- 张军,李益民,李少伟,欧山海,黄果勇,何志强,葛胜祥,鲜阳凌,逄淑强,夏宁邵
大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为 1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎 ;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染 ;1 0 μg和 5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。 3个剂量免疫组及对照组另外 3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。另有 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。这些结果表明 :HEV
2004年01期 1-6页 [查看摘要][在线阅读][下载 72k] [下载次数：307 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：3 ] - 周世力,李琳琳,何雅青,杨洪,喻子牛,金奇
对肠道病毒 71型 (enterovirus 71 ,EV71 )中国 (深圳 )分离株SHZH0 3进行了全基因组 (未包括多聚腺苷尾 )74 0 6个碱基的核苷酸序列测定。结果表明 ,SHZH0 3株与其它肠道病毒 71型毒株相比 ,在编码区没有核苷酸的缺失和插入 ,其 5′UTR和 3′UTR区的长度和序列有一定的差异。核苷酸同源性比较结果表明 ,在P1区SHZH0 3株与SHZH98株、中国台湾流行株 (TW 2 0 86、TW 2 2 72 )的同源性较高 (分别为 92 .5 % ,90 .1 %和 87.9% ) ,与新加坡流行株SIN5 6 6 6、SIN5 86 5及标准株MS、BrCr的同源性则在 81 %左右 ,而与CoxsackievirusA1 6 (Cox .A1 6 )的同源性最低 (6 3.6 % )。氨基酸同源性比较结果表明 ,在P1区SHZH0 3株与Cox .A1 6的同源性最低 ,但在P2和P3区SHZH0 3株与Cox .A1 6的同源性最高。P1区的遗传进化分析表明 ,SHZH0 3株和中国台湾 1 998年流行的EV71毒株的亲缘关系较近 ,属于同一型 (genogroup) ,而与标准株BrCr和MS的亲缘关系较远。上述结果有助于肠道病毒71型的基础研究和中国对于EV71所致疾病的预防
2004年01期 7-11页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k] [下载次数：812 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：62 ] |[阅读次数：3 ] - 史庭燕,赵秀丽,施燕峰,单祥年
从手术切除的 5 0例生殖道尖锐湿疣新鲜标本中 ,以及 1 5例正常人血清中 ,提取基因组DNA ,同时用树状DNA杂交 (dendrimerDNAhybridizalion ,DDH)技术和PCR进行HPVDNA的分型检测。结果 5 0例尖锐湿疣中 ,以DDH方法检测 ,感染HPV6型者 2 0例 ,感染 1 1型者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 3例 ,总检测率达 94 % ;以PCR方法检测 ,HPV6型感染者 2 1例 ,1 1型感染者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 2例 ,总检测率为 96 %。1 5例正常人血清中 ,以DDH方法检测 ,HPV感染的假阳性率为 0 % ;以PCR检测 ,假阳性率为 6 .6 7%。还以HPV阳性标本对DDH方法做了敏感度的测定 ,结果阳性病例DNA检测最低浓度为 97.2 8pg/ml。研究表明 ,DDH技术具有较高敏感性和高特异性 ,且成本较低 ,操作安全简便 ,可适用于基层中小医院较大样本量筛查
2004年01期 12-16页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 曾亮,刘轶平,赵燕,唐发清,石颖,李嵬,曹亚
探讨EB病毒基因组编码的癌蛋白LMP1对鼻咽癌细胞中转移相关基因表达的影响。采用蛋白质印迹法检测在强力霉素 (Dox)诱导下 ,鼻咽癌细胞系 pTet on LMP1HNE2 (L7细胞 )中LMP1表达的时效和量效关系。应用cDNA微阵列技术建立诱导性LMP1介导鼻咽癌细胞中转移相关基因差异表达谱 ;运用RT PCR验证cDNA微阵列筛选差异基因表达的可靠性。与LMP1不表达的L7细胞比较 ,LMP1高表达的L7细胞中 7个基因的表达显著上调 ,1 2个基因的表达显著下调。随机选择其中 4个基因进行RT PCR ,结果显示 ,这些基因表达阳性 ,且与微阵列中的变化趋势一致。LMP1可能通过激活和 /或抑制一些转移相关基因的表达而参与鼻咽癌转移过程
2004年01期 17-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 75k] [下载次数：147 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 齐建国,谷淑燕,王卫东,周为民,阮力
Epstein Barr病毒 (EBV)主要膜蛋白 gp340 / 2 2 0 ,是研究EBV亚单位疫苗的主要抗原。为了更详细地研究gp340 / 2 2 0的免疫原性 ,用PCR法获得不同区段的EBVBLLF1基因 ,并将其克隆入表达载体 pNeock1 1 β7 5中 ,通过重组质粒与非复制痘苗病毒在鸡胚成纤维细胞中同源重组 ,获得 3株表达EBVgp340 / 2 2 0不同区段的重组痘苗病毒。PCR和Southernblot结果证实 ,各个重组病毒基因组中有相应外源基因的整合。Westernblot结果表明 ,3种重组病毒感染人源细胞后都能够稳定表达蛋白 ,表达蛋白均为糖蛋白。免疫荧光结果表明 ,3种蛋白分布在细胞的不同部位。重组痘苗病毒的成功构建为更好地研究gp340 / 2 2 0的免疫原性提供了实验基础
2004年01期 22-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 96k] [下载次数：103 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 张勇,祝双利,赵蓉,李杰,陈立,侯晓辉,王东艳,张礼璧,许文波
为研究中国急性弛缓性麻痹 (AFP)病例中脊髓灰质炎 (简称脊灰 )病毒分离株的分子特征 ,为中国继续维持“无脊灰野毒状态”提供理论依据 ,对 2 0 0 2年所有省级疾病预防控制中心送检的脊灰分离株 ,用PCR RFLP法及ELISA法进行型内鉴定。用PCR RFLP法筛查出与疫苗株相比有异常酶切图谱的毒株共 2 4株 ,其中Ⅰ型毒株 1株 ,Ⅱ型毒株 2 1株 ,Ⅲ型毒株 2株 ;用ELISA法筛查出与疫苗株相比有不同的抗原抗体反应的毒株共 2 2株 ,其中Ⅰ型毒株 7株 ,Ⅱ型毒株 4株 ,Ⅲ型毒株 1 1株 ,在 7株Ⅰ型毒株中有 3株为非疫苗类似株 (NSL) ,其余为双反应毒株 (DRV)。随后对这 4 6株毒株进行了全VP1区的基因序列分析。结果表明 :2 0 0 2年脊灰分离株都是疫苗株或疫苗衍生株 ,没有发现野毒株 ,中国继续保持着“无脊灰野毒状态” ;口服减毒活疫苗 (OPV)株与其它野毒株在稳定性性质方面是类似的 ,即通常是不稳定的 ,在人体肠道内有很强的选择性 ;在人体肠道内 ,病毒复制产生的基因变异导致毒力升高 ,是引起疫苗相关麻痹病例 (VAPP)的重要原因 ,但宿主本身的因素也有很大的作用 ;在局部地区有疫苗株的循环或脊灰疫苗衍生株 (VDPV)的存在 ;最终消除疫苗株引起的AFP病例可能还需要脊灰灭活疫苗(IPV)的介入。
2004年01期 28-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 66k] [下载次数：303 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：60 ] |[阅读次数：2 ] - 董军,陆大祥,沈伟哉
为了探讨人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 (HIV 1 )的包膜糖蛋白 gp1 2 0对鼠海马脑片CA1 区的突触传递及可塑性的影响 ,应用离体脑片记录技术 ,记录大鼠海马CA1 区的兴奋性突触后电位 (excitatorypostsynapticpotential,EPSP) ,研究了 gp1 2 0对高频电刺激Schaffer侧支引起的鼠长时程增强效应 (long term potentiation ,LTP)的影响。结果发现 :gp1 2 0对大鼠海马CA1 区LTP产生抑制作用 ,对其基础EPSP没有影响 ,而且这种抑制效应随着gp1 2 0浓度增大而增强 ,即具有剂量依赖性。PKA/PKC蛋白激酶抑制剂H7可以反转这种抑制效应。提示 :gp1 2 0可能是通过抑制海马CA1 区的LTP而参与艾滋病相关性痴呆 (HIV 1associateddementia ,HAD)的形成
2004年01期 34-39页 [查看摘要][在线阅读][下载 75k] [下载次数：141 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：4 ] - 姚海兰,韩俊,张宝云,高建梅,郭燕军,张瑾,肖新莉,聂凯,蔡昌学,董小平
朊病毒 (prion)具有超强的理化因素抵抗能力 ,可抵抗常规物理和化学因子对其感染性的灭活。为了研究不同理化因素对PrPSc蛋白酶抗性的影响 ,采用不同浓度的NaOH、NaOCl、SDS、温度变化以及 3%SDS与温度变化联合处理羊瘙痒因子 2 6 3K ,再经蛋白酶K(ProteinaseK ,PK)消化 ,通过Westernblot检测观测PrPSc的PK抗性。结果发现 ,上述几种理化因素对羊瘙痒因子 2 6 3K的PK抗性有不同程度的破坏作用。NaOH浓度在 0 0 5mol/L以上 ,NaOCl游离氯含量在 0 1 %以上 ,温度在 1 2 1℃以上都能使PrPSc的PK抗性消失 ;而 1 %～ 5 %SDS不能使PrPSc的PK抗性完全消失 ,3%SDS与温度的联合作用可有效地破坏PK抗性 ,同时使所需温度降低。还发现 ,在较低浓度的化学因子或温度的条件下即可出现PK抗性的破坏 ,而在较高浓度或温度处理时才出现蛋白本身的消失。这些结果提示 ,与PrPSc感染性的结果相似 ,PK抗性可受相似浓度或强度的理化因素影响 ,具有明显的浓度或强度相关性 ,对判定消除PrPSc的感染性有一定的指导意义
2004年01期 40-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k] [下载次数：96 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 姜世金,崔治中,张志,丁家波,王玉,杨汉春
为了比较Ⅰ型马立克氏病病毒 (MDV)的致病型与 pp2 4基因的关系 ,将Ⅰ型MDV弱毒 (mMDV)、强毒(vMDV)、超强毒 (vvMDV)、特超强毒 (vv +MDV)等不同致病型的CVI988、GA、6 4 8A、RB1B、Md5和Md1 1等 6个国际参考株 ,从中国河北、北京、广东和广西等地分离的 7个中国分离株和 1个中国疫苗毒 81 4株的 pp2 4基因分别做PCR扩增 ,并将其克隆到pMD 1 8载体中测序 ,与国外已发表的BC 1株进行序列比较。结果表明 :Ⅰ型MDV的 pp2 4基因非常保守 ,1 5个毒株中只出现 5个碱基的随机变化 ,并引起相应的 4个氨基酸改变 ,但与致病型无明显相关 ;pp2 4基因ORF的第 81碱基出现差异 ,所有中国株为G ,所有不同致病型国外参考株为C ,但并未引起氨基酸改变 ,显示这一碱基差异只是作为MDV地域性分布的遗传标志 ,而与病毒分离的年代及致病型等因素无关
2004年01期 46-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 84k] [下载次数：155 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 崔治中
将 pcDNA3 1 /Zeo表达性载体质粒中的启动子PCMV片段用HindⅢ及BglⅡ消化去除后 ,在该相应位点插入GA株马立克氏病病毒 (MDV)的包含上游调控序列的 38kD磷蛋白 (pp38)基因的完整片段 ,以此获得能用自身启动子表达 pp38的重组表达性质粒pcDNA pp38。转染试验表明 ,pp38基因的天然启动子在整合进载体质粒中后 ,仍能在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中启动pp38的表达。用 pp38特异性单克隆抗体H1 9对转染的CEF做间接荧光抗体检测试验发现 ,在转染细胞中表达的 pp38仅位于细胞浆中 ,基本不进入细胞核。而与此相对照的用pcDNA3 1 /Zeo为载体表达的MDV的肿瘤基因meq产物则正相反 ,仅显现在经转染CEF的细胞核中。meq和 pp38基因产物在细胞内的不同分布嗜性显然与它们不同的生物学活性相关
2004年01期 52-57页 [查看摘要][在线阅读][下载 106k] [下载次数：89 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：15 ] |[阅读次数：3 ] - 石正丽,钱冬,张建红,曹铮,Bonami Jean Robert
从患肌肉白浊症状的罗氏沼虾幼苗体内分离纯化得到两种大小不同的病毒颗粒。这两种病毒颗粒均为对称的 2 0面体结构 ,表面光滑 ,无囊膜 ,对氯仿不敏感。一种是直径为 2 6nm～ 2 7nm的颗粒 ,在氯化铯中的密度为1 32 g/cm3 ,病毒基因组含两段单链的RNA ,分别为 3 0kb和 1 2kb ,具有诺达病毒科成员的特征。一种是直径为1 4nm～ 1 6nm的颗粒 ,在氯化铯中的密度为 1 33g/cm3 ,含有一段大小为 0 9kb的单链RNA ,拟为卫星病毒样颗粒或辅助病毒
2004年01期 58-61页 [查看摘要][在线阅读][下载 78k] [下载次数：307 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ] - 石正丽,解云礼,汤显春,Sri Widada Joannes,Bonami Jean Robert
根据安替列群岛分离的罗氏沼虾诺达病毒株基因组序列 (MrNV ant) ,制备特异性核酸探针 ,设计特异性引物 ,用点杂交和RT PCR的方法检测在中国境内分离的罗氏沼虾诺达病毒 (MrNV chin)。点杂交的方法可以检测出少于 2 6ng的患肌肉白浊症的组织样品中的病毒 ,或少于 2 5ng的病毒RNA样品 ;RT -PCR可以检测出少于2 5 pg的RNA样品。扩增的MrNV chinRNA1序列长 85 8个核苷酸 ,与MrNV ant的核苷酸一致率为 95 7% ,两者翻译后的氨基酸序列的一致率为 99 7%。扩增的MrNV chinRNA 2序列长 1 1 2 1个核苷酸 ,与MrNV ant的核苷酸一致率为 92 % ,两者翻译后的氨基酸序列的一致率为 93 2 %。因此 ,MrNV ant和MrNV chin应属于同一种病毒的不同分离株。用两株罗氏沼虾诺达病毒的RNA聚合酶序列与其它 6株诺达病毒RNA聚合酶序列比较后构建的进化树中 ,罗氏沼虾诺达病毒与Alphanodavirus的亲缘关系近于与Betanodavirus的亲缘 ,组成了一个新的分支
2004年01期 62-66页 [查看摘要][在线阅读][下载 131k] [下载次数：298 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：3 ] - 刘胜旺,王玮,刘玉芬,孔宪刚,童光志
应用RT PCR方法分别扩增了中国地方分离株IBVLX4S1和S2基因并进行了基因的克隆和序列测定。结果发现 ,LX4S基因由 3495个核苷酸组成 ,编码一条 1 1 6 4个氨基酸残基组成的多肽。S基因编码产物裂解后形成的S1和S2亚单位分别由 5 39和 6 2 5个氨基酸残基组成。LX4S基因推导氨基酸切割识别位点序列为HRRRR ,与A2、SD/ 97/ 0 2和Z株相同 ,而与其它国内外参考毒株不同。与国内外 1 0株已报道的具有全S基因序列的IBV参考毒株比较 ,LX4与国内分离毒株SD/ 97/ 0 2的核苷酸和氨基酸同源性最高。与 32株国内外参考毒株的S1基因进化树分析比较表明 ,LX4与A2、SD/ 97/ 0 2、Z、TJ/ 96 / 0 2、JX/ 99/ 0 1和SAIBWJ等 7个国内分离株在同一亚群内。在该亚群内 ,LX4与A2和SD/ 97/ 0 2亲缘关系更近 ,且三者在高变区和抗原表位均具有高度的同源性 ,而与本亚群内其它参考毒株对应的高变区和抗原表位同源性差异较大。LX4与H1 2 0S1基因编码氨基酸的同源性虽然高于其它国外参考毒株 ,但同源性仍然较低 ,为 75 %。与参考毒株比较 ,LX4S2基因的点突变造成其推导的氨基酸序列有 1 1个位点发生改变 ,这些突变可能影响S2与S1蛋白之间的相互作用 ,从而影响S蛋白与特异性抗体的结合
2004年01期 67-72页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k] [下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：54 ] |[阅读次数：3 ] - 毛乃颖,张燕,朱贞,崔爱利,刘中华,杨建国,严汉民,蒋小泓,张建,阮力,陈彪,许文波
为了建立方便、敏感和特异的SARS病毒血清学诊断方法 ,利用PQE30表达系统在大肠杆菌M1 5中分段高效表达了SARS病毒N蛋白。通过金属鏊合亲和层析纯化了目的蛋白N - 1和N - 2 ,Westernblot结果显示 ,两个表达蛋白均具有较好的抗原性。然后将N - 1和N - 2蛋白共同包被 ,建立了检测人血清中SARS病毒IgG抗体的间接ELISA法。用此方法检测 1 2 0例临床诊断为SARS的病人和 2 4 4个不同年龄组正常人血清IgG抗体 ,结果 1 2 0例SARS病人的第一份血清IgG抗体总阳性率为 6 0 0 % ,发病第 0～ 7、8～ 1 0、1 1～ 1 4、1 5～ 2 7和 2 8天后的血清中 ,SARS病毒IgG抗体阳性率分别为 0、1 1 1 %、6 0 0 %、6 0 5 %和 70 3% ;而 2 4 4份正常人血清检测结果均为阴性 ,包括 1 0 0份1 4岁以下儿童血清也未发现假阳性。结果表明 ,利用大肠杆菌表达的N蛋白完全能够替代全病毒灭活抗原 ,所建立的间接ELISA方法简单 ,价格低廉 ,能保证生物安全 ,对SARS可疑病例的确诊和排除具有重要的实际应用价值 ,可用于SARS高危人群的血清流行病学监测 ,SARS疫情的控制和预防 ,以及SARS病毒蛋白功能的研究
2004年01期 73-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 76k] [下载次数：330 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 王强,李刚,李宝健2004年01期 79-80页 [查看摘要][在线阅读][下载 29k] [下载次数：51 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
- 王小文,陈新华2004年01期 81-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 79k] [下载次数：375 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：21 ] |[阅读次数：3 ]
- 王明连,李劲松2004年01期 86-89页 [查看摘要][在线阅读][下载 54k] [下载次数：741 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：3 ]
- 刘玉良,刘秀梵2004年01期 90-94页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k] [下载次数：1160 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：3 ]
- 2004年01期 95页 [查看摘要][在线阅读][下载 10k] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
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