肾综合征出血热病毒Gou3株M片段的分子特性及序列的比较分析

为测定我国肾综合征出血热病毒 Ｇｏｕ３ 株的 Ｍ 片段全基因序列，了解该株分子基础，并分析其与其他病毒株的差异，将提取的感染了病毒的 Ｖｅｒｏ － Ｅ６ 细胞总 Ｒ Ｎ Ａ 进行逆转录 Ｐ Ｃ Ｒ扩增，产物直接或纯化后克隆于 Ｔ 载体并测定序列，结果测得 Ｇｏｕ３ 株 Ｍ 片段的全基因序列共３ ６５１ 个核苷酸，最大读码框架从４７ 到３ ４４８ ，共编码１ １３４ 个氨基酸。四种核苷酸的比例分别为 Ａ３０６９ ％ ， Ｔ ３００１ ％ ， Ｇ２１５５ ％ ， Ｃ１７７５ ％ ， Ｇ Ｃ 含量为３９３０ ％ ， Ａ Ｔ 含量为６０７０ ％ 。应用不同的载体系统、不同的转化用菌种、从不同的传代株中扩增，确证了测序结果的正确性。序列同源比较分析表明： Ｇｏｕ３ 株与 Ｈ Ｔ Ｎ 型同源性为７０５ ％ ～７１５ ％ ，与 Ｓ Ｅ Ｏ 型为８３９ ％ ～８４５ ％ ；其氨基酸序列与 Ｈ Ｔ Ｎ 型同源性为７６５ ％ ～７７３ ％ ，与 Ｓ Ｅ Ｏ 型为９３２ ％ ～９７３ ％ 。核苷酸序列及其系统发生树分析表明： Ｓ Ｅ Ｏ 型的毒株间 Ｍ 片段全基因序列同源性较高为９４７ ％ ～９９５ ％ ，而 Ｇｏｕ３ 株与 Ｓ Ｅ Ｏ 型毒株间差异高达１５４ ％ ～１６１ ％ ， Ｇ２ 区域３３

痘苗病毒增强子样序列的特性研究

利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体，从痘苗病毒基因组 Ｄ Ｎ Ａ 中筛选到一个增强子样片段。序列分析表明，该片段长２８３ｂｐ ，是痘苗病毒 Ｄ Ｎ Ａ 依赖性 Ｒ Ｎ Ａ 聚合酶的一部分，具有两段２４ｂｐ 长的重复序列。采用带有β－ 半乳糖甘酶报道基因的载体检测发现，该片段正向可以使报道基因表达增强１０９ 倍，反向可以增强３８ 倍。 Ｒ Ｎ Ａ ｄｏｔ ｂｌｏｔ 实验证实，它对基因的增强活性表现在转录水平上。

反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒调控基因表达的体外抑制活性研究

为探讨反义寡核苷酸（ Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ） 对丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） 的抑制活性，研究和开发新型抗 Ｈ Ｃ Ｖ 药物。采用 Ｈ Ｃ Ｖ ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞株 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ ，评价了３ 条针对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ，即 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 。将 Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 包封的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 与 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ 细胞株每天作用５ 小时，连续３ 天后检测荧光素酶活性。结果提示，在 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６细胞中，三种 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ 均具有特异性的剂量依赖性抑制活性。浓度在０５μｍｏｌ／ Ｌ 时， Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 对 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶表达抑制率分别为６１ ％ 、５５ ％ 及４８ ％ 。 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 连续作用８ 天，其抑制率可达８１ ％ 。上述资料论证了 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 在 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞中对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因具有明显的抑制活性。

在昆虫细胞中高效表达蓝舌病毒VP7蛋白作为组特异性诊断抗原

对蓝舌病毒（ Ｂ Ｔ Ｖ） 结构蛋白 Ｖ Ｐ７ 作为组特异性诊断抗原进行了研究。将编码 Ｂ Ｔ Ｖ１３主要组特异性抗原 Ｖ Ｐ７ 的 Ｓ７ｃ Ｄ Ｎ Ａ 插入杆状病毒表达载体ｐ Ｆａｓｔ Ｂａｃ１ ，通过同源重组获得了重组杆状病毒ｒｖ Ｂａｃ Ｂ Ｔ Ｖ Ｐ７ 。用此重组病毒感染昆虫细胞获得 Ｖ Ｐ７ 蛋白的高效表达，表达量可占细胞蛋白总量的１２４ ％ 。 Ｖ Ｐ７ 重组抗原与 Ｂ Ｈ Ｋ２１ 细胞培养的抗原具有一致的抗原性，可与不同血清型 Ｂ Ｔ Ｖ 抗体反应，重组抗原的产量是后者的１００ 倍以上。试验证实：所表达的 Ｂ Ｔ Ｖ１３ Ｖ Ｐ７ 抗原能符合组特异性诊断抗原的要求。

鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的目的基因点突变对其免疫原性的影响

反转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ） 扩增鸡传染性支气管炎病毒（ Ｉ Ｂ Ｖ） 中国流行株（ Ｈ Ｄ）的主要免疫原纤突蛋白 Ｓ１ 基因（ Ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ） ，将其插入载体ｐ Ｕ Ｃ１８ 的 Ｂａｍ ＨⅠ／ Ｈｉｎｄ Ⅲ位点，在大肠杆菌中实现目的基因的分子克隆。经克隆化 Ｓ１ 基因的限制性酶切片段多态性（ Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ）分析和 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交之后，双脱氧链终止法测定其５′端高变区核苷酸序列，并以此与 Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ 中的参考毒株 Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｔｓ４１ 相应序列作比较，分析其同源性。在此基础上，分别以此两毒株抗原研制灭活疫苗，交叉免疫攻毒。结果表明，从 Ｓ１ 基因５′端高变区的起始密码子 Ａ Ｔ Ｇ 至第３５０ 位，两毒株仅在起始密码子后第１３１ 位存在一个碱基的点突变，由 Ｍ４１ 的 Ｃ 突变为 Ｈ Ｄ 株的 Ｇ，即 Ｓ１蛋白上的第４１ 个氨基酸由 Ｍ４１ 的 Ａｌａ 突变为 Ｈ Ｄ 株的 Ｇｌｙ ，二者核苷酸同源率为９９７ ％ ，氨基酸同源率为９９１ ％ 。两毒株灭活抗原疫苗免疫后的交叉攻毒试验表明， Ｍ４１ 毒株疫苗对 Ｈ Ｄ 株的保护率为７５ ％ ，而 Ｈ Ｄ 株疫苗对 Ｍ４１ 株的保护率只有６５ ％ 。

美国白蛾核型多角体病毒几丁质酶基因核苷酸序列研究

美国白蛾核型多角体病毒（ Ｈｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 编码的几丁质酶 Ａ（ Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ Ａ， Ｃｈｉ Ａ） 基因定位在 Ｈｉｎｄ Ⅲ－ ３５ｋｂ 片段上。 Ｄ Ｎ Ａ 测序表明，半胱氨酸蛋白酶（ Ｃ Ｐ） 基因的５＇上游反向存在 Ｃｈｉ Ａ基因， Ｃｈｉ Ａ 基因的 Ｏ Ｒ Ｆ 为１ ６６２ 个核苷酸，编码５５３ 个氨基酸，５＇、３＇非编码区分别具有 Ｔ Ａ Ａ Ｇ 基序和 Ａ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａｐｏｌｙ（ Ａ＋ ） 信号序列。同源性分析表明， Ｈｃ Ｎ Ｐ Ｖ 的 Ｃｈｉ Ａ 与苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒、家蚕核型多角体病毒的 Ｃｈｉ Ａ ，在 Ｄ Ｎ Ａ 水平上的同源性分别为７５３ ％ 、７５７ ％ ，在氨基酸水平上的同源性分别为７５０ ％ 、７８７ ％ ，与来自灵菌的 Ｃｈｉ Ａ 比较，一致性氨基酸达５１ ％ ，推测杆状病毒几丁质酶基因与细菌几丁质酶基因可能具有共同的祖先。

人疱疹病毒8型KS330基因片段的检出与Kaposi肉瘤的关系

人免疫缺陷病毒(HIV)辅助受体研究进展