- 熊君辉;郭清顺;葛胜祥;顾颖;陈毅歆;苗季;杜海莲;史维国;张军;夏宁邵;
通过Western blot、体外捕获PCR、ELISA阻断实验及合成的多肽库等方法,对23株抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆抗体(单抗)识别HEV ORF2表位的作用进行系统研究。结果显示,7株线性单抗识别表位都位于ORF2 aa408~458之间,16株构象型单抗识别表位都定位于ORF2 aa459~606之间,大部分构象型单抗识别表位都在天然病毒表面。对这些单抗识别表位系统地了解将为HEV疫苗、诊断、病毒受体和病毒感染机制等方面的研究提供重要工具。
2008年02期 83-87页 [查看摘要][在线阅读][下载 375K] [下载次数：371 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：3 ] - 张涛;程通;张雅丽;魏丽华;蔡毅君;张军;朱桦;韩家淮;夏宁邵;
RNAi技术在艾滋病治疗研究中已展现出巨大的潜力,兼具高效抑制特性和保守性的siRNA靶位是其获得成功应用的重要基础。本研究选择以HIV-1 vif基因为靶区筛选高效保守的RNAi序列,共选择设计了30个识别不同位点的siRNA序列,以pSUPER为载体构建了相应的shRNA表达质粒。通过与pNL4-3质粒在293FT细胞中进行共转染抑制实验,以及对初筛获得的高效序列进行保守性分析显示siRNA-vif37序列具有高效抑制效率和较好的保守性特征。通过与pGL3-vif报告质粒的共转染实验证明siRNA-vif37具有vif基因抑制特异性。带有shRNA-vif37表达元件的重组慢病毒转导后的MT-4细胞在HIV-1NL4-3体外攻毒实验中可显示出较有效的抑制病毒复制的能力,本研究进一步对转导后细胞进行克隆化筛选,获得稳定整合shRNA-vif37表达元件的MT-4-vif37细胞克隆,该细胞具有显著的抑制病毒复制的能力,在高攻毒剂量下仍可获得良好的抑制效果。本研究为进一步应用RNAi技术进行新型艾滋病治疗方法研究提供了重要基础。
2008年02期 88-95页 [查看摘要][在线阅读][下载 733K] [下载次数：490 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：4 ] - 关泽红;旭日干;
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关。但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚。本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制具有感染剂量依赖性;一步生长曲线分析结果表明其在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制较在正常细胞延迟3h;感染6h时CDK2活性被诱导,9h时活性最大;CDK2活性增加后HSV-1即进入快速的裂解性复制。提示CDK2可能在HSV复制的启动中起着某种重要作用。
2008年02期 96-100页 [查看摘要][在线阅读][下载 326K] [下载次数：242 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ] - 李魁彪;张晓光;马晶;贾晓俊;王敏;董婕;张晓梅;徐红;舒跃龙;
为了提高人禽流感病毒血凝素HA的表达量,应对流感大流行疫苗的需求,按照人的偏爱密码子将H5N1(A/Anhui/1/2005)流感病毒的HA基因进行优化改造,经全基因合成后插入到真核表达载体pDC315中,构建了真核表达质粒pDC315-Mod·HA;将此质粒和含野生HA基因的真核表达质粒pDC315-Wt·HA分别转染293T细胞,比较HA蛋白的表达量。结果表明:经间接免疫荧光实验及Western blot实验比较和鉴定,密码子优化后,HA蛋白在293T细胞中的表达水平显著提高,为流感大流行疫苗的研究打下了基础。
2008年02期 101-105页 [查看摘要][在线阅读][下载 318K] [下载次数：302 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 刘燕飞;胡孔新;洪一江;杨蕴秋;索华倩;王静;
利用透射电子显微镜(TEM)和原子力显微镜(AFM)观察流感病毒(H1N1),探讨AFM在病毒形态研究中的应用,为病毒形态学研究提供一种新型、简便、快捷的工具。TEM采用磷钨酸负染方法,AFM采用轻敲模式在大气常温下扫描成像,并对主要指标长度(直径)、Ra、Rq等进行测量。两种方法最终得到相似的形态学结果,流感病毒呈球状、丝状,并有一些形状介于两者之间。TEM提供了流感病毒二维图像,可见钉状突起,AFM则呈现了流感病毒三维图像,且可见病毒表面有凹凸不平的特征和边缘有齿轮状的突起,同时获得表面粗糙度等可以量化指标。与TEM观察相比,原子力显微镜是一种制样简单、观察直观的新型病毒形态学研究工具,其表征参数可以作为病毒形态学研究的量化指标。
2008年02期 106-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 266K] [下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：4 ] - 张晓楠;王钰;李成仁;刘乔然;韩宗玺;邵昱昊;刘胜旺;孔宪刚;
选择我国应用的五株鸡传染性支气管炎活疫苗毒株(JAAS、IBN、Jilin、J9和H120)和当地流行毒株(CK/CH/LDL/97Ⅰ)作为研究对象,对其S1基因进行序列比对分析,结果表明疫苗株与流行毒株的核苷酸序列及推导的氨基酸序列同源性分别不超过76·4%和78·7%。S1基因的核苷酸系统发育树显示,疫苗株与流行毒株分属不同进化群,亲缘关系较远,属于不同的基因型。用这五株活疫苗进行针对强毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ株的免疫保护实验,可见临床发病率为30%~100%;攻毒5d后每组随机扑杀10只鸡,采集器官,应用RT-PCR法检测病毒,气管样品病毒检出率为50%~90%,肾脏样品病毒检出率为10%~30%。由此可见:我国目前使用的主要活疫苗对异种IBV分离株的感染不能提供完全的保护作用。
2008年02期 111-116页 [查看摘要][在线阅读][下载 260K] [下载次数：314 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 施维松;刘长军;张艳萍;秦运安;张晓巍;李晶梅;陈洪岩;
根据鸡马立克氏病病毒(MDV)GA株Meq基因序列,设计并合成一对用于扩增Meq基因的引物,利用这对引物通过PCR方法分别扩增4株东北地区分离的强毒株、国内标准强毒株J-1株、国内疫苗株814株的Meq基因片段,进行克隆测序,对4株MDV分离毒株Meq基因与国内传统毒株Meq基因及GenBank上收录的国内外9株毒株Meq基因序列进行比较分析。序列比较显示,不同的MDV株的Meq基因序列相对比较保守,它们相互间氨基酸序列的同源性在96·5%~99·7%之间。4株MDV分离毒株Meq基因在相关报道中提到的与毒力相关的脯氨酸重复区存在点突变;3株分离毒株Meq基因上相同位置均存在两个定点突变,这两处点突变是国内近几年分离株所特有的,国外已发表的MDV毒株Meq序列中不存在这种变化。分离株Meq基因的这些突变和毒株毒力的关系具有一定的规律性,但是这些规律性还有待进一步研究。
2008年02期 117-125页 [查看摘要][在线阅读][下载 1865K] [下载次数：447 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：27 ] |[阅读次数：3 ] - 韦正吉;韦平;磨美兰;李孟;韦天超;李康然;
对广西1985~2007年间分离到的22株传染性支气管炎病毒(IBV)的S1基因高变区Ⅰ(HVRⅠ)进行序列测定,并与发表的其他IBV参考株及鸽子分离的冠状病毒株的基因序列进行比较和分析。系统进化关系显示毒株可分为5个基因群,其中有16个广西分离株属第Ⅰ群,它们与鸽子冠状病毒分离株的氨基酸序列同源性较高,与Massachusetts(Mass)型疫苗株的同源性较低。有15个分离株在33~34位和34~35之间分别有4个和3个氨基酸残基的插入,GX-NN6在33~34位和34~35位之间则均有4个氨基酸残基的插入;GX-YL1、GX-NN2与常用的Mass型疫苗株的亲缘关系最近,同属于第Ⅱ群;GX-G、GX-XD与日本同一时期分离的毒株JP Miyazaki 89亲缘关系最近,属于第Ⅲ群;GX-YL6、GX-NN7与欧洲毒株4/91亲缘关系较近,属于第Ⅴ群。结果表明广西存在着多种类型IBV毒株的流行,毒株S1基因HVRⅠ碱基的突变或插入比较普遍,可导致其氨基酸序列的变化,绝大部分毒株与目前常用的Mass型疫苗株的亲缘关系较低。同一时期的分离株同源性较高,但无明显的地域性差异。
2008年02期 126-132页 [查看摘要][在线阅读][下载 403K] [下载次数：238 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：43 ] |[阅读次数：3 ] - 陈轶霞;才学鹏;景志忠;丁军涛;王颖;蒙学莲;张燕;贾万忠;乔军;闫鸿斌;房永祥;陈国华;骆学农;
通过PCR方法扩增全长P32基因和截去跨膜区的P32基因(MP32),将其分别克隆到真核表达载体pcDNA3·1(+)和已插入CpG序列的pcDNA3·1-CpG中,构建pcDNA3·1-P32、pcDNA3·1-CpG-P32和pcDNA3·1-CpG-MP32质粒;用脂质体法转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)试验验证其表达效果;经肌肉免疫注射健康BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测抗体;在免疫后的第3、5周取免疫小鼠的脾细胞,用流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞亚群。结果所构建的真核表达载体在BHK-21细胞中都能表达P32蛋白;免疫小鼠血清在免疫第2周后均能检测到羊痘特异性IgG抗体;免疫组小鼠脾脏CD4+T细胞数目和CD4+/CD8+T细胞比值明显高于对照组。结果提示,所构建的真核载体可诱导小鼠产生特异性体液免疫应答,并能刺激小鼠产生较强的细胞免疫应答。
2008年02期 133-137页 [查看摘要][在线阅读][下载 361K] [下载次数：467 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：3 ] - 傅光华;程龙飞;施少华;彭春香;陈红梅;黄瑜;
为研究鸭圆环病毒全基因组的分子生物学特性,运用重叠PCR技术从鸭组织脏器提取的DNA中扩增出2条核苷酸序列,拼接后对其核酸组成、基因组结构及病毒的遗传变异进行分析。结果表明所获病毒核酸为大小1995nt的环型DNA,包含6个ORF,与登录在GenBank中克隆株MuDCV(AY228555)的同源性高达97·4%,可见所扩增的核酸序列为鸭圆环病毒基因组序列。
2008年02期 138-143页 [查看摘要][在线阅读][下载 576K] [下载次数：859 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：78 ] |[阅读次数：3 ]