- 张勇;严冬梅;王东艳;赵蓉;张大勇;叶绪芳;祝双利;安洪秋;许文波;
在对分离于中国贵州省的9株I型循环的疫苗衍生脊髓灰质炎病毒(cVDPVs)进行全基因组核苷酸序列分析后,发现已知最重要的决定病毒神经毒力的位点G-480和U-525并没有发生回复野生型突变;另外一些已知的神经毒力决定位点,如A-2438、A-2795、C-6203和G-7441等均已经发生了回复野生型突变。根据核苷酸序列的不同,从9株I型cVDPVs毒株中选取5株病毒感染转人脊髓灰质炎病毒受体基因的小鼠进行神经毒力实验,发现它们的神经毒力都有所升高,其中CHN8184株和CHN8229-1.1株的神经毒力已经十分接近P1/Mahoney株,CHN8229-1.1株、CHN8229-2株和CHN8229-3株神经毒力依次递减,但仍处于较高水平,在它们的全基因组中分别只有7个和2个核苷酸的差异,而毒力却相差很多,提示有新的未鉴别的神经毒力决定位点的存在。对这些毒株5′非编码区(5′NCR)的第V结构域进行二级结构预测,发现它们的二级结构很稳定。在G-480位点没有发生回复突变的情况下,部分毒株的神经毒力已经非常接近P1/Mahoney的水平,提示先前的研究中关于G-480突变对I型脊髓灰质炎病毒神经毒力的作用可能被估计过高,G-480位点不是唯一重要的神经毒力决定位点,可能多个核苷酸联合突变才能达到减毒的效果。要真正全面了解P1/Sabin株的减毒机制,还需要进行更加深入的研究。
2007年01期 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 270K] [下载次数:102 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:459 ] - 方肇寅;谢华萍;吕红霞;刘娜;章青;段招军;Duncan Steele;Baoming Jiang;Xi Jiang;
人杯状病毒(HuCV)是世界范围内急性腹泻的重要病原。此文收集我国长春、北京、河北卢龙、兰州、昆明等13个地区1999-2005年5岁以下腹泻患儿检测轮状病毒为阴性的粪便标本4426份,用ELISA和RT-PCR方法检测HuCV,结果表明HuCV检测阳性率为19%(8.3%-38.6%)。对其中151株HuCV PCR产物测序进行核苷酸序列比对构建的系统发生树表明,我国流行的HuCV以诺如病毒(NV)为主(146/151,占96.7%),其中绝大多数为GGⅡ/4基因型(99/146),其它依次为GGⅡ/3(22/146)、GGⅡ/5(8/146)、GGⅡ/6(2/146)、GGⅡ/7(2/146)、GGⅡ/8(2/146)和GGⅠ/2(2/146),札如病毒(SV)共5株,均属SGⅡ。此外有9株NV GGⅡ遗传组毒株,尚不能归入现有基因型,可能为我国特有的新基因型,表明我国流行的HuCV毒株存在很高的遗传多样性。我国婴幼儿HuCV腹泻全年都有发生,但秋冬季(10月-次年1月)有一个发病高峰,病例以6-17月龄组最多,至3岁时超过96%的儿童都感染过HuCV。对我国流行的HuCV不同毒株的地区分布,不同年度HuCV检测阳性率的变化趋势进行了讨论。
2007年01期 9-15页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K] [下载次数:464 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:184 ] |[阅读次数:445 ] - 杨怡姝;李岚;李泽琳;曾毅;
采用RT-PCR技术,从HIV的非允许性H9细胞中获得载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3G(APOBEC3G)的全长cDNA。APOBEC3G cDNA全长1 155nt,编码384个氨基酸。将APOBEC3G克隆到真核表达载体pEGFP-C3上,转染CD4+HeLa细胞,激光扫描共聚焦显微镜下可观察到表达的GFP-APOBEC3G融合蛋白定位于细胞质。
2007年01期 16-21页 [查看摘要][在线阅读][下载 383K] [下载次数:799 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:6 ] |[阅读次数:467 ] - 朱钦昌;任哲;张春龙;张美英;廖红娟;刘秋英;张佩琢;李久香;胡巢凤;王华东;王一飞;
以HSV1 gD糖蛋白基因为靶点,设计合成5对siRNA,并构建pEGFP-N1-gD融合表达质粒,脂质体法共转染Vero细胞,利用绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的特征,流式细胞仪筛选特异沉默gD表达的siRNA。然后有效siRNA转染Vero细胞并感染HSV1,通过空斑减数实验,Real-time PCR和子代病毒滴度评价其对HSV-1感染的作用。结果显示siRNA能有效抑制gD-EGFP融合蛋白和感染细胞内gD糖蛋白的表达,但对HSV-1的感染性无明显抑制作用,故选择gD作为siRNA抗病毒靶点还需进一步的论证。
2007年01期 22-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 173K] [下载次数:231 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:332 ] - 董辰方;王小凡;安润;陈建明;单冰;韩露;雷艳君;韩俊;董小平;
为了进一步确定PrP蛋白与微管蛋白是否发生分子间相互作用以及PrP蛋白多肽链中与微管蛋白相互作用的区域,我们表达纯化了全长的PrP以及PrP蛋白缺失突变体,提取了兔脑组织中天然微管蛋白。利用pull-down及免疫共沉淀方法检测全长PrP及PrP蛋白缺失突变体与微管蛋白是否发生分子间相互作用。结果显示,全长His-PrP23-231能与微管蛋白发生体外相互作用,并首次证实了PrP与微管蛋白相互作用的区域位于PrP N端第23位至91位氨基酸。此研究为进一步研究PrP在神经细胞的主动转运机制以及Prion疾病的发病机制提供了一定的理论基础。
2007年01期 28-32页 [查看摘要][在线阅读][下载 129K] [下载次数:194 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:3 ] |[阅读次数:368 ] - 黄莺;邵炜;贾丽丽;俞炜源;俞永新;
在以往构建的JEV疫苗株SA14-14-2感染性克隆pBRkpn-JTF的基础上,构建了去除JEV结构区域基因(prM基因和E基因),保留非结构区域基因的复制子表达载体pCTCJEV、pCTMJEV,转染BHK-21细胞后,通过反转录PCR(RT-PCR)和间接免疫荧光实验(IFA)检测该载体的自主复制能力和蛋白表达情况,结果证实该载体在BHK-21细胞中能够自主复制并且表达非结构蛋白。进一步在该载体中插入报告基因EGFP,检测外源蛋白的表达情况,结果显示在转染复制子载体的24h后,荧光显微镜下能够看见绿色荧光蛋白的表达,阳性信号持续增强,能够维持10d左右,证实了构建的复制子载体pCTCJEV能够有效地表达外源蛋白,这为进一步建立以乙脑病毒复制子为基础的疫苗载体系统打下基础。
2007年01期 33-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 277K] [下载次数:420 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] |[阅读次数:374 ] - 秦卓明;马保臣;袁小远;徐怀英;何叶峰;崔治中;
选取国内1997-2005年分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,与在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸进行同源相关比较。结果显示:国内所有NDV分离毒株氨基酸高度同源,同源性为94.4%-99.4%;与LaSota、Clone30疫苗株等的氨基酸同源性为86.9%-89%;与强毒株F48E9的氨基酸同源性为87.9%-89.9%;与国外NDV的氨基酸同源性为87.2%-96.2%。系统发育分析表明:国内NDV分离毒HN遗传距离较近,而与LaSota、Clone30和F48E9遗传距离较远。国内NDV分离毒均缺乏538-540位糖基化位点。不同片段与全长的氨基酸同源性高度相关,且与前80个氨基酸相关最密切。
2007年01期 39-45页 [查看摘要][在线阅读][下载 315K] [下载次数:390 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:21 ] |[阅读次数:325 ] - 汪铭书;程安春;刘伍梅;周毅;郭宇飞;袁桂萍;陈孝跃;
以猪生殖与呼吸综合征病毒四川分离株PRRSV-SC1株感染体外培养的Marc-145细胞为模型,通过透射电镜对PRRSV的病毒形态发生学和宿主细胞超微结构的动态变化规律进行研究。结果显示,病毒粒子呈球形,有囊膜,大小约45-65nm,内含直径约25-30nm的核衣壳。病毒感染细胞后以细胞内吞方式进入细胞,在胞浆内复制,装配好的病毒以出芽或细胞外分泌释放到细胞外。感染细胞超微结构变化主要表现为:细胞胞浆空泡增多,内质网扩张,线粒体增生、嵴肿胀、脱落,最后空泡化,细胞表面的微绒毛脱落,出现典型的细胞凋亡特征,并观察到凋亡小体,最后整个细胞裂解、破碎。
2007年01期 46-50页 [查看摘要][在线阅读][下载 558K] [下载次数:561 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:347 ] - 郑海学;刘湘涛;尚佑军;张淼涛;冯霞;白兴文;吴锦艳;吕建亮;孙世琪;尹双辉;郭建宏;谢庆阁;
从实验感染猪水泡病病毒(SVDV)的乳鼠组织中提取RNA,利用长距离的RACE技术,扩增出覆盖SVDVHK′1/70株全基因组的2个忠实性的cDNA重叠片段(3′PCR片段和5′PCR片段),分别克隆进pGEM-T Easy载体。利用AatⅡ和BssHⅡ酶切含5′PCR片段的重组质粒,回收目的片段,定向克隆于含3′PCR片段的重组质粒,构建出了SVDV HK′1/70株全长cDNA重组质粒,然后进行序列测定。结果表明,HK′1/70株基因组全基因组序列长7 401 nt(poly A除外),其中5′NCR长743 nt,该毒株蛋白编码区的核苷酸序列为6 558 nt,编码一个长2 185个氨基酸的聚合蛋白,3′NCR长102 nt,其后是至少含有74个A碱基的poly A尾。在HK′1/70株全长cDNA序列的5′端引入了T7启动子序列,在poly A3′端引入了Psp1406Ⅰ识别序列。通过序列同源性和进化树分析,结果表明,HK′1/70属于第Ⅱ抗原遗传群,SVDV与CB5的遗传关系最近,且位于CB5遗传进化树的分支上。HK′1/70株全长cDNA的序列测定及构建,为拯救SVDV和在分子水平进一步深入研究SVDV打下坚实的基础。
2007年01期 51-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 197K] [下载次数:199 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:479 ] - 林峰;曾爱平;杨恩;林海燕;郑昌华;陈弘;李桦;李旭阳;郁明素;杨宁敏;金大智;余光创;伯晓晨;文思远;王升启;2007年01期 57-59页 [查看摘要][在线阅读][下载 55K] [下载次数:330 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:20 ] |[阅读次数:431 ]
- 曹守春;钱渊;李国华;朱汝南;赵林清;丁雅馨;2007年01期 60-62页 [查看摘要][在线阅读][下载 154K] [下载次数:149 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:1 ] |[阅读次数:521 ]
- 靳淼;樊景凤;于天飞;方肇寅;王君伟;2007年01期 63-67页 [查看摘要][在线阅读][下载 403K] [下载次数:345 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:13 ] |[阅读次数:413 ]
- 程从升;舒跃龙;张智清;2007年01期 68-71页 [查看摘要][在线阅读][下载 51K] [下载次数:709 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:22 ] |[阅读次数:406 ]
- 洪敏;李卫中;李琦涵;2007年01期 72-75页 [查看摘要][在线阅读][下载 52K] [下载次数:437 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:7 ] |[阅读次数:435 ]
- 马建;孔宪刚;沈荣显;周建华;2007年01期 76-78页 [查看摘要][在线阅读][下载 39K] [下载次数:128 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:393 ]
- 刘光清;云涛;王根荣;倪征;2007年01期 79-83页 [查看摘要][在线阅读][下载 103K] [下载次数:347 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:49 ] |[阅读次数:408 ]
- 2007年01期 84页 [查看摘要][在线阅读][下载 256K] [下载次数:60 ] |[网刊下载次数:35 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:152 ]
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