- 杨洪江，张桦，林书祥，牛艾茹
用ＰＣＲ检测临床血标本中人类细小病毒Ｂ１９ ＤＮＡ杨洪江，张桦，林书祥，牛艾茹（天津市儿童医院儿研所，天津３０００７４）关键词聚合酶链反应（ＰＣＲ），人类细小病毒Ｂ１９几种人类细小病毒中，只有Ｂ１９病毒是人类的病原体。由于该病毒不能在体外繁殖，获得该...
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 147k] [下载次数：72 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：355 ] - 皮国华，邓瑶，刘加，王慧娟，张素香
快速ＥＬＩＳＡ的建立和应用皮国华，邓瑶，刘加，王慧娟，张素香（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词快速ＥＬＩＳＡ，抗－重组甲肝病毒单克隆抗体，抗－ＨＢｓ单克隆抗体１９７２年Ｅｎｇｖａｌｌ等人发展了酶联免疫吸附试验（Ｅｎｚｙｍｅ－ｌ...
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 105k] [下载次数：86 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：300 ] - 邱建明，宋干，杭长寿，张全福，霍子威，桃树元
比较了汉滩病毒Ａ９株强毒克隆病毒与弱毒克隆病毒在体外培养、诱导中和抗体能力，以及单克隆抗体（单抗）反应谱等方面的差异。发现最为明显的区别在于弱毒克隆病毒对小鼠腹腔巨噬细胞及人外周血单核细胞敏感性降低，在Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞上繁殖缓慢，空斑形成需较长时间，且斑小。但强、弱毒克隆病毒的致细胞融合活性，刺激ＣＴＬｓ应答活性，以及时Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞的吸附速率与穿透力均无明显差别。经温度敏感（ｔｓ）试验及缺损干扰（ＤＩ）颗粒检测，表明弱毒克隆病毒为非ｔｓ株，不含ＤＩ颗粒。而弱毒克隆病毒免疫６～８周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，同样能诱导较高滴度的中和抗体。强、弱毒克隆病毒的单抗反应谱表明，除了对４株抗糖蛋白单抗的反应性有显著差异外，两克隆病毒对１８株抗核蛋白单抗及１８株抗糖蛋白单抗的反应性无显著差异。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 308k] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：366 ] - 郑渡平，张礼璧，侯晓辉，朱宏
１９８９～１９９４年中国发生的脊髓灰质炎流行，疫情开始集中于华东、中南地区，后期趋于南部沿海一带。对近百份来自１８个省、市、自治区脊灰病毒流行期间标本的分子生物学特征分析，发现流行主要由脊灰病毒Ⅰ型野毒株引起，未发现Ⅱ型野毒株，但１９９３年在新疆分离到１株Ⅲ型野毒株。Ⅰ型野毒株中共存在４个基因型病毒，其中ＣＨＮＰ１－Ｒ９１型病毒为这几年流行中新产生的重组病毒，在ＶＰ１／２Ａ区含有一段疫苗株序列，另一段野毒株序列很可能来自ＣＨＮＰ１－ＪＸ８９型病毒。这两个基因型病毒分布在全国大部份地区。病毒核酸的亲缘关系研究还证明，９２～９４年流行在南方沿海一带的脊髓灰质炎，主要由９１年产生的重组病毒引起。此研究揭示了各地区、各基因型病毒与疫情之间的流行病学关系及传播模式。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 390k] [下载次数：81 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：361 ] - 纪志武，李宝民，叶树清，曾毅
ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术，把含有ＬＭＰ基因（ＢＮＬＦ１）３个外显子（ｅｘｏｎ）开放阅读框架（ＯＲＦ）的长１．８０ｋｂｐ的ＤＮＡ片段，和能分解ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ的含有ＳＶ４０早期启动子和ＨｇｒｙｏｍｙｃｉｎＢ磷酸转移酶全基因（长１０２５ｂｐ）的ＤＮＡ片段（长１．６０ｂｐ），同时重组于亚克隆载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（ｐＢＳ）中，并使该重组质粒ｐＢＳ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ（长５７６７ｂｐ）在乳地鼠肾传代细胞（ＢＨＫ）中获得表达。ＢＨＫ细胞在经此重组质粒转染后，ＬＭＰ阳性细胞是２％，在ＨｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ的持续压力下，ＬＭＰ表达细胞率可达２０％。３个月后，ＬＭＰ表达细胞逐渐减少。５个月后，不能测到ＬＭＰ表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹（Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ）实验证实，人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗ＬＭＰ抗体。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 360k] [下载次数：53 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：308 ] - 陈瑞珍，杨英珍，舒先红，陈世波
以自行设计及合成的两对引物，利用聚合酶链反应，检测了５５份不同类型动脉粥样硬化血管组织中人巨细胞病毒（Ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）的ＩＥ及Ｌ基因片段，阳性率高达５９．９％（３３／５５），而作为对照的正常冠状动脉及大隐静脉却仅为４５％（１／２２），表明ＨＣＭＶ感染与动脉粥样硬化（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，Ａｓ）的发生密切相关。比较同一组织标本中ＨＣＭＶＩＥ及Ｌ基因的检测结果发现，除个别Ａｓ组织同时可检出ＩＥ及Ｌ基因外，８１．８％的Ａｓ组织ＤＮＡ仅表现为ＩＥ或Ｌ基因阳性，提示ＨＣＭＶ基因组中不同的基因片段在Ａｓ发生发展中可能起着不同的生物学作用。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 160k] [下载次数：35 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：279 ] - 娄元梅，刘启富，朱德钟，蹇锐
采用乙型脑炎重组痘苗病毒Ｊ１和Ｊ３株，两者均含乙脑病毒（ＪＥＶ）的Ｅ、ＮＳ１和ＮＳ２Ａ基因，后者还含ＰｒＭ基因，在ＢＨＫ－２１－１５细胞中培养表达，经免疫荧光法（ＩＦＡ）测定，两者均可高效表达ＪＥＶ特异性抗原。用该重组病毒免疫瑞士种小鼠，经ＩＦＡ检测证明Ｊ１、Ｊ３均可诱生抗ＪＥＶ抗体，其中Ｊ３免疫鼠还产生中和抗体（Ｎ）和血抑抗体（ＨＩ），且其抗ＪＥＶ攻击能力显著增高。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 249k] [下载次数：88 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：31 ] |[阅读次数：394 ] - 陈望秋，张笑冰，迟捷，李玉英，段书敏，张丽兰，侯云德
采用表皮生长因子（ＥＧＦ）受体丰富的Ａ４３１细胞进一步研究了人ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白￣〔１〕的抗细胞分裂活性，以及它和靶细胞ＥＧＦ受体的关系。结果表明，ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞增殖作用明显高于其母体分子。￣１２５Ｉ－ＥＧＦ受体竞争抑制试验表明，ＩＦＮ－γ可与ＥＧＦ竞争Ａ４３１细胞的ＥＧＦ受体，而ＩＮＦ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的ＥＧＦ受体竞争抑制作用更为明显，说明人ＩＦＮ－γ和ＩＦＮ－γ－ＥＧＦ３融合蛋白的抗肿瘤细胞分裂活性，与靶细胞ＥＧＦ受体被竟争抑制密切相关。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 252k] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：380 ] - 张鹤龄，李天然，哈斯阿古拉，额尔敦，张彤，孙燕，庞瑞杰
应用本室合成、克隆的马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）中国分离株的外壳蛋白（ＣＰ）基因，通过致瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）介导，以马铃薯叶园片为转化材料，转化了马铃薯Ｄｅｓｉｒｅｅ、Ｆａｖｏｒｉｔａ、虎头和乌盟６０１，并获得了上述四个栽培种的转基因植株，成功地建立了一种简单、快速和效率高的转化体系，卡那霉素抗性、ＰＣＲ扩增目的基因、Ｓｏｕｔｈｅｍ和Ｎｏｒｔｈｅｍｂｌｏｔ分析证明，ＰＬＲＶ外壳蛋白基因已经稳定整合进入转基因马铃薯的染色体组中，并在转录水平上得到表达。窄缝转移分析（Ｓｌｏｔｂｌｏｔａｎａｌｙｓｉｓ）表明，每个转化体四倍体基因组中含有１－５个ＣＰ基因拷贝。转基因植物的接种试验证明，转基因工程植株中的ＰＬＲＶ滴度比未转基因的对照植株显著低。蚜虫传播试验证明，转基因植株可减少蚜虫在田间传播ＰＬＲＶ的效率，限制了ＰＬＲＶ的传播，减少田间植物发病的机会。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 603k] [下载次数：262 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：61 ] |[阅读次数：284 ] - 梁臣，耿运琪
牛免疫缺陷病毒（Ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＢＩＶ）基因组编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ，Ｔａｔ）可以提高ＢＩＶ长末端重复区（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）启动子的表达。为研究ＢＩＶＴａｔ蛋白的作用机理，分别从ＢＩＶＬＴＲ５′端及３′端构建不同的缺失，从荧光素酶基因（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ，Ｌｕｃ）为报道基因，通过共转染小牛肺细胞检测ＢＩＶＬＴＲ中与Ｔａｔ蛋白反式激活作用相关的序列。转染结果表明ＢＩＶＬＴＲ启动子始于－５２位的上游区不显著影响Ｔａｔ蛋白的激活作用，转录起始点下游的序列与Ｔａｔ蛋白的激活作用密切相关；并且－２－＋３２间的序列为ＢＩＶＴａｔ蛋白靶序列的一部分。将ＢＩＶＬＴＲ启动子下游序列（－２－＋２０４）亚克隆到ＨＩＶ－１ＬＴＲ启动子－５位之后，ＢＩＶＴａｔ蛋白可极大地提高该杂合启动子表达，进一步说明ＢＩＶＴａｔ蛋白的靶序列存在于－２－＋２０４的范围内；同时将ＢＩＶＬＴＲ启动子上游序列（－４１０－－３）接于ＨＩＶ－１ＬＴＲ下游序列（－２－＋７８）之前，ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白可以激活该杂合启动子表达，说明ＢＩＶＬＴＲ上游序列可以支持ＨＩＶ－?
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 321k] [下载次数：34 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：285 ] - 王正党，单文鲁，黄嘉驷，张福萍，刘明军
自１９８４至１９９４年１０年间，在新疆采集了绵羊、山羊羔、仔猪、犊牛、骆驼羔和鸡的粪样１９５９份，以及住院腹泻婴幼儿、无症状新生儿和成人腹泻的粪样２５５份，共２２１４份。用ＰＡＧＥ法检测了这些粪样中的轮状病毒和非典型轮状病毒。按Ｓａｉｆ电泳型分组法，检出的各组轮状病毒是：Ａ组２７６份，在成人腹泻和驼羔中未检出；Ｂ组２６份，都是从羊羔和仔猪中检出；Ｃ组２２份，都是从仔猪中检出；Ｄ组２份，在鸡中检出；似Ｅ组１份，从仔猪中检出。取检出的各组非典型轮状病毒９株，即羊羔Ｂ组２株（ＫＢ－６３和ＬＢ－６０），仔猪Ｂ组４株（ＭＰＢ－１、２，ＳＰＢ－３、４），仔猪Ｃ组２株（ＳＰＣ－１１、ＺＰＣ－１２），仔猪似Ｅ组１株（ＭＰＢ－５），口服接种剥夺初乳的本种动物，接种后１２－１６小时动物都发生急性水样腹泻，并检出大量病毒。对这９株病毒和１株成人腹泻轮状病毒（ＡＤＲＶ），用ＥＬＩＳＡ和对流免疫电泳检测Ａ、Ｂ组组抗原，结果ＡＤＲＶ、羊羔Ｂ组、仔猪Ｂ组和似Ｅ组共８株病毒都只有Ｂ组组抗原。用Ａ、Ｂ组轮状病毒生物素核酸探针斑点杂交分别检测８株和１０株病毒，血清学检测为Ｂ组者都只与Ｂ组有杂交信号。Ｃ组的两株则既无Ａ、Ｂ组组抗原，也不与Ａ、Ｂ?
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 478k] [下载次数：39 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：301 ] - 王丽英，王思芳，任钢，朱庆鸿
从内蒙古亚洲小车蝗（Ｏｅｄａｌｅｕｓａｓｉａｔｉｃｕｓ）上分离亚洲小车蝗痘病毒（ＯｅｄａｌｅｕｓａｓｉａｔｉｃｕｓＥｎｔｏｍｏｐｏｘｖｉｒｕｓ，ＯｅａＥＰＶ），经口接种黄胫小车蝗（Ｏｅｄａｌｅｕｓｉｎｆｅｒｎａｌｉｓ）以繁殖病毒，并获得纯化的病毒包涵体。纯化的病毒包涵体经碱解、酚抽提，得到ＯｅａＥＰＶＤＮＡ。经紫外分光光度计测定，该ＤＮＡ具有典型的核酸紫外吸收光谱。根据热变性曲线测得ＯｅａＥＰＶ－ＤＮＡ的Ｔｍ值为７７．０℃，Ｇ＋Ｃ％为１７．８％，增色效应明显。该ＤＮＡ经限制性内切酶ＥｃｏＲＩ、ＢｇｌⅡ和ＨｉｎｄⅢ酶切后，分别得到１５、１６和８个片段，用片段积加法求得的分子量相似，平均为１２２．７×１０￣６道尔顿。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，ＯｅａＥＰＶ粒子的结构蛋白至少有４６种多肽，有５种含量较高。经８ｍｏｌ／Ｌ尿素裂解，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，ＯｅａＥＰＶ包涵体蛋白主要由一种多肽组成，其分子量约为１０００００道尔顿。包涵体蛋白富含天冬氨酸和亮氨酸。
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苏云金杆菌以色列亚种（Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓｖａｒｉｓｒａｅｌｅｎｓｉｓ）的分子量为２７ｋＤ的δ－内毒素蛋白基因，与一个拷贝杆状病毒ｇｐ６７信号肽基因连接后，被插入苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）基因组。在筛选出的３种不同的重组病毒株ＡｃＢＴＩ５－１、ＡｃＢＴＩ５－３和ＡｃＢＴＩ６－３中，前两种表现为多角体阳性，后者为多角体阴性，ＡｃＢＴＩ５－１和ＡｃＢＴＩ６－３在Ｓｆ细胞中表达产生分子量为２６～３０．５ｋＤ的４种与２７ｋＤδ－内毒素蛋白有关的多肽。在ＡｃＢＴＩ５－３感染的细胞中未检测出类似的多肽。粉纹夜蛾在吃了涂有ＡｃＢＴＩ５－１感染的细胞收集物的饲料后，表现典型的苏云金杆菌δ－内毒素中毒症状。被ＡｃＢＴＩ５－１感染的粉纹夜蛾幼虫血淋巴与２７ｋＤδ－内毒素蛋白抗血清呈阳性反应。
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 399k] [下载次数：137 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：6 ] |[阅读次数：260 ] - 周秀芬，邓子新
杂合质粒ｐＩＪ８３１０是链霉菌低拷贝质粒ｐＩＪ９２２１携带了１０．８ｋｂ来自变铅青链霉菌ＪＴ４６菌株，编码对噬菌体ΦＨＡＵ３抗性的ＤＮＡ片段。已知Ｔｎ４５６０插到该克隆中３ｋｂ的ＥｃｏＲＩ或３．３ｋｂ的ＢａｍＨＩ片段（这两个片段之间有２．５ｋｂ的重叠区）上，中断了ΦＨＡＵ３抗性基因的表达。已将３．０ｋｂ的ＢｃｏＡＩ片段分别以两种不同的取向克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＳＫ（＋）上。核苷酸序列分析揭示出一个１．３ｋｂ的ＯＲＦ的存在，其所编码的４７８个氨基酸组成的蛋白与λ噬菌体的ｅａ５９基因所编码的氨基酸序列显示了高度的同源性，其氨基酸序列的同一性高达３７％，相似性达５８％，而λ噬菌体的ｅａ５９基因是编码赖ＡＴＰ和单键ＤＮＡ的核酸内切酶Ｉ的，该区域与λ的复制无关。此外，这段具有高度同源性的ＤＮＡ区域的Ｇ＋Ｃ％只有６０％，低于变铅青霉菌ＤＮＡＧ＋Ｃ％的平均值（７４％）。
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ＥＢ病毒诱导永生化人上皮细胞发生恶性转化李宝民，纪志武，刘振声，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词ＥＢ病毒，促癌物，上皮细胞转化ＥＢ病毒与鼻咽癌有着密切关系￣［１，２］，已经证明ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰｌ）能引起大鼠细胞...
1995年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 126k] [下载次数：84 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：372 ] - 陈国敏，薛守贵，张永利，林惠添，董德华，林星，魏礼康，陈武，曾毅
我国福建省福清地区ＨＴＬＶ－Ⅰ无症状携带者体内ＨＴＬＶ－Ⅰ病毒核酸的检测陈国敏，薛守贵，张永利，林惠添，董德华，林星，魏礼康，陈武，曾毅（中国预防医学科学院病毒学研究所，北京１０００５２）关键词嗜人Ｔ细胞病毒Ⅰ型，无症状携带者，聚合酶链反应，核酸杂交...
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