- 屠红,DeborahTaylor,闻玉梅,MichaelM-C-Lai
酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白－ 蛋白相互作用的新技术。应用该技术，以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 非结构蛋白５Ａ（ＮＳ５Ａ） 为“诱饵”，筛检了人肝癌细胞ＨｅｐＧ２ 来源的ｃＤＮＡ文库，获得了７ 个ＮＳ５Ａ 结合蛋白的基因克隆。报道了其中两个阳性克隆（ ＃ ２ 、＃ １６） 的结果，并对“人核小体组装蛋白相关蛋白”（Ｈｕｍａｎ ｎｕｃｌｅｏｓｏｍｅａｓｓｅｍｂｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ －ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ，ｈＮＲＰ） 和“载脂蛋白Ａ－Ｉ”（Ａｐｏｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ－ Ｉ） 与ＮＳ５Ａ结合的生物学意义进行了讨论。
1999年04期 289-295页 [查看摘要][在线阅读][下载 83k] [下载次数：87 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 姚均,潘品良,邢辉,赵全壁,张峰,苏玲,陈秀珠,邵一鸣
应用异源双链泳动分析法（Ｈｅｔｅｒｏｕｄｕｐｌｅｘ ｍｏｂｉｌｉｔｙ ａｓｓａｙ，ＨＭＡ） ，对来自我国云南、四川、新疆、浙江、广东、福建、天津７ 省市７３ 份ＨＩＶ 感染者样品，进行了ＨＩＶ－ １ 膜蛋白（ｅｎｖ） 基因片段亚型分析。通过ＨＭＡ 能确定亚型的有７０ 份，占样品总数的９５－８９ ％ （７０／７３） 。其中Ａ 亚型２－８６ ％ （２／７０） ，Ｆ亚型２ ．８６ ％ （２／７０） ，泰国Ｂ 亚型１８ ．５８ ％ （１３／７０） ，欧美Ｂ 亚型８ ．５６ ％ （６／７０） ，Ｃ亚型３８ ．５７ ％ （２７／７０） ，Ｅ亚型２８－５７ ％ （２０／７０） 。为了检验结果的准确性和探讨３ 份样品不能用ＨＭＡ分型的原因，进一步对样品进行序列测定和系统树分析，并将两者结果的相互比较，两者对ＨＩＶ－ １ 分型显示出高度的一致性，其亚型一致率达９５－８９ ％ （７０／７３） 。而３ 份样品不能确定亚型的原因主要是，其ｅｎｖ 基因区段与相应的参考亚型质粒毒株相比变异太大。这提示，为了提高ＨＭＡ分型的敏感性，应不断地选择代表性好的毒株构建参考亚型质粒。
1999年04期 296-304页 [查看摘要][在线阅读][下载 110k] [下载次数：132 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：19 ] |[阅读次数：0 ] - 李关汉,王美华,金子辰,潘启超,康来仪
用外周血单个核细胞混合培养法分离到的ＨＩＶ－ １ ＳＨ０１ 株，具有典型的ＨＩＶ 颗粒的形态学特征，核心颗粒呈锥形，可见芽生释放的全过程。偶尔可在胞装空泡内见到ＨＩＶ 颗粒，同时还有细胞碎片和溶酶体结构，故此类空泡实际为ＨＩＶ 吞噬泡。另一少见的现象是溶酶体摄取并消化ＨＩＶ颗粒，在ＨＩＶ－ １ ＳＨ０１ 株感染７ 天或持续感染的ＭＴ４ 细胞中均可见到，后者尤为普遍。在ＨＩＶ－ １ ＳＨ０１ 株持续感染的ＭＴ４ 转化细胞中，经过溶酶体消化的ＨＩＶ 残体依稀可见，但同时也存在吞噬溶酶体膜溶解的现象。可见，非特异性免疫在清除体内ＨＩＶ 方面的作用值得作进一步的研究。此外，在ＨＩＶ－ １ ＳＨ０１ 株感染７ 天的ＭＴ４ 细胞的胞浆基质中，还可见到一种类病毒样颗粒，其性质有待进一步确定。
1999年04期 305-313页 [查看摘要][在线阅读][下载 237k] [下载次数：101 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 肖玮,钱渊,张又
克隆并测定了引起产科新生儿腹泻暴发的Ｐ２［６］ 、Ｇ４ 型轮状病毒（ＢＮ 株）ＶＰ４ 的ＶＰ８片段和ＶＰ７ 编码基因的核苷酸序列，并据此推导出其氨基酸序列。与相应标准株和地方株（ 包括有毒株和无毒株） 比较的结果表明，所测ＶＰ８ 序列与相同型别（Ｐ２［６］） 的标准株Ｍ３７（ 无毒株） 和ＳＴ３（ 无毒株） 、地方株Ｎ１６（ 无毒株） 和ＶＥ７１５６（ 有毒株） 之间的同源性为９２－８ ％ ～９８－６ ％ ，胰酶作用位点各毒株间相同；位于ａａ４９ 、ａａ５０ 、ａａ５２ 、ａａ５３ 、ａａ７８ 处的氨基酸在有毒株与无毒株间（ 包括ＢＮ株） 不同，但分别保守。ＶＰ７ 基因与同型（Ｇ４） 标准株ＳＴ３（Ａ 亚型／ 无毒株） 和ＶＡ７０（Ｂ 亚型／ 有毒株） 、意大利地方株ＰＶ５２４９（Ａ 亚型／ 有毒株）和北京地方株ＣＲ１１７（ 有毒株） 、同型猪有毒株Ｇｏｔｔ 之间的同源性为９１－４ ％ ～９７－８ ％ ，其中与Ａ亚型的同源性为９５－５ ％ ～９６－３ ％ ，而与Ｂ亚型的同源性为９１－４ ％ ，提示ＶＰ７ 为Ｇ４Ａ 亚型，位于ａａ３８ 、ａａ７８ 、ａａ１４５ 、ａａ２３８ 位点的氨基酸在有毒株与无毒株之间不同，但分别保守。分析了虽为Ｐ２［６］ 型却反常地引起新生儿?
1999年04期 314-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 98k] [下载次数：120 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：0 ] - 彭天庆,杨英珍,李光地,孔玉英
将编码柯萨奇Ｂ３ 病毒（ＣＶＢ３） 衣壳蛋白ＶＰ１ 和ＶＰ２ 的基因，分别克隆到具有７．５ｋ 启动子的痘苗病毒表达载体ｐＧＪＰ５ 上；将ＣＶＢ３ 衣壳蛋白全基因克隆到具有Ｔ７ 启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１ 上，并筛选到相应的重组痘苗病毒ＶＶＰ１ 、ＶＶＰ２ 和ＶＶＰ／４／２／３／１ 。ＶＶＰ１ 和ＶＶＰ２ 稳定表达产物为ＣＶＢ３ 衣壳蛋白ＶＰ１ 和ＶＰ２ ，而ＶＶＰ／４／２／３／１ 的产物ＶＰ４／２／３／１ 为一无分泌性的多聚蛋白，且这三种表达产物均属无分泌性蛋白。为了表达成熟的ＣＶＢ３ 衣壳蛋白，将去除５′端非编码区的ＣＶＢ３ 全基因克隆到具有Ｔ７ 启动子的痘苗表达载体ｐＴＭ１ 上，利用重组痘苗病毒ＶＴ７ 所提供的Ｔ７ＲＮＡ 聚合酶，在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析提示，ＶＰ１、ＶＰ２ 和ＶＰ３ 蛋白得到成熟表达，且发现表达产物具有分泌性。本研究将为今后研究ＣＶＢ免疫性打下基础。
1999年04期 323-329页 [查看摘要][在线阅读][下载 73k] [下载次数：67 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ] - 胡子信,张曼夫
以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ） 强毒株（Ｈａｒｂｉｎ 毒株，Ｈ） 的基因组ＲＮＡ为模板，用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 的方法得到了其Ａ 节段的全长ｃＤＮＡ 片段，分５＇端（１ ６５９ｂｐ） 和３＇端（１ ４４４ｂｐ） 上下两段分别克隆到ｐＧＥＭＢ○Ｒ － Ｔ 载体上，测定了其核苷酸顺序，在长为３ １０１ ｂｐ 中含有两个阅读框ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ ，分别编码１ ０１２ 个氨基酸的前体蛋白（ＶＰ２ － ４ －３） 和１４５ 个氨基酸的ＶＰ５，ＯＲＦＡ１ 和ＯＲＦＡ２ 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的ＩＢＤＶ 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较，结果表明：Ｈ 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间，在核苷酸水平上存在２５ｂｐ － ２６７ｂｐ 的差异；在氨基酸水平上存在１７ ～４０ 个氨基酸的差异。在ＶＰ２ － ４ － ３ 内比较显示，Ｈ 毒株与Ｐ２ 、Ｃｕ－ １ 之间氨基酸的差异最小为１ ．７％ ，Ｈ 毒株与ＵＫ６６１ 之间氨基酸的差异最大为３ ．９ ％ 。变异主要发生在ＶＰ２ 的可变区（２０６ － ３５０ 位氨基酸） ，在Ｈ 毒株所特有的１２ 个氨基酸当中，该区就占５ 个，代表１ ．７６ ％ 的变异。ＶＰ４、ＶＰ３ 和ＶＰ５区各有
1999年04期 330-338页 [查看摘要][在线阅读][下载 120k] [下载次数：99 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：28 ] |[阅读次数：0 ] - 施农农,陈剑平,M.J.Adams
１３ 个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒（ＢａＹＭＶ） 分离物，经ＲＮＡ１ 和ＲＮＡ２ 全基因组不同区域ＤＮＡ片段单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ） ，外壳蛋白基因和ＲＮＡ２ ７０ｋＤ基因５＇端７０５ 碱基序列分析，以及此７０５ 碱基ＤＮＡ 片段限制性内切酶图谱分析结果，它们的ＲＮＡ１ 和ＲＮＡ２ 彼此无一相同，其中ＲＮＡ２ 变异比ＲＮＡ１ 更大。由于变异十分复杂，且没有规律性，因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地用于ＢａＹＭＶ 致病性分化或株系区分和检测。
1999年04期 339-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 92k] [下载次数：95 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 徐钤,齐凤菊,黄扬中
迄今已发现的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ） 型已超过７７ 型，其中至少有３０ 个型与泌尿生殖道肿瘤有关。所以ＨＰＶ 的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的。ＨＰＶ有很大的异质性，故用常规的诊断技术来测定未知标本中的ＨＰＶ 基因型有一定困难。为此，我们应用了反向点杂交法（ＲＤＢ） 来检测ＨＰＶ 分型。即用７ 种序列特异性寡核苷酸探针分别对应７ 型ＨＰＶ（ＨＰＶ６Ｂ、１１ 、１６ 、１８ 、３１ 、３３ 、３５） ，这些探针被合成后依次固定在一条尼龙膜上形成７ 个点，再与样品ＤＮＡ序列的ＰＣＲ产物进行杂交。结果７ 型ＨＰＶ 中任一型阳性都可以在一条尼龙膜上鉴别出来。我们收集来自广州各大医院的标本，共计１７７ 例（ 除２０ 例食道癌标本来自河南省外） ，用ＲＤＢ来检测ＨＰＶ 和分型。结果如下：子宫颈癌８６ 例，其中鳞癌６８ 例，ＨＰＶ 阳性５９ 例（８６ ．７６ ％ ） ；腺癌１８ 例，ＨＰＶ 阳性８ 例（４４ ．４４ ％ ）；尖锐湿疣４２ 例，ＨＰＶ 阳性３９ 例（９２ ．８６ ％ ） ；慢性宫颈炎２９例，ＨＰＶ阳性１ 例（３．４５ ％ ） ；食道癌２０ 例，ＨＰＶ 阳性７ 例（３５ ．００ ％ ） 。
1999年04期 348-353页 [查看摘要][在线阅读][下载 71k] [下载次数：88 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：0 ] - 徐洪涛,朴春爱,王雷,朱俊萍,董杰,王长安,相建海,金奇,侯云德
中国对虾非包涵体型杆状病毒（ＰｃＮＯＢＶ） 是中国大陆养殖的中国对虾（ Ｐｅｎａｅｕｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ） 暴发性流行病———白斑综合征的主要病原，与台湾流行的Ｐｍ ＮＯＢⅢ、泰国的Ｐｍ ＮＯＢⅡ及日本的ＲＶ－ ＰＪ（ ＝ ＰＲＤＶ） 有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征。为了解ＰｃＮＯＢＶ 与Ｐｍ ＮＯＢⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系，并建立早期、敏感、特异的检测技术，利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了ＰｃＮＯＢＶ 核衣壳，根据台湾地区分离的Ｐｍ ＮＯＢⅢ的基因序列设计一对引物，从纯化的ＰｃＮＯＢＶ ＤＮＡ 及自然发病的中国对虾、日本对虾和斑节对虾组织ＤＮＡ中成功地扩增出长为３５５ｂｐ 的目的片段，可检测出３ ．４ｐｇ 的ＰｃＮＯＢＶ ＤＮＡ。从健康对虾组织提取的ＤＮＡ未能扩增出目的片段。扩增片段序列与Ｐｍ ＮＯＢⅢ相应的基因序列相同。该结果从分子水平证实ＰｃＮＯＢＶ 与Ｐｍ ＮＯＢⅢ存在基因同源性，同时表明聚合酶链式反应（ＰＣＲ） 可以作为检测ＰｃＮＯＢＶ 的一种敏感、特异、早期、快速的诊断手段。
1999年04期 354-359页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：9 ] |[阅读次数：0 ] - 张军,杨海杰,罗文新,苏智军,庄立琳,夏宁邵1999年04期 360-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k] [下载次数：43 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：0 ]
- 夏春,刘津1999年04期 364-367页 [查看摘要][在线阅读][下载 70k] [下载次数：80 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：0 ]
- 常胜军,王锡锋,马占鸿,李莉,周广和1999年04期 368-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 61k] [下载次数：97 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：0 ]
- 谢迎秋,朱祯1999年04期 372-381页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k] [下载次数：434 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：23 ] |[阅读次数：0 ]
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