- 苗季,谭文杰,丛旭,丛郁,陈刚,毕胜利,詹美云
利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了完整的中国河北株丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构蛋白。免疫印迹实验结果显示，表达产物中有一系列分子量不同、可以与ＨＣＶ抗体阳性病人血清反应的蛋白，表明结构蛋白被宿主细胞蛋白酶切割与加工，相应分别为２０ｋＤ的核心蛋白、３２ｋＤ糖基化的Ｅ１蛋白、４０ｋＤ的未糖化的Ｅ２蛋白和７０ｋＤ糖基化的Ｅ２蛋白，另有８０ｋＤ及１００ｋＤ的两组前体蛋白。利用表达产物检测慢性ＨＣＶ感染者血清，发现Ｅ２抗体检出率很高，而其中一部分核心抗体为阴性。免疫小鼠试验证明此蛋白可诱导特异性抗体产生
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 77k] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：8 ] |[阅读次数：0 ] - 王小红,王升启,李梦东,朱宝珍
缺乏合适的ＨＣＶ感染细胞及小动物模型，是抗ＨＣＶ药物研究和开发的主要障碍之一。建立一种ＨＣＶ５＇ＮＣＲ调控荧光素酶基因的转基因细胞模型，可为以ＨＣＶ５＇ＮＣＲ及Ｃ基因５＇端为靶的反义寡核苷酸及特异性核酶等抗ＨＣＶ药物的评价及筛选创造条件。将ＨＣＶ５＇ＮＣＲ－Ｃ基因与荧光素酶基因的融合基因片段插入ｐＣＩ－ｎｅｏ表达载体，通过ＰＣＲ扩增、酶切反应、质粒大小检测及荧光素酶瞬间表达活性鉴定等试验，获得ＨＣＶ５＇ＮＣＲ调控荧光素酶的稳定表达质粒ｐＨＣＶ－ｎｅｏ４。将ｐＨＣＶ－ｎｅｏ４转染ＨｅｐＧ２细胞，经Ｇ４１８筛选，从１５０个克隆中获得一个荧光素酶活性表达为１４４３ＭＶ的细胞株（ＨｅｐＧ２．９７０６）。该株细胞内ＨＣＶ片段的ＤＮＡ及ｍＲＮＡ检测均呈阳性，接种培养板后，细胞荧光素酶活性表达持续１４４小时，无明显降低。该株细胞已传６０代，活性稳定表达已超过６个月
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 58k] [下载次数：60 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：0 ] - 谭文杰,郎振为,丛郁,伊瑶,詹美云
为研究丙型肝炎病毒核心蛋白及ＮＳ３蛋白在转基因小鼠体内的基因表达及细胞内定位，以及病毒蛋白的直接致细胞病变效应，我们采用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测了靶基因ｍＲＮＡ在转基因小鼠各种组织中的表达，用免疫组化方法分析了核心蛋白与ＮＳ３蛋白在转基因小鼠体内的表达及细胞内定位。结果表明：在转基因小鼠肝、肾、心等组织中可表达靶基因ｍＲＮＡ，核心蛋白的表达主要为核型，而ＮＳ３蛋白的表达主要为浆型。Ｚｎ２＋可诱导ｍＭＴ启动子下的靶基因表达。Ｃ与ＮＳ３蛋白的表达不引起转基因小鼠的表型与组织学发生明显改变。提示：丙型肝炎病毒核心蛋白与ＮＳ３蛋白在体内不能直接导致组织细胞发生细胞病变
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 58k] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 杜勇,周建军,王海涛
设计了利用大肠杆菌鞭毛蛋白递呈的随机十二肽库研究ＨＣＶ核心蛋白Ｂ细胞抗原表位的实验程序：１．利用大肠杆菌表达质粒ｐＱＥ－３０表达并纯化ＨＣＶ核心蛋白Ｐ１９；２．利用Ｐ１９蛋白亲和层析纯化ＨＣＶ感染者血清的抗ＨＣＶ核心蛋白多克隆抗体；３．再以这些多克隆抗体作为筛选分子，对大肠杆菌鞭毛蛋白递呈的随机十二肽库进行特异生物筛选，经ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ及ＤＮＡ测序等，证实在ＨＣＶ核心蛋白的Ｎ端存在两个线性表位，分别位于１７～２９ａａ和３１～４２ａ。此技术路线大大提高了同类研究的特异性和敏感性，可用于其它病原微生物抗原或自身抗原相应表位的研究
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 96k] [下载次数：51 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 柯越海,汪家权,曾毅
利用高效重组表达载体ＲＰ６６工程菌诱导发酵产生无活性的包涵体形式重组ＨＩＶ－１逆转录酶（ＲＴ），经过一定条件的摸索，确定了包涵体形式ＲＴ蛋白的洗涤、增溶、复性的条件。复性后的可溶性蛋白，经疏水相互作用和阴离子交换层析进一步分离纯化。同时复性纯化过程用反相高效液相系统（ＲＰ－ＨＰＬＣ）监控。最终可获得纯度９５％左右、比活性最高达９．７５×１０５Ｕ／ｍｇ的逆转录酶
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 99k] [下载次数：135 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 靖宇,钱渊,王洛平
为了解诺瓦克样病毒在我国人群中的流行情况，采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ），分别以重组杆状病毒表达的Ｎｏｒｗａｌｋ（ｒＮＶ）和Ｍｅｘｉｃｏ（ｒＭＸ）病毒样颗粒为抗原，检测了北京地区１１０９份不同年龄人群血清标本中的特异性ＩｇＧ抗体。总检出率为ｒＮＶ８８．８％，ｒＭＸ９０．６％。两种型别抗原的抗体分布形式类似：７－１１个月的阳性率最低，分别为ＮＶ４１．４％，ＭＸ３６．２％；１岁时达到ＮＶ６５．２％，ＭＸ６９．６％；３岁时达到ＮＶ８４．６％，ＭＸ８９．７％；８、９岁后均接近１００％。结果提示，北京地区人群中这两种血清型的诺瓦克样病毒感染十分普遍
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 65k] [下载次数：123 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：108 ] |[阅读次数：0 ] - 李虹,金奇,章金钢,姚二梅,殷震,侯云德
从中国发病鸡中分离的鸡减蛋综合征病毒（ＥｇｇＤｒｏｐＳｙｎｄｒｏｍＶｉｒｕｓ，ＥＤＳＶ）弱毒株（ＡＡ－２），其基因组全长约为３３ｋｂ。用限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ水解ＥＤＳＶ全基因组，构建了以ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡ（ＫＳ＋）为载体的右末端片段的克隆（约４．２ｋｂ），对其进行了序列测定和结构分析。该片段全长４１８３个碱基对（ｂｐ），位于基因组右末端８７．３ｍ．ｕ．－１００ｍ．ｕ．。结果显示，该片段与哺乳动物腺病毒右末端Ｅ４区结构不同，与禽Ⅰ型腺病毒代表株ＣＥＬＯ右末端片段亦无同源性。本文为深入了解ＥＤＳＶ基因组结构特点，ＥＤＳＶ与其他腺病毒基因结构与功能的进化关系和ＥＤＳＶ载体的构建奠定了分子生物学基础
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 129k] [下载次数：41 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ] - 周鹏程,赵启祖,刘卫,刘再新,谢庆阁,薛景山
从猪水泡病病毒（ＳＶＤＶ）细胞培养物的ＰＥＧ浓缩毒中提取病毒ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ和套式ＰＣＲ扩增病毒主要保护性抗原蛋白基因，将扩增产物１．６ｋｂ插入ｐＵＣ１８载体中，经亚克隆后用双脱氧链终止法测定其序列，与已发表的ＳＶＤＶ分离物该区序列作比较，核苷酸同源性为９６％－９７％，氨基酸同源性为９８％，参与构成ＳＶＤＶ中和性抗原位点的几个氨基酸残基均很保守；与已发表的柯萨奇Ｂ５病毒的对应序列比较，两者核苷酸序列同源性为７７％，而推导的氨基酸顺序同源性竞高达９２％。本文结果有助于ＳＶＤＶ的分子流行病学研究，并为其和柯萨奇Ｂ５病毒的相互关系提供参考数据，为ＳＶＤＶ新型疫苗研究提供了基础材料
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 88k] [下载次数：55 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 邵健忠,钱凯先,项黎新,李亚南,毛树坚
采用细胞病变抑制法测定了病毒诱导前后草鱼外周血中干扰素的活性变化。结果表明，经病毒诱导的草鱼血清中出现明显的干扰素抗病毒活性，２５℃水温下诱导３天，其活性达到高峰，在草鱼细胞中的效价（Ｌｏｇ２ＣＰＥＩ５０／０．１ｍｌ）可达１１．０８±０．５８以上。草鱼血清干扰素具有１０００００ｇ离心不沉降，耐热，在ｐＨ２．０－１０．０范围内活性稳定，抗ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ，对胰蛋白酶、糖苷酶和ＮａＩＯ４敏感等性质，其抗病毒作用依赖于细胞内ＲＮＡ和蛋白质的合成。在鱼类细胞中具有抑制不同病毒的能力，但在人、哺乳类、鸟类和贝类等细胞中无抗病毒作用，表现出抗病毒的广谱性和相对的种属特异性，与高等脊椎动物干扰素的特性相一致
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 51k] [下载次数：264 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：64 ] |[阅读次数：0 ] - 刘强,丁翠,蔡秀玉
粘虫颗粒体病毒经０．０２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ碱溶，先用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提物中分离增效因子，然后选用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析柱进一步纯化增效因子，得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。纯化的增效因子具有典型的蛋白紫外吸收光谱，最大吸收波长为２７５．２ｎｍ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳确定增效因子的分子量为１０８ｋＤ。用苏丹黑Ｂ脂蛋白染色法、过碘酸－Ｓｃｈｉｆ试剂糖蛋白染色法定性分析增效因子，非变性电泳凝胶上的增效因子带均为阴性反应。等电聚焦电泳检测增效因子的等电点为ｐＨ５．３左右。氨基酸组成分析证明，增效因子富含酸性氨基酸，占蛋白总量的２６．４２％，碱性氨基酸的含量较低
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 104k] [下载次数：88 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：0 ] - 吴小兵,董小岩,伍志坚,颜子颖,侯云德
将总长度为１５２ｋｂ的单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）（１７株）基因组分成５个相互间有部分重叠的大片段（约３５－４０ｋｂ），分别克隆到粘粒ＳｕｐｅｒＣｏｓＭＷ中，依次称为ｃｏｓ４８、ｃｏｓ２８、ｃｏｓ６、ｃｏｓ１４和ｃｏｓ５６（ＤａｖｉｓｏｎＡＪｅｔａｌ，１９９３）。此５个粘粒用ＰａｃⅠ切去粘粒骨架后共转染细胞，可发生同源重组而产生野生型ＨＳＶ－１。以此为基础，利用粘粒ｃｏｓ５６的ＨＳＶ－１ＵＬ４４基因中含有一个ＸｂａⅠ单一酶切位点的特点，将一个两端加有ＸｂａⅠ位点的ＣＭＶ－ｌａｃＺ－ｐｏｌｙＡ片段插入其中，构建成ｃｏｓ５６－ｌａｃＺ。将ｃｏｓ５６－ｌａｃＺ与其它４个粘粒经ＰａｃⅠ酶切后，用ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ转染试剂共转染ＢＨＫ－２１细胞，３７℃培养２－３天，开始出现细胞病变及噬斑。５天后将病变细胞连同培养液一起冻融３次，取上清０．１ｍｌ感染新鲜的ＢＨＫ－２１细胞，３７℃培养２４小时，用Ｘ－ｇａｌ染色３０－６０分钟，镜下观察可见大量蓝色噬斑。蓝色噬斑数占噬斑总数的５０％以上。经空斑纯化的蓝斑病毒可稳定传代。这种方法同将外源基因表达盒插入ＨＳＶｔｋ基因中构建成重组质粒，再与ＨＳＶ－１基因组ＤＮＡ共转染细?
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 58k] [下载次数：104 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：11 ] |[阅读次数：0 ] - 徐东平,韩凤连,施红,王福生,雷周云,金磊
核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）是一类具有核酸内切酶活性的ＲＮＡ分子，可特异地切割靶ＲＮＡ序列。核酶的催化中心有相对固定的序列，而切割特异性则由催化中心两侧序列与何种靶分子序列互补而决定。根据核酶这一特性，可以人工设计针对某一病毒ＲＮＡ的核酶分子，破坏病毒转...
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 56k] [下载次数：37 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：0 ] - 魏莘,王岱,张莉,刘淑红,陈启民,耿运琪
艾滋病（ＡＩＤＳ）主要是由人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）侵入人体后，破坏人的免疫系统造成的。许多流行病学研究已证明，疱疹病毒与ＨＩＶ的共感染可以导致对ＨＩＶ－１启动子的激活，并加速细胞的病理性反应〔１〕，从而加大个体对ＨＩＶ感染的敏感和加快疾病的进程。人疱...
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 33k] [下载次数：40 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 何湘君,钱渊,李国华,靖宇,刘军
Ａ组轮状病毒是导致婴幼儿重症腹泻的最主要病毒病原，ＶＰ７是病毒外壳上的主要糖蛋白，它具有中和抗原活性，与病毒的毒力及免疫保护性有关，也是划分病毒血清型的最主要标志之一〔１〕。ＶＰ７基因及其编码蛋白一直是人们研究的主要对象，很多研究工作和诊断试剂都需大...
1998年04期 [查看摘要][在线阅读][下载 27k] [下载次数：50 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：14 ] |[阅读次数：0 ] - 梁成罡,张彤,哈斯阿古拉,张鹤龄
马铃薯卷叶病毒（Ｐｏｔａｔｏｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ，ＰＬＲＶ）是正链ＲＮＡ病毒，属黄化病毒组（Ｌｕｔｅｏｖｉｒｕｓ）〔１〕，严格虫传，分布广泛，难以控制，侵染马铃薯能引起大面积减产，给马铃薯生产造成巨大损失。ＰＬＲＶ基因组全长６．０ｋｂ，有６个读...
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