- 许文波,崔爱利,史智扬,汪华,张勇,唐震,刘和平,李显,朱贞,唐浏英
自2004年4月18日起至6月末,江苏省东台市发生以发热、咽部充血、扁桃体肿大为临床表现的原因不明的疫情暴发,发病人群以中小学生、幼儿为主,地域以许河镇、新街镇以及临近乡镇为主。疫情涉及东台市9个镇,合计报告709例,分布在75个学校,240个班级。暴发的特点为传染性强,短期内出现大量的患者,发病有班级聚集性特点,未发现成人感染。临床表现以发烧(100%)、咽部充血(91.40%)、扁桃体肿大(60.22%)、咽痛(50.00%)为主;X线检查可发现肺纹理增强(90.3%)。用Hep-2细胞从患儿20份咽拭子标本中分离到12株病毒,经PCR扩增腺病毒L3部分基因及其PCR产物的序列测定和分析,证实这12株病毒为腺病毒3型;对28份咽拭子标本直接进行DNA提取和PCR扩增,有17份标本PCR扩增L3部分基因呈阳性,经序列测定和分析,也为腺病毒3型。这29个阳性标本L3基因的1 446个核苷酸的序列与GenBank上所发表的腺病毒3型序列同源性高达99.5%。双份血IgG检测:对江苏省采集10份患儿急性期和恢复期双份血清,以从患儿咽拭子分离到的腺病毒3型作为抗原,进行病毒抗体测定,6份患儿的双份血清腺病毒总IgG滴度呈4倍以上增高。患儿急性期血IgA检测:对暴发疫情34例患儿急性期血清(发病时间为1~3天)进行腺病毒IgA抗体测定,结果有9份标本为阳性,1份标本为可疑阳性,阳性率为26.47%。IgA阳性率低可能与血清采集时间过早有关,机体还未全部产生IgA。另外,还对江苏省送检的从患儿血培养基培养的细菌毒株进行了鉴定,对其16S rRNA基因进行了基因扩增及序列分析,序列测定和分析提示为A组M3型化脓性链球菌。实验研究结果并结合此次疫情的流行病学和患儿的临床表现,证实腺病毒3型是引起此次儿童不明原因轻型呼吸道传染病暴发的病原体,部分病例伴有原发或继发化脓性链球菌感染。
2005年05期 325-331页 [查看摘要][在线阅读][下载 82k] [下载次数：303 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：49 ] |[阅读次数：3 ] - 张燕,申昆玲,许文波,谢正德,芦起,刘亚谊,刘春艳,梁国栋
为了解北京地区人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,HRSV)的遗传变异和分子流行病学特征,首次对北京地区2003~2004年63株HRSV分离株进行了G基因3′末端的第2个高度变异区的序列测定,并进行了基因分型和遗传变异的分析。使用不同的型特异性引物对GPA-F1和GPB-F1分别扩增A、B血清型HRSVG基因3′末端核苷酸序列,特异性扩增产物和随后的序列测定结果均显示,北京地区2003~2004年63株HRSV毒株中,96.8%(61/63)为A血清型,3.2%(2/63)为B血清型,说明北京地区在2003~2004年间存在HRSV A、B血清型共循环,但以A血清型病毒为主。分别对北京流行的A和B血清型病毒进行了基因亲缘性关系分析,结果提示,61株北京A血清型分离株全部为GA2基因型;2株B血清型分离株为GB3基因型。由此看来,GA2基因型是北京地区2003~2004年的优势流行基因型。北京61株GA2分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别在87.8%~100%和77.9%~100%之间;2株B血清型分离株之间核苷酸和氨基酸同源性分别为94.7%和88.1%。这说明在2003年和2004年有很多个不同的GA2基因型HRSV毒株在北京地区共循环,北京地区的HRSV流行存在着许多由不同病毒株引起的传播链。B血清型分离株Beijing04-11于G基因3′末端含有一个60个碱基的重复序列,这是HRSV多聚酶易于重复复制限定序列的一个极端的例子,有可能是HRSV逃逸免疫压力而不断进化的一种方式。该研究首次对北京地区2003年和2004年流行的HRSV进行了基因分型和遗传变异的研究,对于了解北京HRSV流行株的基因特征具有重要意义,可以为北京乃至中国疫苗株的选择提供参考依据,从而指导HRSV的免疫预防控制。
2005年05期 332-342页 [查看摘要][在线阅读][下载 175k] [下载次数：228 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 曹经瑗,DeJaeger Geert,李川,孟庆玲,Terryn Nancy,Depicker Ann,毕胜利,李德新,梁米芳
为了探讨人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒scFv-Fc融合抗体在酵母中的表达特性,将获得的人源抗甲肝病毒中和性单链可变区抗体(scFv抗体)基因克隆入含信号肽及人IgG1Fc抗体基因的酵母细胞表达载体中,获得了一株中和性人源抗甲肝病毒pPiscFv-FcHA16融合抗体的分泌表达,并对表达产物进行了纯化。同时对表达产物的生物学特性进行了一系列鉴定。表达的pPiscFv-FcHA16融合抗体为具有不同糖基化形式的同源二聚体,与相应的CHO细胞表达的IgG抗体相比,pPiscFv-FcHA16融合抗体仍保持很好的抗原结合活性,以及与中和性鼠抗甲肝病毒单克隆抗体的竞争抑制能力。同时也保持了对甲肝病毒的体外中和活性。这些结果表明,在酵母中表达的单链可变区(scFv)与IgG1Fc区的融合抗体具有很好的生物学活性,有希望用做体外诊断,用纯化相应的抗原,或者可能用于体内预防与治疗。
2005年05期 343-348页 [查看摘要][在线阅读][下载 90k] [下载次数：204 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 杨小骏,叶林柏,郜金荣,刘静,郑义,廖庆姣,佘应龙,吴正辉,叶力
应用PCR技术从含有丙型肝炎病毒(HCV)全长开放阅读框的质粒pBRTM/HCV 1~3 011中获得NS5A全长基因片段,利用基因重组技术将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中。通过酶切、PCR及测序鉴定证实,NS5A基因已正确插入到pcDNA3.1(-)中。再利用脂质体介导转染Huh7细胞,30h后收获细胞,经Western blot验证,证实HCV的NS5A基因在Huh7细胞中已经获得表达。在培养条件完全一致的条件下,表达NS5A基因的Huh7细胞与pcDNA3.1(-)转染的细胞在转染30h后被收集起来,乙醇固定,PI染色后利用流式细胞仪检测细胞周期变化。G0/G1期由60.6%下降到49.7%,S期由23.9%上升到32.7%,而转染pcDNA3.1(-)细胞的细胞周期与正常的Huh7细胞则差别不大。从而证明HCV NS5A蛋白对Huh7细胞周期具有调节作用。
2005年05期 349-352页 [查看摘要][在线阅读][下载 55k] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 胡盈莹,黄兢姚,郑玲,柳丽娟,江家骥
为研究福建省2000~2003年急性散发性戊型肝炎病毒(HEV)分离株的分子流行病学特征,采用RT-PCR方法扩增HEV ORF2的基因片段,经纯化、克隆、测序后,对其序列用Neighbor-Joining法和Bootstrap法进行基因进化分析。从158例急性散发性戊型肝炎的血清标本中扩增出72份HEV RNA,经基因进化树分析,这72株HEV均属于HEV基因Ⅳ型,且被明显地分为A、B、C、D共4个组群。A群的同源性最高,群内同源性为93.3%~100%;D群的同源性最低,群内同源性在86.6%~100%之间。A群和B群流行株所占比例没有差异;C群流行株所占比例由2002年的7.1%逐渐增加到2003年的26.3%(x2=10.553,P=0.014);D群则由85.7%逐渐减少到44.7%(x2=8.136,P=0.043)。引起福建地区急性散发性戊型肝炎流行的HEV均属于HEV基因Ⅳ型,基因型内存在不同的组群,其中D群的变异较大。
2005年05期 353-357页 [查看摘要][在线阅读][下载 60k] [下载次数：131 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ] - 黄嘉凌,卫菁,段朝晖,闽军,黄健,罗小红,吴立志,刘然义,黄必军,李焱,曾益新,黄文林
用ELISA方法测定95例SARS患者急性期、恢复期血清细胞因子水平,用流式细胞仪检测该组患者急性期、恢复期淋巴细胞亚群,并分析细胞因子水平和淋巴细胞亚群变化的关系。结果发现,IL-10和TGF-β在观察期(急性期和恢复期)持续升高,急性期CD4+和CD8+T细胞显著减少,恢复期患者外周血CD8+记忆T细胞减少36.78%。IL-10和TGF-β升高与淋巴细胞变化具有统计学相关。结果提示,SARS病毒感染抑制宿主的细胞免疫功能,引起急性期CD4+和CD8+T细胞显著降低和恢复期的免疫记忆细胞减少。而IL-10和TGF-β过表达可能在SARS免疫病理中起重要作用。
2005年05期 358-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：218 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ] - 唐旭,张瑾,李远宏,周伟,赵玉铭,董小平,陈洪铎
用杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒6型(human papillomavirus type 6,HPV6)主要衣壳蛋白(major capsidprotein,L1)作为抗原,对尖锐湿疣(condyloma acuminata,CA)患者抗体进行检测。采用昆虫杆状病毒系统表达HPV6 L1蛋白,通过镍柱亲和层析法获得纯化抗原;以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测30例CA、20例献血员和10例儿童血清中的HPV6 L1 IgG抗体。感染重组杆状病毒的昆虫细胞经SDS-PAGE和Western blot检测,在大约55kD处有明显的外源蛋白表达条带。ELISA结果显示,CA组的血清阳性率为66.7%(20/30),献血员组的阳性率为15%(3/20),两组之间有显著性差异(P<0.05)。22例HPV6型感染的CA患者有15例血清阳性(68.2%),6例HPV11型CA患者4例阳性(66.7%),1例混合感染者为阳性,1例HPV16型患者为阴性。女性CA患者的血清抗体阳性率高于男性(P=0.0052)。本研究建立的ELISA体系具有敏感性和针对低危型HPV感染的特异性。这不仅对于HPV血清流行病学研究是有价值的,而且对于临床诊断HPV感染可能具有一定的应用价值。
2005年05期 364-369页 [查看摘要][在线阅读][下载 84k] [下载次数：107 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 王文玲,陆振华,辛伟,李仁清,张相民,邓瑶,陆柔剑,梁国栋,阮力
使用2×107PFU乙脑病毒野毒株GSS抗原preM-E-NS1-NS2a的非复制型重组痘苗病毒NTV-JEV免疫3周龄BALB/c小鼠,小鼠体内乙脑病毒特异性抗体滴度1∶71,IgG2a/IgG1为1.5,中和抗体滴度为1∶8,免疫组小鼠产生特异性补体介导的细胞杀伤作用。以10 LD50乙脑P3株病毒对小鼠进行了脑内攻击,NTV-JEV免疫组小鼠存活率为100%,与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2免疫组存活率相同。100 LD50P3株病毒攻击后NTV-JEV免疫组存活率28.6%,与SA14-14-2组免疫效果无明显差别。存活小鼠体内乙脑病毒特异性抗体升高为1∶179,IgG2a/IgG1比值为1.9,中和抗体大于1∶16。以30 LD50GSS株病毒进行攻击后,NTV-JEV免疫组和SA14-14-2组保护率均为8.3%。上述结果表明,NTV-JEV与乙脑减毒活疫苗SA14-14-2株具有相近的保护力,NTV-JEV不仅可以保护小鼠抵抗同株病毒GSS的攻击,而且可以抵抗异株病毒P3的攻击。
2005年05期 370-375页 [查看摘要][在线阅读][下载 92k] [下载次数：127 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 高建梅,万言珍,韩俊,王小凡,陈岚,聂凯,周伟,董小平
人类朊病毒病中约10%~15%具有家族遗传特性,其中插入或缺失突变多发生于PrP蛋白N末端的八肽重复区域。运用PCR成功地构建并表达了含不同八肽重复数目的PrP蛋白,并观察八肽重复数目的增加对PrP与Cu2+等二价离子以及tau蛋白的相互作用的影响。实验结果显示:各种纯化后的PrP蛋白对常规浓度PK消化是敏感的,而与Cu2+共同孵育可使PrP蛋白的PK抗性增强;八肽重复序列的数目及Cu2+的浓度决定了PK抗性的出现和强弱。另外,Mn2+可诱导产生与Cu2+相似的结果,但其诱导效应似乎低于Cu2+,而Zn2+对PrP蛋白的PK抗性无影响。GST-tau包被的ELISA检测证实,重组的PrP呈现出明显的tau蛋白结合能力,并且与八肽重复序列的数量相关,重复序列数量越多,结合能力越强。这些结果提示,Cu2+诱导产生的PrP蛋白PK抗性是通过八肽重复序列区域产生的,并且直接与重复序列的数量相关。另外,PrP蛋白八肽重复序列的存在和数量直接影响PrP与tau蛋白的结合效应。除了八肽区域外,PrP蛋白其它区域似乎也具有一定的tau蛋白结合能力。
2005年05期 376-383页 [查看摘要][在线阅读][下载 154k] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 杨乐乐,郭福生,孙淑芳,吴斌,陈焕春
猪呼吸道冠状病毒(PRCV)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的自然缺失株,二者主要区别在于PRCV的S基因缺失B、C两个主要抗原位点。因此,利用RT-PCR技术分别扩增TGEV Purdue毒株S基因近N端的S1和S1-2两个片段,将之克隆到pGEX-KG原核表达载体的GST基因下游,经表达,获得大小约52kD和108kD两种融合蛋白,表达量分别占菌体总蛋白的45%和35%,主要以包涵体的形式存在。利用TGEV和PRCV两种阳性血清进行Western blot检测,当第一抗体为TGEV阳性血清时,可检测到52kD和108kD两条带;而当第一抗体为PRCV阳性血清时,只检测到108kD一条带。结果表明这两种融合蛋白具有良好的反应原性,且可用于TGEV和PRCV的鉴别诊断,为进一步研制开发TGEV和PRCV的鉴别诊断试剂盒奠定了基础。
2005年05期 384-388页 [查看摘要][在线阅读][下载 80k] [下载次数：265 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：3 ] - 曲娟娟,郭巍,赵立平,沈荣显,相文华
根据GenBank中发表的山羊关节炎脑炎病毒CAEV-CO株(caprine arthritis encephalitis virus-CO,CAEV-CO)的全基因组序列(序列号:NC-001463),设计合成了7对引物,对CAEV甘肃株的全基因组进行了PCR扩增,并对扩增产物进行了克隆和测序。结果表明,CAEV-甘肃株基因组全长为9 186nt。与国际标准毒株CAEV-CO株相比,在编码区有12个碱基的缺失,二者的核苷酸同源性为91.0%;在非编码区有27个核苷酸的插入,核苷酸同源性为97.0%。gag、pol、蛋白Q、tat、env基因编码的氨基酸同源性分别为94.6%、94.7%、87.9%、94.7%和91.5%。
2005年05期 389-392页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 谢芝勋,庞耀珊,邓显文,唐小飞,刘加波
根据基因库中对虾桃拉综合征病毒(TSV)、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(I-HHNV)的基因序列,分别设计了三对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的多重RT-PCR。该技术对同一样品中的TSV RNA、WSSV DNA和IHHNV DNA模板进行扩增,结果均同时得到3条大小与实验设计相符的231bp(TSV)、593bp(WSSV)和356bp(IHHNV)的特异性多重RT-PCR扩增带,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到10pg TSV RNA、100pg WSSV DNA和100pg IHHNV DNA。临床检测试验结果表明,该技术对TSV、WSSV和I-HHNV的检出率明显高于传统的临床症状观察和组织病理学检查,提示该技术适用于这三种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。
2005年05期 393-396页 [查看摘要][在线阅读][下载 51k] [下载次数：446 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：29 ] |[阅读次数：3 ] - 徐春晓,喻宏,严馨蕊,黄国锦,姚立红,陈爱王君,张智清2005年05期 397-399页 [查看摘要][在线阅读][下载 39k] [下载次数：146 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ]
- 吴冰,王志玉2005年05期 400-402页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k] [下载次数：124 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ]
- 燕飞,宋雪梅,成卓敏2005年05期 403-405页 [查看摘要][在线阅读][下载 50k] [下载次数：504 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ]
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