- 闻闫瀚;田婷婷;黄晓霞;刘铁柱;芜为;孙丽娜;李建东;李德新;梁米芳;李阿茜;王世文;
近年来，发热伴血小板减少综合征（Severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS）传播范围不断扩大，给公众健康构成严重威胁。目前，尚无特异性治疗药物或已上市疫苗，主要靠对症支持治疗。早期识别重症患者并实施有针对性的干预，往往是降低病死率的关键。我们将91例SFTS患者的急性期血清抗体、细胞因子和相关实验室指标联合分析，通过机器学习的方法，构建出多因素Logistic回归、随机森林、支持向量机和XGBoost四种早期患者轻重症分类模型。在变量筛选阶段，我们依次使用单因素Logistic回归，多重共线性诊断和LASSO回归筛选变量，得到IL-10、IFN-γ、IFN-α、IL-8、AST、IgM OD450、TP和LY%共8个建模变量。结果显示，在早期轻重症分类中表现最佳的是随机森林（AUC=0.889），接下来是多因素Logistic回归（AUC=0.822）以及XGBoost(AUC=0.811)，而表现相对较差的是支持向量机（AUC=0.744）。此外，我们借助多因素Logistic回归识别出IFN-γ、IL-8、IgM OD450和LY%四种SFTS重症化独立预测因子。随机森林和XGBoost的变量重要性分析均表明，IL-10可能是最重要的预测因子，且IFN-γ、IL-8和AST也有较高的重要性。本研究基于血清学指标与机器学习方法开展SFTS患者轻重症分类模型的研究，为SFTS早期风险评估提供了新思路。
2025年03期 v.41 702-712页 [查看摘要][在线阅读][下载 1566K]
[下载次数：193 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 舒畅;李梦哲;翟程程;赵志敏;单徐畅;邴佳洛;祁振勇;邓瑶;翟德胜;谭文杰;
构建西尼罗病毒（West nile virus,WNV）与基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）的新型双价重组DNA疫苗并在小鼠中评价其免疫原性。本研究以WNV的prM-E蛋白和CHIKV的C-E3-E2-6K-E1或E3-E2-6K-E1蛋白为靶抗原，构建了WNV和CHIKV双价重组DNA疫苗VRC-PrME-2A-CE和VRC-PrME-2A-E。转染HEK293T细胞后通过Western blot验证目的蛋白的表达。两剂次同源免疫小鼠，通过ELISA和Elispot进行体液与细胞免疫检测，并与表达WNV-XJ11129-3株的prM-E蛋白的WNV单价DNA疫苗VRC-prME和表达CHIKV 181/clone25的C-E3-E2-6K-E1蛋白的CHIKV单价DNA疫苗VRC-CE进行比较。结果显示，双价DNA疫苗构建成功。重组双价DNA疫苗单剂或加强免疫小鼠后均能诱导较高水平抗原特异性IgG，且与单价疫苗滴度相当。细胞免疫检测结果显示：加强免疫后VRC-PrME-2A-CE表现出针对CHIKV E1和CHIKV E2最高的分泌IFN-γ的T细胞水平，但与单价疫苗VRC-CE无统计学差异。本研究成功构建两款针对WNV和CHIKV的双价DNA疫苗，免疫小鼠后可以诱导产生良好的体液和细胞免疫应答，本研究为新型WNV和CHIKV双价基因工程疫苗的研发应用提供了实验参考。
2025年03期 v.41 713-724页 [查看摘要][在线阅读][下载 1606K]
[下载次数：55 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王远;梁冬林;张卫卫;高利萍;肖康;董小平;石琦;
朊病毒病是由朊病毒蛋白异常折叠并沉积于脑组织引发的神经退行性疾病，其病理特征包括海绵状空泡样变性，神经元丢失和胶质细胞增生等，导致快速进展性痴呆、肌阵挛和无动性缄默等。本研究利用动物和细胞模型，通过Western Blot和免疫组化等方法，发现朊病毒感染显著降低了紧密连接蛋白Claudin-5和ZO-1的表达，表明血脑屏障（Blood-brain barrier, BBB）结构受损。进一步研究显示，益生菌（丁酸梭菌和婴儿双歧杆菌）及其代谢产物短链脂肪酸（Short-chain fatty acids, SCFAs）处理可显著增加感染仓鼠脑组织中Claudin-5和ZO-1的表达，改善BBB损伤。利用免疫组织荧光法揭示Claudin-5和ZO-1主要表达于神经元，提示神经元在维持BBB功能中可能起关键作用。本研究旨在通过探究朊病毒感染所致血脑屏障损伤及益生菌及SCFAs对BBB的保护效应，揭示了朊病毒感染导致的BBB损伤机制，同时也为益生菌和SCFAs在神经退行性疾病治疗中的应用提供理论依据。
2025年03期 v.41 725-732页 [查看摘要][在线阅读][下载 1681K]
[下载次数：74 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王萌萌;纪峰;刘尧;林小娟;徐爱强;陶泽新;
环境污水监测是掌握脊髓灰质炎（简称脊灰）病毒（Poliovirus, PV）在人群流行或携带状态的重要手段。为了解脊灰疫苗实施序贯免疫策略后山东省PV循环及遗传变异特征，我们于2019-2024年在山东省3个监测哨点开展环境污水PV监测，按月采集污水标本，浓缩后接种细胞进行病毒分离，提取分离物核酸后进行VP1完整编码区的RT-PCR扩增、Sanger测序和系统发生分析。共采集205份污水样本，收获208株PV，均为疫苗相关株，无PV2型病毒或疫苗衍生PV病毒（VDPV）。PV1型73株（占35.1%），与Sabin株相比VP1区核苷酸变异个数≤4，其中变异数为1个的毒株最多，占43.8%;PV3型135株（占64.9%）,VP1区变异个数≤8，其中变异数为0个的毒株最多，占50.4%。共发现5株高变异株病毒，均为PV3型。PV1型VP1区nt-268位点A-T变异（35/73）和nt-270位点A-G变异（13/73）是变异最频繁的位点，两者联合导致65.8%(48/73)毒株在该位点发生I-M或I-L氨基酸变异。系统发生分析显示来自不同污水样本的变异数≥3的分离株没有聚集。本研究丰富了人群中存在的疫苗株PV的遗传变异特征，证实了序贯免疫策略实施后疫苗株PV仍存在发生变异和传播的风险，需进一步加强其监测和相关研究。
2025年03期 v.41 733-740页 [查看摘要][在线阅读][下载 1517K]
[下载次数：55 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 贺小月;楚菡;傅亦娴;赵钰萍;廖婧杉;杨净思;赵婷;
新型脊髓灰质炎（脊灰）疫苗的构建和病毒减毒机制的探索需要建立脊灰病毒的反向遗传学操作平台。本研究以p GEM T-easy为载体构建Sabin株I型全长c DNA感染性克隆质粒。经体外转录为RNA后转染至Vero细胞进行病毒拯救，48h后观察到明显的细胞病变效应，获得Sabin株I型拯救病毒，并对拯救病毒的各项生物学特征进行观察和验证。拯救病毒的中和活性与Sabin株I型母株相同，病毒感染性滴度为1×10~(9 )TCID_(50)/m L，保留了在Vero细胞中复制的特性，与母株相比具有相似的生长曲线，在12～36 h病毒呈指数增长，在36 h复制达到最高峰。透射电子显微镜检测Sabin株I型拯救病毒，可见20～30 nm二十面体病毒颗粒。本研究成功构建脊灰Sabin株I型全长感染性克隆载体，获得脊灰Sabin株I型拯救病毒，为进一步研究脊灰病毒的致病机制及新型疫苗的研发提供了技术平台。
2025年03期 v.41 741-748页 [查看摘要][在线阅读][下载 1482K]
[下载次数：149 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 李昊洋;张风梅;刘莉;刘会荣;杨舒然;
本研究的目的是探究黄芩素拮抗单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus 1,HSV-1）诱导的角膜新生血管生成的功能和机制。将人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）随机分为阴性对照（Mock）组、HSV-1组、黄芩素低剂量（25μmol·L~(-1)）组、黄芩素高剂量（100μmol·L~(-1)）组，除对照组外的其余各组细胞均用感染复数（MOI）为1的HSV-1感染24h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8）法评估不同剂量（12.5、25、50、100μmol·L~(-1)）黄芩素处理或不同滴度（0.1、1、10 MOI)HSV-1感染24h后的细胞毒性反应，并检测12.5、25、50、100μmol·L~(-1)黄芩素处理24h后对HSV-1诱导的HUVECs活力的影响。采用Transwell实验检测各组HUVECs的迁移；逆转录定量PCR(RT-q PCR）用于检测各组HUVECs中血管内皮生长因子A(VEGFA）、血小板-内皮细胞黏附分子1(PECAM1/CD31）、白细胞介素-17A(IL-17A）的m RNA表达水平。采用分子对接分析验证黄芩素与IL-17A蛋白之间的结合活性。本实验结果显示，与Mock组相比，黄芩素处理组的HUVECs活力未见显著变化；而HSV-1感染组的HUVECs活力和迁移显著增强，VEGFA、CD31和IL-17的m RNA表达显著上调。与HSV-1组相比，黄芩素低剂量和高剂量干预处理均抑制了HSV-1诱导的HUVECs活力和迁移，并降低了VEGFA、CD31和IL-17的m RNA表达。此外，分子对接分析表明，黄芩素能够与IL-17A蛋白稳定结合，结合亲和力=-7.0 kcal·mol~(-1)。总的来说，我们的研究表明，黄芩素通过靶向抑制IL-17A通路抑制HSV-1诱导的HUVECs血管形成。
2025年03期 v.41 749-756页 [查看摘要][在线阅读][下载 1693K]
[下载次数：78 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张娜;许晓诺;张明慧;于鹏程;刘淑清;刘茜;陶晓燕;朱武洋;
本研究采用描述性流行病学方法对2019-2023年中国狂犬病的发病趋势和流行特征进行分析，以了解狂犬病近年的流行形势和防控效果，为防控政策的调整提供科学依据。结果显示，2019-2023年，我国狂犬病疫情持续下降，累计报告病例902例，实验室诊断率22.06%，临床诊断率77.94%。疫情波及范围由2019年的21省222县（区）缩小至2023年的17省101县（区），报告病例数低于10例的省份由2019年的20省增加到2023年的28省，高发县（区）主要分布在湖南西南部、河南南部和安徽西部地区。病例分布呈现“三多”的特征：农村地区病例较多，农民占病例总数的71.2%；男性病例数约为女性的2倍；65岁以上人群发病占比呈上升趋势，2022年高达44.36%。5年全国共上报3起一犬伤多人事件，远低于实际发生数。研究结果提示，我国狂犬病防控需加强实验室诊断能力，增强监测力度，系统化推进狂犬病的消除进程。
2025年03期 v.41 757-764页 [查看摘要][在线阅读][下载 1484K]
[下载次数：220 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 周萍;何啸兰;王寒冰;彭媛;
巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）胎盘感染是胎儿畸形的主要非遗传原因。本研究旨在探讨病毒五聚体复合物gH/gL/pUL128-pUL131A和细胞血小板衍生生长因子受体-α(Platelet-derived growth factor receptor-α,PDGFRα)在妊娠前三个月体外衍生（SGHPL-4）和绒毛衍生（HTR-8/SVneo）滋养细胞中感染CMV的作用。通过采用四种CMV临床和实验室毒株（Merlin、TB40E、Towne、AD169）以及UL128-、UL130-和UL131A-基因的Merlin缺失突变体感染后发现，滋养层细胞的感染对病毒五聚体复合物的要求取决于细胞类型。病毒五聚体复合物对于绒毛滋养层细胞的感染是必不可少的，但对于绒毛外滋养层细胞则不是必需的。在自然表达PDGFRα的绒毛外滋养细胞中阻断PDGFRα可抑制五聚体复合体缺乏的CMV株的进入，但不能抑制五聚体阳性CMV株的进入。在天然缺乏PDGFRα的绒毛滋养细胞中瞬时表达PDGFRα，可促进缺乏gH/gL/pUL128-pUL131A的CMV毒株的进入，但对五聚体阳性CMV毒株的进入没有影响。这表明，PDGFRα是缺乏gH/gL/pUL128-pUL131A复合物的CMV突变株进入某些胎盘细胞的重要细胞受体，这些进入途径可能是潜在的抗病毒靶点。
2025年03期 v.41 765-774页 [查看摘要][在线阅读][下载 1584K]
[下载次数：29 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 唐晶;温秀梅;郝桂锋;
探究卡瑞利珠单抗（Camrelizumab,Cam）联合富马酸替诺福韦二吡呋酯（Tenofovir disoproxil fumarate,TDF）系统治疗乙型肝炎病毒相关性肝细胞癌（HBV-HCC）的临床疗效及安全性。纳入2019年1月至2022年12月就诊于我院的HBV-HCC患者255例，根据不同治疗方法分为TDF组125例，Cam+TDF组130例。治疗3个疗程后，Cam+TDF组客观缓解率（ORR)(68.46%）高于TDF组（44.00%)(P<0.05);Cam+TDF组疾病控制率（DCR)(86.15%）高于TDF组（73.60%)(P<0.05）。利用Log-rank检验比较两组无进展生存期（PFS）和总生存期（OS），差异均有统计学意义（P<0.05）。Cam+TDF组癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、异常凝血酶原Ⅱ（PIVKA-Ⅱ）、α-L-岩藻糖苷酶（AFU）、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBs Ag）、CD8~+、血管生成素-2(Ang-2）、CMIA法测定肝细胞生长因子（HGF）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）水平均低于TDF组（P<0.05);Cam+TDF组CD4~+、CD4~+/CD8~+水平高于TDF组（P<0.05）。Cam+TDF组反应性皮肤毛细血管增生症发生率（66.92%）显著高于TDF组（0%)(P<0.05）。Cam联合TDF治疗HBV-HCC疗效显著，可增强机体免疫功能并抑制病毒复制和肿瘤生长，有效改善患者肝功能，延长患者生存时间，药物安全性较高。
2025年03期 v.41 775-783页 [查看摘要][在线阅读][下载 1388K]
[下载次数：183 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 郝彦哲;马琦;杨靖;李红霞;张晓光;何小周;冯霞;
在前期研究中，我们构建了表达HIV-1 AEgp145的多种载体疫苗，包括质粒p VR、5型35型嵌合型腺病毒载体（Ad5F35）及修饰的痘苗病毒安卡拉株载体（MVA），在小鼠体内单独免疫两次或多种疫苗联合均显示良好的免疫原性。本研究主要探讨上述疫苗单独及与表达HIV-1 gag基因的Ad5-HIVgag疫苗联合单次免疫的效果。首先对上述疫苗进行了验证，三种疫苗分别单次免疫小鼠，另设Ad5F35-AEgp145及r MVA-AEgp145分别与Ad5-HIVgag同时免疫。结果显示，免疫后2周各疫苗组AEgp145特异性细胞免疫反应均达峰值，以Ad5F35-AEgp145组及Ad5F35-AEgp145联合Ad5-HIVgag组最强，显著高于其他组，在免疫后24周仍维持较高水平。这两个实验组在免疫后2周HIV-1 gp120特异性结合抗体可被检出，之后一直维持在较高的水平；并于4～16周检测到AE亚型中和抗体，其他疫苗组抗体水平较低或检测不出。以上结果提示，Ad5F35-AEgp145单独或与Ad5-HIVgag联合单次免疫能在小鼠体内诱导强而持久的特异性细胞和体液免疫应答。
2025年03期 v.41 784-791页 [查看摘要][在线阅读][下载 1494K]
[下载次数：59 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 周颖;董廷;高阳;吕启航;马妍;周梦莹;张晓龙;顾潮江;
获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）是一种由人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）引起的，可造成免疫系统衰竭的高致命性的传染病。尽管高效抗逆转录病毒疗法（Highly active antiretroviral therapy,HAART）可以最大限度地抑制病毒的复制，但由于不能清除CD4~+T细胞中的HIV潜伏病毒库，因此患者需要终身服药。近年来，广谱抗HIV中和抗体在HIV-1感染的阻断及临床免疫治疗中效果显著，然而，抗体治疗仍面临一些局限性，例如无法有效通过血脑屏障等生物屏障、长期使用可能导致免疫抑制，以及半衰期较短。外泌体作为新兴的药物递送系统，具有低免疫原性、能够跨越生物屏障、靶向能力广泛且精准并能够在体内持续释放治疗分子等优势，近年来迅速成为研究热点。本研究发现瞬时转染HIV广谱中和抗体质粒的HEK293F细胞表达并分泌抗体的同时，也会产生嵌合广谱中和抗体的外泌体，接着探究广谱中和抗体在外泌体上的含量并通过BLI验证与HIV-1 gp120抗原蛋白的亲和力，随后测定携带cop GFP报告基因的HIV假病毒滴度，并与抗体外泌体孵育后再感染TZM-bl细胞，通过荧光强度定量及萤光素酶活性定量分析计算出抗体外泌体的中和活力大小。结果表明，HIV广谱中和抗体成功嵌合到HEK293F细胞分泌的外泌体上，进一步研究发现，VRC-EXO对国内流行的CRF-07BC毒株的gp120抗原蛋白具有较高的亲和力，同时，相同质量抗体条件下，外泌体携带的抗体对NL4-3和Q23假病毒毒株的中和活力比游离状态的抗体高2.3～3.2倍。本研究成功构建了嵌合HIV广谱中和抗体外泌体系统，相较于传统抗体疗法，该平台在靶向递送、免疫原性、跨生物屏障能力以及治疗效果的广泛性等方面均展现出更大的优势，为HIV治疗提供了新的思路和潜在的治疗方案。
2025年03期 v.41 792-805页 [查看摘要][在线阅读][下载 1917K]
[下载次数：63 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王好;庞吉;李帼瑞;钱海;
巨细胞病毒（Cytomegalovirus,CMV）感染可引起心肌细胞损伤，但相关机制尚不清楚。CMV感染引起神经元损伤与激活活性氧（ROS）/Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径有关。为分析ROS/NLRP3介导的炎症小体激活在MCMV感染致心肌细胞损伤中的作用，本研究以乳鼠原代心肌细胞为研究对象，对照组用无药物和病毒的培养基进行处理，MCMV组单独感染CMV,N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine,NAC）组用含有NAC的培养基进行处理，MCMV+NAC组使用MCMV感染并用含有NAC的培养基进行处理。处理24h后，检测细胞活力与凋亡率，检测培养基中乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白细胞介素（IL）-1β、IL-18与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量，检测细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1与Caspase-3的mRNA转录水平及GSDMD-N蛋白表达水平。结果显示，MCMV组细胞活力低于对照组；凋亡率，培养基中LDH、CK-MB、IL-1β、IL-18与TNF-α含量，细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1与Caspase-3的mRNA转录水平及GSDMD-N的蛋白表达水平均高于对照组（P<0.05）。MCMV+NAC组细胞活力高于MCMV组、低于NAC组；凋亡率，培养基中LDH、CK-MB、IL-1β、IL-18与TNF-α含量，细胞中NLRP3、ASC、Caspase-1与Caspase-3的mRNA转录水平及GSDMD-N的蛋白表达水平均低于MCMV组、高于NAC组（P<0.05）。上述结果表明，CMV感染引起心肌细胞损伤，这一损伤作用与激活ROS/NLRP3介导的炎症小体有关。
2025年03期 v.41 806-812页 [查看摘要][在线阅读][下载 1303K]
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- 李晨雨;马琦;王冰丹;王菲;冯霞;张晓光;李红霞;马晶;郝彦哲;李淑英;
本研究开发了一种高效且精准的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）中和抗体效价检测新方法。通过同源重组和CRISPR-Cas9技术，将桡足纲绿色荧光蛋白（copepod Pontellina plumata Green Fluorescent Protein,copGFP）基因表达盒精确嵌入PRV基因组的UL40/41区域，经过多轮筛选与纯化，成功构建了重组病毒PRV-copGFP。生长特性对比实验表明，PRV-copGFP与野生型PRV-Bartha之间无显著差异（P>0.05）。借助CTL-ImmunoSpot?S6仪器计数表达copGFP的细胞数目，确定了最佳观测时间和最佳病毒滴度。该方法可精确计算中和抗体效价，并通过传统噬斑减少中和试验（Plaque reduction neutralization test, PRNT）进行验证。与传统方法相比，本检测方法将检测窗口缩短至10h，且通量显著提升。本方法在快速评估PRV中和抗体效价方面具有显著优势，可为PRV疫苗研发、疾病防控及相关研究提供有力的技术支持。
2025年03期 v.41 825-834页 [查看摘要][在线阅读][下载 1685K]
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猪δ冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）是一种新兴的肠道致病性冠状病毒，已在全球至少20个国家检出，对家猪具有高致病性，给猪养殖业造成了一定经济损失。PDCoV的刺突蛋白（S蛋白）是病毒入侵宿主细胞的关键分子，也是疫苗设计和抗体药物开发的重要靶点。鉴于S蛋白编码基因具有较高的进化速率，且PDCoV在中国猪群中持续流行，本研究检索了中国PDCoV序列，探索了时间尺度下密码子使用偏好及宿主适应性的动态变化，分析了自然选择、突变压力在病毒适应性进化中的作用。研究发现PDCoV S基因有效密码子数随着年份增加呈现出上升趋势（P<0.001），在持续进化过程中逐渐扩展了密码子多样性，降低了密码子使用偏好的强度。密码子使用偏好影响因素分析发现二核苷酸CpG频率较低（与降低宿主免疫反应相关），这可能通过核酸组成间接影响密码子的偏好性。相比于突变压力，自然选择对密码子使用偏好的影响占据主导地位。通过表征病毒及宿主的密码子偏好性，发现降低GGU、GUU、UCU、CUU、ACU等密码子的使用频率，增加其同义密码子频率可能有利于抗原表达，这可以为诊断试剂和疫苗的开发及优化提供一定线索。选择分析鉴定到了5个正向选择位点，其中3个位于S1亚基的N末端结构域，1个位于S1/S2切割区末端，另外1个位于七肽重复序列2附近，这些突变可能影响病毒的受体结合能力及膜融合过程。
2025年03期 v.41 835-844页 [查看摘要][在线阅读][下载 1771K]
[下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 陈星宇;姜雅倩;宋春丽;宋臣阳;王晴;
∶本研究在鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus, DTMUV）诱导小鼠神经母细胞瘤细胞（Neuro-2a）不完全自噬促进病毒复制的基础上，鉴定诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白，探究病毒非结构蛋白NS1、NS3在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。用载体pCMV14-Flag构建DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒，分别将其转染至Neuro-2a细胞，Western blot检测病毒蛋白和自噬标志性蛋白的表达，明确诱导Neuro-2a细胞自噬的病毒蛋白，并通过透射电镜、激光共聚焦、Western blot等方法进一步验证以上病毒蛋白在诱导Neuro-2a细胞不完全自噬中的作用。结果显示，本研究成功构建了DTMUV十个编码蛋白基因的真核表达质粒，且能够在Neuro-2a细胞中正常表达；非结构蛋白NS1和NS3能显著增加LC3-Ⅱ和P62蛋白水平，促进Neuro-2a细胞中自噬体形成，诱导Neuro-2a细胞发生不完全自噬，且NS1和NS3蛋白诱导的Neuro-2a细胞不完全自噬具有剂量和时间依赖性。综上所述，本研究证实DTMUV非结构蛋白NS1、NS3是诱导Neuro-2a细胞不完全自噬的关键蛋白，为进一步研究DTMUV的致病机制奠定基础。
2025年03期 v.41 845-855页 [查看摘要][在线阅读][下载 2088K]
[下载次数：190 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 石鑫泰;朱昱茜;石正旺;罗俊聪;席韬;张帆;何印娣;李帅鹏;郑海学;田宏;
本研究旨在开发一种用于检测南非2型口蹄疫病毒（Foot-and-mouth sisease virus south African territory 2,FMDV-SAT2）抗体的简便、迅速、高特异性和灵敏性的胶体金免疫层析方法。该方法利用胶体金颗粒标记的VP1蛋白作为标记抗原，并在硝酸纤维素膜上固定VP1蛋白及其单克隆抗体（Monoclonal antibody,m Ab），分别形成检测线（T线）和质量控制线（C线）。通过一系列优化试验，胶体金标记VP1蛋白的最适p H、标记量分别为8.0和24μg/m L,C线的喷膜浓度为1.5 mg/m L,T线的喷膜浓度为0.2 mg/m L，可在12～15 min内完成检测，用于检测FMDV-SAT2抗体。结果显示，研制的胶体金试纸条与塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）、O型口蹄疫病毒（FMDV-O）、A型口蹄疫病毒（FMDV-A）的灭活血清以及南非1型口蹄疫病毒（FMDV-SAT1）、南非3型口蹄疫病毒（FMDV-SAT3)VP1蛋白免疫的兔血清均无交叉反应；与南非2型口蹄疫病毒VP1蛋白（FMDV-SAT2-VP1）免疫的兔血清的反应灵敏度可达1∶64；对110份FMDV-O型和50份FMDV-A型阳性猪血清样品进行检测，所有检测结果均显示为阴性；该试纸条在室温（18℃～25℃）和冷藏（4℃）环境下可分别保持稳定6个月和9个月。结果表明，本研究研发的胶体金免疫层析试纸条展现出高度的灵敏性和特异性，同时具备检测快速、操作便捷、结果直观等特点，对FMDV-SAT2的现场检测具有实际应用价值。
2025年03期 v.41 856-867页 [查看摘要][在线阅读][下载 1623K]
[下载次数：259 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 各思雨;樊剑鸣;滕蔓;郑鹿平;刘金玲;韩放;张卓;张多;罗琴;赵东;柴书军;罗俊;
马立克病（Marek’s disease,MD）是由马立克病病毒（Marek’s disease virus,MDV）感染引起的一种危害严重的家禽免疫抑制病与肿瘤病，给全球养殖业造成巨大经济损失。尽管MD疫苗免疫对该病具有显著防控效果，但长期的免疫压力不断促进MDV毒力增强及变异。近年来，新出现的MDV特超强毒株（Very virulent plus MDV,vv+MDV）和特超强MDV(Hypervirulent MDV,HV-MDV)变异株已突破经典MD疫苗的免疫保护，亟需研发新一代高效疫苗。本文以2021年分离鉴定的HV-MDV变异株HNXZ05为研究对象，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，成功构建了一株meq基因编辑缺失的疫苗候选毒株XZ05Δmeq。经PCR鉴定、DNA测序分析、间接免疫荧光实验（IFA）、实时荧光定量PCR(qPCR)以及连续传代分析，证实该毒株的meq基因已被完全编辑缺失、稳定传代后无回复突变。动物免疫保护评价实验显示，用候选疫苗株XZ05Δmeq免疫SPF鸡，对HV-MDV变异株HNSQ01的攻击可提供82.4%的免疫保护；与阴性对照组相比，免疫攻毒组实验鸡的体重及免疫器官指数均未受到显著影响。上述数据表明，XZ05Δmeq可作为MD疫苗候选毒株，用于进一步开发新型高效的MD疫苗，以应对当前鸡群HV-MDV变异株流行带来的防控新挑战。
2025年03期 v.41 868-879页 [查看摘要][在线阅读][下载 1864K]
[下载次数：353 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 万偲佳;黄文吉;邵玲;
鲤春病毒血症是由鲤春病毒血症病毒（Spring viremia of carp virus, SVCV）引起的一种急性出血性传染病，可导致多种鲤科鱼类发生暴发性出血症，严重危害渔业生产。目前，针对SVCV尚缺乏有效的治疗措施。中草药及其提取物可以有效抑制多种病毒的复制，对环境友好且不易产生耐药性。本研究选取了黄芪甲苷、甘草酸及盐酸小檗碱3种中草药提取物进行抗SVCV活性研究，并评价了盐酸小檗碱对感染前预防给药、感染过程中的联合给药及感染后治疗给药条件下对SVCV复制的影响。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测了盐酸小檗碱作用后对宿主免疫基因表达的影响。结果表明，中草药提取物黄芪甲苷、甘草酸和盐酸小檗碱能显著降低SVCV G基因和N基因的表达，其中盐酸小檗碱抑制效果最为显著。3种给药方式中，联合给药方式抑制SVCV感染效果最佳。此外，盐酸小檗碱处理细胞后，增加了免疫相关基因irf3、irf7、viperin和ifn的转录水平，推测盐酸小檗碱可激活宿主抗病毒免疫反应。本研究为防治SVCV中草药的开发提供了实验依据，并为水生病毒性疾病的防控提供了新的思路。
2025年03期 v.41 880-888页 [查看摘要][在线阅读][下载 1688K]
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- 杨馥荧;冯晔囡;陈操;
新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）（简称新冠病毒）全球大流行期间，通过不断积累有利于自身传播和免疫逃逸的突变而持续进化，导致其在全球范围内持续流行。世界卫生组织（World Health Organization, WHO）根据潜在的公共卫生风险程度，将新冠病毒变异株划分为关切变异株（Variantof concern,VOC）、关注变异株（Variant of interest, VOI）以及监测中的变异株（Variant under monitoring, VUM）三类。WHO在12月2日更新数据表明，当前重点监测的1种VOI和6种VUMs均源自BA.2.86进化分支。本文旨在对当前全球新冠病毒主要流行株的变异变迁最新研究进展进行综述，以期为未来新冠病毒变异株的监测预警工作提供数据支撑。
2025年03期 v.41 889-900页 [查看摘要][在线阅读][下载 1465K]
[下载次数：299 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 韩谢瑜;倪诗晨;蒋凯怡;邬春秀;金志刚;
新型冠状病毒（Severe acute respiratory syndromes coronavirus 2, SARS-CoV-2）引发的新型冠状病毒肺炎（Coronavirus disease 2019, COVID-19）疫情对全球公众健康造成了巨大危害，能有效防治COVID-19的抗病毒药物仍在探索中。核衣壳（Nucleocapsid, N）蛋白是SARS-CoV-2的关键结构蛋白，通过与病毒基因组RNA和其他结构蛋白结合后组装成病毒颗粒，保护病毒基因组进而促进病毒复制和传播。此外，N蛋白还作为调节蛋白在维持病毒生命周期以及干扰宿主天然免疫反应和应激颗粒组装等方面发挥重要作用。因此，靶向N蛋白的抗病毒策略近年来受到了SARS-CoV-2抗病毒药物研究的广泛关注，如靶向N蛋白的RNA结合域、翻译后修饰以及液相分离等。此外，N蛋白在不同SARS-CoV-2变异株中突变率低，其结构和功能在多种感染人的冠状病毒中也相对保守。因此，靶向SARS-CoV-2 N蛋白的抗病毒药物可能对多种人冠状病毒及其变异株均能发挥作用。本文主要就近年来靶向SARS-CoV-2 N蛋白抗病毒药物的研究进展作一概述与探讨。
2025年03期 v.41 901-914页 [查看摘要][在线阅读][下载 1542K]
[下载次数：172 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蓝林晨;刘晓辉;卢姣汐;朱林峰;张诗奇;吴婷;
呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus,RSV）感染是引起婴幼儿和老年人下呼吸道疾病的重要原因，在全球范围内造成沉重的疾病负担。疫苗接种是控制RSV传播和减轻相关疾病负担的关键策略。全球目前已有三种基于RSV融合前构象F蛋白（Pre-fusion, Pre-F）研发的RSV疫苗获批上市，可为不同人群提供安全有效的主动免疫保护。本文从有效性、安全性和免疫原性三个方面对已上市的RSV疫苗进行综述，并对疫苗的长期保护效力、安全性评价和适用人群范围扩展等方面进行讨论，旨在为下一步RSV疫苗研究和应用提供参考。
2025年03期 v.41 915-922页 [查看摘要][在线阅读][下载 1333K]
[下载次数：208 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 张亚琴;李鑫鑫;张子昱;王诗雨;邓雯;曹卫华;张璐;谢尧;李明慧;
发热伴血小板减少综合征（Severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS）是一种由大别班达病毒（Dabie Banda virus,DBV）引起的新发传染病。DBV是一种蜱传播的病毒，主要发生在中国、韩国和日本，死亡率在5%~30%之间。SFTS的主要临床特征包括发热、血小板减少症、白细胞减少症、胃肠道症状、神经系统症状以及多器官功能障碍等。目前，还没有有效药物和疫苗被批准用于DBV的治疗和预防，需要对宿主和DBV之间的免疫作用机制进行全面的了解，制定该疾病治疗的新策略。本文综述了DBV感染后宿主与病毒的相互作用机制，包括宿主的抗病毒免疫反应（如干扰素、细胞焦亡）和病毒的免疫逃逸策略（如抑制干扰素信号通路、促进自噬、调节代谢）。深入理解这些机制对开发SFTS的治疗策略具有重要意义。
2025年03期 v.41 923-935页 [查看摘要][在线阅读][下载 1497K]
[下载次数：163 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 王伟;程书书;朱婷婷;
宫颈癌与人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）联系紧密，持续感染高危HPV是宫颈癌的主要诱因。表观遗传的重要修饰方式DNA甲基化在基因转录中发挥关键作用，基因甲基化水平异常与细胞癌变联系紧密。甲基化可表现在宿主细胞基因中，亦可表现在HPV病毒基因中，两者相互影响，在癌变进程中起着关键作用。本文总结了HPV基因甲基化改变，综述了宿主基因甲基化及与HPV基因甲基化关联，有助于进一步探讨宫颈癌的治疗新思路。
2025年03期 v.41 936-941页 [查看摘要][在线阅读][下载 1283K]
[下载次数：194 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 蒲丹;江可容;潘永圣;徐宏忍;龚夏琼;尹利民;
BK多瘤病毒（BK Polyomavirus,BKPyV或BKV）通常是潜伏感染，因免疫抑制而被激活，激活的BKV主要导致BK病毒相关性肾病。过去几十年来，对其分子理解取得了巨大进展，流行病学也得到了广泛的研究。根据其血清学及基因组特征，可分为BKV I~BKV IV四种基因型，基于病毒结构蛋白基因的核苷酸差异，使用生物信息学技术构建系统发育树可进一步划分为亚型。目前用于病毒基因分型的核酸区域并不统一，且关于肾移植术后BKV不同基因型感染临床进展研究结论存在差异。因此，本文将近年来国内外关于BKV基因型研究的文章进行综述，以便更好地了解世界范围内BKV基因型分布，为肾移植术后BKV不同基因型感染疾病发展的深入探索提供依据。
2025年03期 v.41 942-949页 [查看摘要][在线阅读][下载 1321K]
[下载次数：119 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 敬琳琳;杨桢;邓绍东;杨小丽;
病毒性角膜内皮炎是一种眼部疾病，可致盲，复发性高，症状多样，诱因复杂，有多种致病病毒，间接免疫荧光法、聚合酶链式反应等可给予辅助诊断，但仍存在误诊可能，抗病毒联合糖皮质激素是常见治疗方法。本文总结了病毒性角膜内皮炎的诱因、症状、诊断、治疗等，有助于进一步探讨病毒性角膜内皮炎治疗的新方法。
2025年03期 v.41 950-955页 [查看摘要][在线阅读][下载 1282K]
[下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 邱洁;汪铭书;程安春;
本综述系统论述了α疱疹病毒US4基因编码的糖蛋白gG的特点及其在病毒感染、毒力、神经侵袭、趋化因子结合与天然免疫调控中的功能，分析了gG在调节趋化因子活性、影响神经信号传导等方面的机制及其在疫苗研发和诊断中的应用潜力，为进一步探索人类和动物α疱疹病毒US4基因的功能及其防控策略提供一定参考。
2025年03期 v.41 956-964页 [查看摘要][在线阅读][下载 1350K]
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深度突变扫描（Deep mutational scanning,DMS）是近年发展的一种高通量的评估病毒变异风险的前沿生物技术方法。DMS通过人工突变产生海量的病毒变异体模拟病毒潜在的变异，同时测定变异体的重要表型如受体结合亲和力、免疫逃逸、适应性和耐药性等，评估变异对表型的影响及其风险。DMS需要综合运用病毒突变文库构建、病毒表型测定和深度测序等多种高通量平台，对于平台技术的要求极高。新冠病毒疫情期间，DMS被广泛应用于评估病毒变异对受体结合力和免疫逃逸等表型的影响，全方位地展示了其在表型预测和变异风险评估中的重要作用。本文对DMS在新冠病毒、肠道病毒、流感病毒和HIV等代表性RNA病毒研究中的应用进行综述，帮助认识DMS在RNA病毒变异风险评估中的广阔应用前景。
2025年03期 v.41 965-977页 [查看摘要][在线阅读][下载 1365K]
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