- 姬奕昕;许文波;张燕;朱贞;蒋小泓;梁勇;周淑洁;詹军;陈慧;张杰;司源;冯燕;芦起;许松涛;
研究2005年我国6省麻疹暴发、流行的野毒株基因型特征和分子流行病学,为进一步的麻疹防治策略提供科学依据。用RT-PCR方法,从2005年6省分离的48株麻疹病毒株中扩增出核蛋白(nucleoprotein,N)基因C末端676个核苷酸片段。再对扩增产物进行核苷酸序列测定和分析,并以C末端456个核苷酸片段构建基因亲缘性关系树,进行核苷酸、氨基酸同源性分析。6省分离的48株麻疹病毒均为H1基因型,其中两株为H1b亚型,其余为H1a亚型。48株野毒株的核苷酸同源性为95.1%~100%(核苷酸差异为0~22bp),氨基酸同源性为92.7%~100%;与我国疫苗株S191的核苷酸同源性为88.7%~92.5%,氨基酸同源性为88.0%~91.2%。其中Shaanxi05-1和Yunnan05-1,Anhui05-2和Ningxia05-9的N末端456个核苷酸的同源性为100%;Hebei05-19、Anhui00-2和Liaoning02-2,Hebei05-1和Chongqing04-3的核苷酸的同源性为100%。引起2005年我国6省麻疹暴发流行的野毒株为H1基因型,并以H1a为绝对优势亚型。各省之间存在相同毒株引起的传播链,不同年份之间存在相同麻疹野毒株的持续循环传播。同时提示,有必要进一步研究由核苷酸变异引起的氨基酸变异及中和抗原位点等生物学性状的改变,可能影响麻疹病毒的毒力和传播力。
2005年06期 407-415页 [查看摘要][在线阅读][下载 137K] [下载次数：271 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：64 ] |[阅读次数：3 ] - 孙梅生;王征;周蕊;马学军;舒跃龙;侯云德;
建立一种高通量的基因微阵列检测技术,对常见呼吸道病毒感染进行监控。根据公开发表的8个病毒科38种常见呼吸道病毒的序列,计算其保守区域,设计病毒的特异性检测探针,制备呼吸道病毒检测基因微阵列。利用随机引物PCR方法标记样品中的病毒靶序列,标记产物与基因微阵列上的探针杂交,清洗、扫描后进行结果分析。采用流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒和风疹病毒作为报告病毒,并对80例上呼吸道感染患者的咽拭子标本进行验证测试。初步结果表明,该呼吸道病毒微阵列基因芯片检测是可行的,在利用基因微阵列技术对病毒监控方面进行了有益的尝试,得到了有经验的信息。
2005年06期 416-421页 [查看摘要][在线阅读][下载 179K] [下载次数：302 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：2 ] - 陈毅歆;罗海峰;葛胜祥;郭永利;彭耿;王嘉;陈鸿霖;张军;管轶;夏宁邵;
以禽流感病毒株Ck/HK/Yu22/02(H5N1)作为免疫原,利用常规杂交瘤技术和血凝抑制试验法成功地筛选出6株稳定分泌抗高致病性H5亚型禽流感病毒血凝素的单克隆抗体(单抗),分别命名为2F2、3C8、3FC1、7C6、10HD4和13G4。经血凝抑制试验法分析,结果发现这6株单抗具有特异性高、反应性强、识别谱宽且互补等特点。基于单抗2F2,初步建立了三种H5N1病毒诊断方法,经评估证实均具有很好的特异性。由此说明,研究制备的抗H5亚型禽流感病毒血凝素单抗可适用于H5N1病毒的诊断。
2005年06期 422-427页 [查看摘要][在线阅读][下载 163K] [下载次数：506 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：3 ] - 吴婷;欧山海;程通;何水珍;伍小路;郑舟;张军;夏宁邵;
HEV 239是福建省医学分子病毒学研究中心实验室研制的一种戊型肝炎病毒(HEV)重组颗粒性蛋白疫苗,该文旨在研究HEV239蛋白疫苗在小鼠体内诱导产生特异性免疫应答的情况。将5μg HEV 239蛋白疫苗(239-Pro)、加铝佐剂疫苗(239-Vac)或加弗氏佐剂疫苗(239-CFA)肌肉注射免疫BALB/c鼠3次,第8周检测鼠血清抗HEV抗体及其亚类,同时用ELISPOT方法检测细胞毒性T细胞(CTL)应答。结果显示:239-Vac诱导的抗体滴度与239-CFA相当,高于无佐剂的239-Pro。239-Vac诱导的抗体中,IgG1/IgG2a比值显著高于239-CFA和239-Pro,主要为Th2型应答。除239-CFA之外,239-Vac和239-Pro也可诱导出一定的HEV抗原特异性I型Tc应答。提示:重组抗原HEV 239能诱导良好的抗体应答及一定的Tc1应答。
2005年06期 428-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 141K] [下载次数：305 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：3 ] - 郑英杰;王于超;张军;朱建福;宋建根;高眉扬;夏宁邵;王法弟;姜庆五;
近年来戊型肝炎(Hepatitis E,HE)被怀疑是一种人兽共患病,猪是其重要的宿主。通过在HE流行区比较接触猪人群和对照人群HE感染率,评价接触猪对人群的HE感染的风险。在浙江省北部某县采用限制研究对象的群组匹配的横断面调查,对同地区同年龄段的接触猪人群和对照人群进行问卷调查,采集血液并检测抗HE抗体。研究发现,接触猪人群和对照人群的年龄大致相当,但前者男性比例较高。接触猪人群抗HE抗体感染率(254/340,74.71%)明显高于对照人群(319/512,62.30%)。经过分层分析和多因素非条件Logistic回归分析,平衡性别和年龄因素后,接触猪仍能增加约50%人群的HE感染风险。随着接触年数的增加,其风险也增加,接触猪5~14年和15年以上人群分别比对照人群增加65%和157%的HE感染风险。接触猪人群男性、女性和合计的标化感染率分别为72.30%、65.67%和70.92%,均高于对照人群(69.87%、51.82%和60.80%),尤其以女性更为明显。在HE流行区,接触猪可能增加人群HE感染风险,对女性的影响可能较大,随着接触猪年数的增加HE感染的风险也增加。由于本研究采用病因和结果同时出现的横断面研究,确切的接触猪和HE感染的关系需要建立合适的接触猪人群队列并结合详细的接触猪暴露调查得到阐明。
2005年06期 434-438页 [查看摘要][在线阅读][下载 107K] [下载次数：244 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：29 ] |[阅读次数：3 ] - 叶绪芳;任刚;严冬梅;苏飞;刘铭;张勇;童亦兵;喻浩;王东艳;赵蓉;李杰;许文波;
为及时发现和阻断疫苗衍生脊髓灰质炎(脊灰)病毒(vaccine-derived polioviruses,VDPVs)循环、脊灰野病毒的输入和能够引起临床脊灰的其它脊灰疫苗相关病毒,做好贵州省无脊灰状态下脊灰病毒学监测工作,采用病毒分离、鉴定与核苷酸序列测定和分析方法,对贵州省贞丰县及周围10个县2003~2004年报告的急性弛缓性麻痹(AFP)病例及2004年接触者粪便标本的病毒学监测的结果进行了分析。对收集到的105例AFP病例和47例密切接触者的278份便标本进行了病毒学监测,结果从66例中共分离到肠道病毒(EV)66株,阳性率为43.4%,其中脊灰病毒(PV)29例,分离率为19.1%,非脊灰肠道病毒(NPEV)37例,分离率为24.3%。29例PV经中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家脊灰实验室鉴定,24例为疫苗相似株,5例为脊灰Ⅰ型VDPVs,这5例均为2004年从贞丰县所分离到。贞丰县及周围县EV阳性检出率(43.4%)高于2003~2004年全省水平(22.9%~24.6%),2004年PV分离率比2003年高达2.6倍,29株PV中单个Ⅰ型占34.5%,明显高于往年(2000~2002年全省平均4.1%)。本研究提示,Ⅰ型VDPVs在贞丰县引起了循环(cVDPVs),通过口服脊灰疫苗强化免疫已经阻断cVDPVs的传播。人群中PV和NPEV带毒率明显增高,非VDPVs引起的临床符合脊灰病例不容忽视;应加强脊灰病毒学监测数据的分析和早期疫情预警工作。
2005年06期 439-442页 [查看摘要][在线阅读][下载 42K] [下载次数：82 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 高晨;韩俊;石琦;陈岚;万言珍;高永军;陈建明;姜慧英;周伟;张宝云;董小平;
利用RT-PCR方法从人源细胞系SH-SY5Y cDNA中扩增出载脂蛋白ApoE基因,并在pET32a载体中表达融合蛋白His-ApoE,以纯化的融合蛋白免疫实验用兔获得特异性抗体,利用ELISA及免疫共沉淀方法对ApoE及PrP之间的相互作用进行研究。结果表明,SDS-PAGE显示表达的His-ApoE蛋白的相对分子量约为54 000,所制备的抗血清ELISA效价可达到1∶406 900,并能够有效地识别重组及动物组织中的内源性ApoE蛋白。ELISA和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的ApoE可与全长的PrP蛋白(PrP23-231)在体外发生相互作用,其作用位点可能位于PrP蛋白的N端。这些结果为TSE经血传播的机制研究提供了新思路。
2005年06期 443-447页 [查看摘要][在线阅读][下载 272K] [下载次数：227 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 吉荣;崔治中;王锡乐;孙淑红;
利用脂质体转染技术,将含有SNV株禽网状内皮组织增生症病毒(REV)前病毒全基因组cDNA克隆质粒转染鸡胚成纤维细胞(CEF)。用对REV的单克隆抗体和抗REV env-gp90的鼠血清作间接免疫荧光反应,在原始的转染细胞及随后传代的细胞中均显示病毒特异性抗原。而且,在连续传代细胞中的阳性率明显升高。用REV特异性引物对进一步传代后的细胞基因组作PCR,也检测出REV基因组。这些结果均表明所得到的分子克隆化病毒具有传染性,因而也进一步证明所用的质粒克隆包含有具感染性的全病毒基因组。对该全基因组cDNA克隆进行酶切所获得的数个亚克隆进行测序,并将序列进行拼接,完成了REV全基因组序列。REV的这个传染性克隆将有助于进一步研究REV的分子生物学特性。
2005年06期 448-455页 [查看摘要][在线阅读][下载 421K] [下载次数：387 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：35 ] |[阅读次数：3 ] - 叶建强;秦爱建;邵红霞;刘红梅;金文杰;刘岳龙;
将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-Jenv)插入pcDNA3.1真核表达载体,构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞。细胞经传30代后,冻存。13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养。连续传40代后,分别用PCR、Southern blot、间接免疫荧光(IFA)及Western blot对该细胞中的env基因进行了检测,并进行了抗病毒感染分析。研究结果表明,通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-Jenv基因的鸡胚成纤维细胞系,命名为pcDNA-env-DF-1细胞。该细胞在体外抗ALV-J感染试验中,能抵抗1×104个TCID50病毒感染量,提示所构建的细胞系具有良好的抗病毒作用。这一细胞系的构建为研究ALV-J Env蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供了很好的工具。
2005年06期 456-460页 [查看摘要][在线阅读][下载 489K] [下载次数：547 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：3 ] - 钱娟;齐义鹏;
对虾白斑综合征是一种严重危害对虾养殖业的病毒性疾病。由于目前对其病原体对虾白斑综合征病毒(WSSV)的研究不够深入,所以对WSSV的有效防治仍然是一大难题。为此,用完整的对虾白斑综合征病毒粒子作为靶抗原固相包被,淘选噬菌体展示单链抗体文库,得到两个能够与WSSV结合的单链抗体:E2和H4。单链抗体H4能够结合病毒并抑制病毒对原代培养的对虾淋巴细胞的感染,这些结果表明此单链抗体具有开发为诊断试剂盒和抗病毒药物的潜力。
2005年06期 461-467页 [查看摘要][在线阅读][下载 1476K] [下载次数：216 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 秦碧霞;郑红英;蔡健和;陈炯;刘志明;陈剑平;
在广西临桂罗汉果花叶畸形病株上获得了一个线状病毒分离物LGL-1,寄主范围、蚜传能力测定、病毒粒子形态和细胞病理特征研究表明,它是马铃薯Y病毒科成员。采用马铃薯Y病毒科特异性简并引物做PCR扩增,并测定了分离物LGL-1的基因组3′-末端序列,序列分析表明它是小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)。系统进化树分析揭示,世界范围内的ZYMV分离物主要可分为3大群体,分离物LGL-1为中国特有群体Group III成员。原核表达制备了分离物LGL-1的外壳蛋白抗血清,明确了ZYMV是引起广西罗汉果病害的主要病毒,并且比较了原核表达法和提纯病毒法制备的抗血清,在病样的间接ELISA法检测中结果的差异。
2005年06期 468-473页 [查看摘要][在线阅读][下载 640K] [下载次数：333 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：27 ] |[阅读次数：3 ] - 周雪媚;李永清;张培君;王宏俊;佘锐萍;章振华;罗长保;2005年06期 474-477页 [查看摘要][在线阅读][下载 113K] [下载次数：245 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：3 ]
- 蒋文明;姜平;李玉峰;2005年06期 478-480页 [查看摘要][在线阅读][下载 238K] [下载次数：281 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ]
- 郭秀婵;2005年06期 481-484页 [查看摘要][在线阅读][下载 166K] [下载次数：165 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ]
- 郭银汉;王晓鹏;2005年06期 485-487页 [查看摘要][在线阅读][下载 40K] [下载次数：184 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ]
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