- 张健慧,Jens Wild,Kurt Bieler,Marcus Graf,Ludwig Deml,Hans Wolf,PeterLiljestrm,Ralf Wagner,邵一鸣
为探索Semliki森林病毒 (SFV)衍生的复制型DNA载体可否用于HIV疫苗的候选载体 ,对该载体与传统DNA疫苗载体对HIV - 1Pr5 5 gag的表达与体液免疫原性进行了系统比较研究。将野生型 (wtgag)及密码子改造(syngag)的HIV - 1ⅢBgag 基因分别克隆于SFVDNA载体及传统DNA疫苗载体 [pCDNA3 1(+) ],对其Pr5 5 gag细胞内表达水平、Pr5 5 gag病毒样颗粒释放、以及在BALB/c鼠的体液免疫原性进行了比较。在 2 93T、H12 99、C2C12和BHK细胞系中 ,SFV -wtgag可以Rev非依赖方式有效表达Pr5 5 gag ,而 pC -wtgag转染的细胞不能有效表达Pr5 5 gag,从而不能诱导小鼠产生免疫反应。虽然SFV质粒的细胞转化效率明显低于pCDNA载体 ,SFV -wtgag和SFV -syngag在细胞内Pr5 5 gag的表达量与 pC -syngag相似 ,而Pr5 5 gag病毒样颗粒的释放明显低于 pC -syngag。在肌内注射免疫的小鼠中 ,低剂量 (0 1和 1 0 μg)的SFV及 pCDNAgag表达质粒均未诱导出GAG特异性免疫反应。在高剂量 (10 ,30 ,10 0 μg)免疫组中 ,与SFVgag表达质粒相比 ,pC -syngag可诱导出较高水平的TH1型GAG特异性抗体。SFV -syngag较SFV -wtgag可诱导出高水平的体液免疫反应。结果提示 ,SFV衍生的复制子单独使用不能在小鼠诱导出优于传统DNA疫苗载体的HIV - 1GAG特异性?
2002年01期 1-8页 [查看摘要][在线阅读][下载 189k] [下载次数：175 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：3 ] - 刘锦彦,陶欣,洪坤学,吴岚,刘颖,朱家鸿,邵一鸣
为筛选用于我国HIV疫苗的候选基因 ,利用痘苗病毒载体构建表达HIV - 1B′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组病毒rVV -RL4 2 gag ,并免疫BALB/c小鼠 ,检测其诱导的特异性抗体及中和抗体 ,同时检测其诱导的特异性CTL及与中国流行株C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。结果显示 :重组病毒能很好地表达Gag蛋白 ,它具有与 7株单克隆抗体结合的抗体表位 ;电镜下可观察到Gag蛋白形成的颗粒。rVV -RL4 2 gag免疫小鼠后能诱导产生高滴度的特异性抗体和CTL ,抗体具一定的中和活性 ,且检测到与C(B′/C重组 )亚型和国际流行株A亚型之间的CTL交叉反应。这些结果表明 ,rVV -RL4 2 gag具有良好的免疫原性 ,可进一步构建表达HIVB′亚型中国流行株RL4 2 的Gag蛋白的重组痘苗病毒作为候选疫苗。
2002年01期 9-14页 [查看摘要][在线阅读][下载 103k] [下载次数：80 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 谢小燕,郭庆,程通,李少伟,张军,夏宁邵
利用昆虫细胞杆状病毒表达系统 ,将从一株HIV - 1阳性克隆质粒中获得的几个HIV包膜蛋白基因片段 ,克隆入转移载体中得到重组病毒。用此重组病毒感染昆虫细胞后表达出 3种HIV包膜蛋白 ,即GP12 0 - 41P、GP41T、GP41P ,分别含有HIV - 1包膜糖蛋白GP12 0及部分GP41,删除了N端 12个疏水氨基酸的GP41和仅有主要表位约 2 40个氨基酸的GP41。收获后分别以Western -blotting和EIA检测 ,有较好的免疫学活性 ,其中GP41T的活性最强。该实验为HIV包膜蛋白的结构研究提供了依据 ,加以改进后可能有免疫检测的价值。
2002年01期 15-20页 [查看摘要][在线阅读][下载 86k] [下载次数：232 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 马伟杭,范骏,张立煌,董海涛,赵年丰
为了解SEN病毒中国株的流行病学及基因序列 ,采集肝炎患者 (甲～戊型 )、非甲～非戊型肝炎患者、ALT升高的婴幼儿、尿毒症患者、静脉毒瘾者和健康体检人群的血清标本 ,用巢式PCR检测SEN病毒 ,结果他们的检出率依次为 13 3%、2 0 5 %、4 8%、5 8%、5 7%和 0。PCR获得了两种不同长度阳性片段。选取 5份阳性PCR产物进行纯化、连接及转化 ,获取重组克隆 ,命名为 pGCEM -SENVL(1、2、3)、pGEM -SENVS(1、2 ) ,进行DNA序列分析。结果与SEN病毒 (AX0 2 5 6 6 7)序列同源性分别为 87 7%、76 1%、88 2 %、72 7%和 78 8%。首次发现我国存在SEN病毒散发感染 ,并存在不同于SEN病毒 (AX0 2 5 6 6 7)的中国变异株 ,而且有同一患者存在两种变异株的复合感染
2002年01期 21-28页 [查看摘要][在线阅读][下载 198k] [下载次数：50 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 魏来,陈红松,陈勇,封波,丛旭,王宇
构建含有感染性克隆HCV非结构基因 5b区序列的酵母表达质粒 ,转化毕加酵母 ,获得持续、可溶性HCVRNA依赖的RNA聚合酶 (RdRp)的表达 ,纯化蛋白在SDS -PAGE及Westernblot中显示出特异性的 6 4 2kDHCVRdRp蛋白带 ,同聚引物 /模板测定显示RdRp的活性极低 ,延长反应时间 ,RNA聚合活性仅轻度升高。采用合成的杂聚互补引物 /模板 ,未发现核苷酸在毕加酵母表达的RdRp作用下掺入模板 ,随时间延长 ,杂聚互补引物 /模板降解。
2002年01期 29-33页 [查看摘要][在线阅读][下载 68k] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：3 ] - 黄燕萍,郭秀婵,何祖根,曾毅
建立含有EB病毒的T细胞淋巴瘤细胞系 ,为探讨EB病毒的致瘤机理 ,研究EB病毒在T细胞淋巴瘤发生过程中的作用提供手段。在TPA协同EB病毒诱导胸腺恶性T细胞淋巴瘤动物模型的基础上 ,联合应用IL - 2 ,将诱导的肿瘤组织进行体外细胞培养 ,成功地分离获得一株在体外长期存活的淋巴细胞TET。T细胞亚群分类实验证实TET细胞为CD4阳性的T淋巴细胞 ,PCR和原位杂交可检测到EB病毒的EBERs、LMP1和BARF1,并有LMP1蛋白的表达。TET细胞的获得 ,有望在体外建立转化细胞系 ,为体外研究EB病毒的致瘤机理及防治提供理想的实验材料。
2002年01期 34-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 92k] [下载次数：116 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 范行良,俞永新,李德富,姚智慧
分别对SA14 - 14- 2 (PHK8代 )疫苗株及其原野毒株SA14 和另 2个疫苗传代株 [SA14 - 14- 2 (PHK17代 )和SA14 - 14- 2 (鼠脑 1代 ) ]的E区基因进行了序列测定。结果表明 ,乙脑病毒减毒活疫苗SA14 - 14- 2在PHK细胞上连传至 17代时 ,发现 2个氨基酸突变 (E - 331、E - 398) ,但不是回复突变。虽然在毒力最容易返祖的乳鼠脑内传 1代后发生E - 10 7个氨基酸回复 ,但与野毒株毒力相比仍然相差很大 ,无毒力返祖现象。在疫苗的实际质控工作中 ,对上述与毒力相关的基因进行监测 ,可能有助于发现减毒活疫苗的毒力水平 ,为疫苗安全性提供更可靠的检测手段。
2002年01期 39-47页 [查看摘要][在线阅读][下载 277k] [下载次数：161 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：38 ] |[阅读次数：3 ] - 徐葛林,Li Ku,吴杰,C.A.De Mattos,郑新雄,薛经刚,胡巧玲,刘锦彦,朱家鸿,C.C.De Mattos,J S.Smith
测定了 30年来从不同动物中分离的 19个中国狂犬病病毒街毒株N基因的部分核酸序列 ,并对其核苷酸差异做了比较分析。可将中国狂犬病病毒街毒株分为 4个组群 ,各组间的同源性为 83 45 %～ 88 6 2 %。除广西地区分离的狂犬病病毒街毒株彼此差异较大外 ,其余街毒株的地理分布与其N基因核酸序列差异的距离是密切相关的 ,基本上可按其地理分布分为东、西二大组
2002年01期 48-51页 [查看摘要][在线阅读][下载 60k] [下载次数：321 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：87 ] |[阅读次数：3 ] - 郝晓萌,吴小兵,伍志坚,舒斯云,侯云德
白细胞介素 12 (IL - 12 )具有广谱抗肿瘤、抗感染的作用 ,是由两个亚单位 40kD(p40 )和 35kD(p35 )通过二硫键构成的杂合体 ,有可能通过分别表达亚单位的方式来表达有功能活性的IL - 12。该实验尝试利用重组腺伴随病毒 (rAAV)载体进行人IL - 12 (hIL - 12 )双亚基共表达 ,将hIL - 12的两个亚基分别克隆到AAV载体质粒pSNAV中 ,构建成 pSNAV -IL12 - p35和pSNAV -IL12 - p40质粒 ,经转染、G418筛选后建立了rAAV载体细胞株。采用先前建立的rAAV的生产方法 ,获得了rAAV -IL12 -p35和rAAV -IL12 - p40 ,在体外将两种rAAV共同感染BHK - 2 1细胞 ,48h后收集细胞培养上清进行免疫学和生物学活性检测。经ELISA检测 ,产生的hIL - 12 p70的含量为 10 185 pg/ml;在体外促进IFN -γ分泌实验中 ,加入hIL - 12的PBMC分泌的IFN -γ含量为 37 2mg/ml。实验结果说明 :采用两个AAV载体分别表达亚单位的方法可以表达具有功能活性的hIL - 12 ,为IL - 12的基因治疗提供了一条新的途径
2002年01期 52-56页 [查看摘要][在线阅读][下载 87k] [下载次数：128 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 赵军,段招军,王红艳,李武平,吕宏亮,魏开坤,孙立连,侯云德
为建立一种更简便、安全、有效的检测Ⅰ型干扰素 (IFN)的方法 ,将可被Ⅰ型IFN诱导的人 6 - 16基因启动子与表达产物容易被检测的 β -半乳糖苷酶基因相连 ,构建成重组质粒 ,然后转染人羊膜传代细胞系 ,筛选阳性克隆 ,最终建立了一种适用于检测Ⅰ型IFN的简便、快速、敏感、特异和重复性好的新型方法 ,其敏感性同标准的细胞病变抑制法相同。
2002年01期 57-60页 [查看摘要][在线阅读][下载 57k] [下载次数：138 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：4 ] - 刘岳龙,秦爱建,金文杰,叶建强,吉荣,崔治中,段玉友
将鸡贫血病毒 (CAV)VP1蛋白 44 9个氨基酸中的 42 4个氨基酸 (占 95 % )编码序列分二段 ,分别克隆入表达性载体 pGEX - 5X - 3,在大肠杆菌以GST融合蛋白的形式获得了高效表达。以表达产物免疫小鼠 4次 ,制备了抗CAV的多克隆抗体。通过对CAV感染的MSB1细胞做间接免疫荧光试验 (IFA) ,结果为阳性。这表明表达物保留了天然VP1相关的抗原性。用此抗CAV抗体和所建立的IFA方法对临床CAV凝似病料成功地进行了实验室诊断。
2002年01期 61-65页 [查看摘要][在线阅读][下载 74k] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：3 ] - 郑滔,陈炯,陈剑平
测定了莴苣花叶病毒 (LMV)浙江余杭分离物基因组全序列。此病毒分离物基因组由 10 0 80个核苷酸组成 ,具典型的马铃薯Y病毒科成员基因组结构 ,与已报道的欧洲、美国和巴西LMV核苷酸同源性为 96 7%～ 98 8% ,氨基酸同源性 97 8%～ 99 0 %。根据外壳蛋白氨基酸序列和 5′端非编码区核苷酸序列分析比较及分子进化树分析 ,可将全球LMV分为西欧 -加利福尼亚、希腊和也门 3个类群。LMV有可能起源于加利福尼亚州向西欧 ,进而向希腊和也门扩展 ,浙江余杭LMV有可能来源于加利福尼亚州和西欧
2002年01期 66-70页 [查看摘要][在线阅读][下载 59k] [下载次数：150 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：3 ] - 侯义龙,张开春,胡文玉,吴禄平,林珂,尹淑萍
为调查主要果树携带苹果褪绿叶斑病毒 (ACLSV)、苹果茎沟病毒 (ASGV)、苹果茎痘病毒 (ASPV)和李属坏死环斑病毒 (PNRSV)的情况 ,以指示植物为试材 ,优化了四种病毒的逆转录 -聚合酶链式反应 (RT—PCR)检测体系。使用该优化体系检测了苹果树、樱桃树、桃树中携带上述四种病毒的情况。结果 :建立了特异性强、灵敏度高、成本低的RT—PCR检测体系 ;同时又证明主要果树被这几种病毒单独感染和复合感染的程度均较高。
2002年01期 71-73页 [查看摘要][在线阅读][下载 37k] [下载次数：371 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：62 ] |[阅读次数：3 ] - 王小红,王升启,管伟,毛秉智2002年01期 74-76页 [查看摘要][在线阅读][下载 69k] [下载次数：29 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ]
- 朱俊萍,刘红,杨帆,杨国威,张笑冰,金奇2002年01期 77-79页 [查看摘要][在线阅读][下载 34k] [下载次数：100 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ]
- 郭霄峰,廖明,辛朝安,程小雯2002年01期 80-82页 [查看摘要][在线阅读][下载 25k] [下载次数：315 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：28 ] |[阅读次数：3 ]
- 张奇亚,肖枫,李正秋,桂建芳2002年01期 83-85页 [查看摘要][在线阅读][下载 46k] [下载次数：283 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：3 ]
- 方勤,朱作言2002年01期 86-88页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k] [下载次数：246 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：3 ]
- 陈大伟,谢鹏2002年01期 89-92页 [查看摘要][在线阅读][下载 53k] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ]
- 佟玉品,詹美云,毕胜利2002年01期 93-97页 [查看摘要][在线阅读][下载 61k] [下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ]
- 2002年01期 97页 [查看摘要][在线阅读][下载 5k] [下载次数：19 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ]
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