入杆状病毒人源IgG抗体表达载体 ,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞 ,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体G10。用亲和层析的方法纯化了表达产物 ,经与一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实 ,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白 ,亲和力约为 10 -9M。体外中和实验证明 ,该单抗对狂犬病毒aG株具有体外中和活性
2001年03期 193-199页 [查看摘要][在线阅读][下载 106k] [下载次数：172 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 蓝祥英,郭秀婵,周玲,张永利,沈忠英,曾毅
为了研究乙型肝炎 (乙肝 )病毒 (HBV)和黄曲霉素 (AFB1)在肝癌发生过程中的作用 ,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下 ,以后每周注射AFB1,能诱发裸鼠成瘤。实验分为 4组 :A组为HBV +AFB1组 ,即用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,同时注射ABF1;B组为HBV+ 组 ,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,不注射AFB1;C组为AFB1+ 组 ,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,注射AFB1;D组为对照组 ,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠 ,也不注射AFB1。结果 :A组成瘤率为 2 7 3% (6 / 2 2 ) ,B组 0 % ,C组 13 3%(2 / 15 ) ,D组 0 % ,所有肿瘤病理诊断均为肝细胞癌。用EMA单抗检测 ,证实为人来源细胞。PCR和DNA狭缝印迹显示 :HBVX和HBVS基因阳性 ,证明HBV基因已到瘤细胞中。实验首次用人乙肝病毒协同AFB1在裸鼠体内诱发成功人肝细胞癌 ,证明了HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用。同时 ,为进一步研究肝癌的发生及防治提供了良好的动物模型
2001年03期 200-204页 [查看摘要][在线阅读][下载 79k] [下载次数：243 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 郭秀婵,蓝祥英,周玲,滕智平,张永利,陈炯玉,沈忠英,曾毅
为了研究人乙型肝炎病毒 (HBV)和黄曲霉素 (AFB1)在肝癌发生过程中的作用 ,我们用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下 ,以后每周皮下注射AFB1,在裸鼠体内成功地诱发了人肝细胞癌。选 3只裸鼠所形成的肿瘤组织 ,分别再接种裸鼠传代。在裸鼠体内传至 5代后 ,将瘤组织在体外培养、传代 ,建立了 3个肝癌细胞株 ,分别为CBH - 1a、CBH - 1b和CBH - 2。对 3个细胞株进行生物学特性分析发现 ,细胞生长迅速 ,接触抑制消失 ,细胞增殖核计数Ki6 7阳性细胞占 38 2 %。用EMA单抗检测证实为人来源细胞。核酸原位杂交显示 ,细胞中HBV-X和HBV-S基因阳性 ,PCR可扩增出X 基因 ,证明HBV基因已到瘤细胞中。 3个细胞株细胞再接种裸鼠皮下 ,可再生成肿瘤。此实验证明了HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用。同时 ,为进一步研究HBV和AFB1在肝癌发生过程中的分子机制提供了细胞水平的模型
2001年03期 205-209页 [查看摘要][在线阅读][下载 84k] [下载次数：254 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ] - 沈忠英,许丽艳,陈铭华,蔡维佳,陈炯玉,洪超群,沈健,曾毅
研究中期永生化食管上皮细胞的表型、细胞遗传学和部份基因的改变 ,以阐明癌前病变的特征。SHEE是该院用人乳头状瘤病毒HPV18E6E7诱导的永生化上皮 ,传至 6 1代已开始有少量细胞恶性转化。对永生化中期 31代培养细胞用相差显微镜检查细胞形态改变和细胞生长状态 (细胞接触抑制和锚定生长 ) ;流式细胞仪检测细胞周期 ;做染色体众数分析 ;多重PCR检查c-myc、p5 3、bcl- 2和ras等基因。免疫组化检查细胞角蛋白和鬼臼毒素荧光标记检查肌动蛋白F(F -actin)。软琼脂培养的集落细胞接种SCID小鼠检查成瘤性。Westernblot方法检测细胞内HPVE6表达蛋白。结果 :培养细胞有两种不同分化形态 ,分化差的基底细胞和分化好的鳞状上皮 ;前者角蛋白和F -actin极少 ,后者含量丰富 ;细胞接触抑制和锚锭生长特性减弱。分析 10 0个细胞染色体众数分二干系 ,5 6条 (占 30 % )和 6 1条 (占 2 4% )染色体 ,核型分析属于超二倍体 ,亚三倍体。多重PCR检查 :c -myc、p5 3基因上调 ,bcl- 2和ras基因阳性。用优选生长在软琼脂上的克隆细胞接种SCID小鼠 ,未成瘤 ;HPV18E6表达蛋白阳性。以HPV18E6E7诱导的食管永生化上皮 31代细胞形态出现了双向分化 ,根据其形态表型 ,双染色体众数的细胞遗传学改变和某些癌基因上调等特性 ,可以认为SHEE
2001年03期 210-214页 [查看摘要][在线阅读][下载 107k] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 姚智慧,罗兆庄,俞永新,赵月萍,董关木,王以银,刘文雪,任次早
应用RT -PCR扩增了皖南山区分离株AH0 9的M和S片段全基因 ,克隆于T载体 ,纯化后测定序列。结果AH0 9株M片段的全基因序列共 36 2 5个核苷酸 ,编码 1135个氨基酸 ;S片段的全基因序列共 172 4个核苷酸 ,编码 430个氨基酸。M和S片段全基因核苷酸和氨基酸与汉坦病毒各型毒株的代表株和HTN型毒株的同源性比较表明 ,AH0 9株分枝与HTN型接近 ,与其它各型病毒则相距较远 ,故确定为HTN型毒株。但AH0 9株与HTN型毒株的M和S片段全基因序列有差异 ,其差异分别高达 2 3 6 %和 2 0 4%。经种系发生分析 ,AH0 9株是迄今为止所发现的HTN型病毒中差异最大的新基因亚型病毒株。AH0 9株病毒M片段的氨基酸与HTN型相差 13 5 %至14 8% ,而S片段仅相差 7%～ 8 1% ,说明AH0 9毒株的变异主要发生在M片段。而ORF和 3′端的NCR区核苷酸序列分析比较说明 ,病毒的变异更主要集中在该片段的 3′端的NCR区
2001年03期 215-220页 [查看摘要][在线阅读][下载 145k] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：3 ] - 曹经瑗,梁米芳,郭可謇,孟庆玲,纪燕,詹美云
在用噬菌体表面呈现系统获得人源抗甲型肝炎 (甲肝 )病毒中和性基因工程Fab抗体的基础上 ,对所获得的 4株中和性Fab抗体轻重链可变区基因进行了序列分析、可溶性表达及生物学特性鉴定。 4株Fab抗体重链可变区拥有 99%同源的核苷酸序列和相同的CDR区氨基酸序列 ,属于VHⅢ基因家族。而轻链可变区核苷酸序列同源性为 95 %和相似的CDR区氨基酸序列 ,属于VL5基因家族。这些重组抗体都能与人甲肝恢复期血清及具有中和活性的鼠抗甲肝单克隆抗体产生竞争抑制反应 ,表明其针对甲肝病毒结构蛋白上的主要抗原决定簇
2001年03期 221-224页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 郭斐,陆柔剑,孙朝晖,马海伦,张颖妹,马大龙,阮力
利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 ,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径
2001年03期 225-230页 [查看摘要][在线阅读][下载 83k] [下载次数：79 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：3 ] - 郭斐,陆柔剑,许洪林,李军,张颖妹,马大龙,阮力
构建了表达GM CSF的非复制型重组痘苗病毒RVΔ11β75GMCSF。Southernblot证实重组病毒C K片段间基因缺失 ,同时插入GM CSF基因 ,GM CSF可以分泌形式良好表达。Wistar大鼠Walker's瘤内注射重组病毒RVΔ11β75GMCSF后 ,可以延长荷瘤鼠的生存时间 ;重组病毒RVΔ11β6 5GMCSF修饰的肿瘤细胞裂解物(WRC2 5 6 )的肿瘤免疫治疗 ,可以抑制荷瘤大鼠的肿瘤生长 ,瘤重较对照组减轻。此结果提示 :非复制重组痘苗病毒表达的GM CSF可作为有效的肿瘤免疫治疗佐剂
2001年03期 231-235页 [查看摘要][在线阅读][下载 62k] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 吕宏亮,宋继萍,段招军,邹勇,沈心亮,王玉琳,周书全
通过狂犬病病毒灭活和纯化试验 ,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求。初步建立了适合大规模生产精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化工艺
2001年03期 236-239页 [查看摘要][在线阅读][下载 47k] [下载次数：568 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 王祥,陈焕春,何启盖,吴斌,贾杏林,吴美洲
以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14 14 2的基因组RNA为模板 ,采用RT PCR技术扩增其 NS1基因的cDNA ,将其克隆到 pMD18 T载体中 ,得到克隆质粒pMD18 T NS1。pMD18 T NS1经 EcoRI和SalI酶切后 ,回收NS 1片段克隆到原核表达载体 pET 2 8a(+) EcoRI/SalI位点 ,构建了重组原核表达质粒 pET 2 8a(+) NS1。转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导获得高效表达 ,产物经SDS PAGE电泳结果显示 ,表达产物分子量约为 45kD。Westernblotting分析表明表达产物具有抗原活性
2001年03期 240-244页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：223 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：3 ] - 刘相冬,张宝山,孔宪刚,王滨有,孙成群,刘永刚,周家喜,王凯波,刘建华
以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物 ,分别在体外和体内条件下 ,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析。通过与病毒基因组的序列进行比较 ,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱 ,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置。发现两种病毒在外显子 3的上游拼接受体位点 (SA2 )的位置与已报道的EIAV毒株均不相同 ,且二者的拼接信号不一致
2001年03期 245-249页 [查看摘要][在线阅读][下载 91k] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 鲁瑞芳,郭明,李为民,梁小波,彭学贤
构建了马铃薯Y病毒中国株系 (PVY C)蚜传辅助成分 (HC Pro)基因的正义、反义和缺失三种植物表达载体 ,通过农杆菌介导法转化烟草品种NC89。Southernblot分析表明 ,HC Pro基因及其突变体已经整合到烟草染色体中 ,Westernblot分析证明 ,正义HC Pro基因及其缺失突变体在转基因烟草中有表达产物。攻毒试验结果证明 ,转正义HC Pro基因及其缺失突变体不仅能够提高T1转基因烟草中PVY C的病毒积累和致病性 ,而且对异源病毒PVX具有同样的作用 ,而转反义HC Pro基因烟草对PVY C和PVX的致病性无影响。因此PVY CHC Pro基因介导PVX/PVY的协生作用
2001年03期 250-254页 [查看摘要][在线阅读][下载 81k] [下载次数：224 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：3 ] - 郭锡杰,金勇丰,杨明观,张耀洲
采用PCR方法克隆了家蚕核型多角体病毒中国镇江株 (BmNPV ZJstrain)的酪氨酸蛋白磷酸酯酶基因(ptp) ,测定了该基因的核苷酸序列 ,比较了与相关病毒相应基因的同源性 ,并将该基因插入到原核表达质粒在大肠杆菌中进行了表达。该基因的编码部分由 5 0 7个核苷酸组成 ,编码 16 8个氨基酸残基的蛋白多肽 ,其中含有酪氨酸蛋白磷酸酶酯催化部位的“HC”基序。该基因与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒 (AcMNPV) ptp 基因和BmN PV -T3 株 (日本 )拟为的 ptp基因核苷酸序列的同源性分别为 96 8%和 98 2 % ,蛋白质氨基酸序列的同源性分别为 97 0 %和 97 6 %。将该基因插入到温度诱导型表达质粒pBV2 2 1的温控启动子PRPL 之后 ,在大肠杆菌JM10 9中表达了具有催化活性的蛋白质 ,分子量约为 19kD ,表达产物能催化对硝基酚磷酸钠 (PNPP)的脱磷酸反应 ,这种催化作用可被钒酸钠和ZnCl2 抑制
2001年03期 255-260页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：109 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 侯化,杨光彩,黄杨中,王曙2001年03期 261-264页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
- 陈冬梅,张又,钱渊,Jason Jiang2001年03期 265-269页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：56 ] |[阅读次数：3 ]
- 董菁,成军,王勤环,施双双,洪源,皇甫竞坤,王刚,李莉,斯崇文2001年03期 270-272页 [查看摘要][在线阅读][下载 29k] [下载次数：115 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：3 ]
- 邓敏,何建国,翁少萍,曾征,龙綮新2001年03期 273-276页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k] [下载次数：403 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：3 ]
- 张奇亚2001年03期 277-281页 [查看摘要][在线阅读][下载 63k] [下载次数：297 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ]
- 肖火根,周国辉,范怀忠2001年03期 282-287页 [查看摘要][在线阅读][下载 83k] [下载次数：279 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ]
- 徐春香,李华平,肖火根,范怀忠2001年03期 288页 [查看摘要][在线阅读][下载 5k] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ]
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