• 酵母双杂合系统在丙型肝炎病毒NS5A研究中的应用

    屠红,DeborahTaylor,闻玉梅,MichaelM-C-Lai

    酵母双杂合系统是在酵母细胞中研究蛋白- 蛋白相互作用的新技术。应用该技术,以丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白5A(NS5A) 为“诱饵”,筛检了人肝癌细胞HepG2 来源的cDNA文库,获得了7 个NS5A 结合蛋白的基因克隆。报道了其中两个阳性克隆( # 2 、# 16) 的结果,并对“人核小体组装蛋白相关蛋白”(Human nucleosomeassembly protein -related protein ,hNRP) 和“载脂蛋白A-I”(Apolipoprotein A- I) 与NS5A结合的生物学意义进行了讨论。

    1999年04期 289-295页 [查看摘要][在线阅读][下载 83k]
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  • 应用异源双链泳动分析法快速确定(HIV-1)基因亚型

    姚均,潘品良,邢辉,赵全壁,张峰,苏玲,陈秀珠,邵一鸣

    应用异源双链泳动分析法(Heterouduplex mobility assay,HMA) ,对来自我国云南、四川、新疆、浙江、广东、福建、天津7 省市73 份HIV 感染者样品,进行了HIV- 1 膜蛋白(env) 基因片段亚型分析。通过HMA 能确定亚型的有70 份,占样品总数的95-89 % (70/73) 。其中A 亚型2-86 % (2/70) ,F亚型2 .86 % (2/70) ,泰国B 亚型18 .58 % (13/70) ,欧美B 亚型8 .56 % (6/70) ,C亚型38 .57 % (27/70) ,E亚型28-57 % (20/70) 。为了检验结果的准确性和探讨3 份样品不能用HMA分型的原因,进一步对样品进行序列测定和系统树分析,并将两者结果的相互比较,两者对HIV- 1 分型显示出高度的一致性,其亚型一致率达95-89 % (70/73) 。而3 份样品不能确定亚型的原因主要是,其env 基因区段与相应的参考亚型质粒毒株相比变异太大。这提示,为了提高HMA分型的敏感性,应不断地选择代表性好的毒株构建参考亚型质粒。

    1999年04期 296-304页 [查看摘要][在线阅读][下载 110k]
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  • HIV-1SH01分离株在MT4细胞的超微结构特征和形态发生学研究

    李关汉,王美华,金子辰,潘启超,康来仪

    用外周血单个核细胞混合培养法分离到的HIV- 1 SH01 株,具有典型的HIV 颗粒的形态学特征,核心颗粒呈锥形,可见芽生释放的全过程。偶尔可在胞装空泡内见到HIV 颗粒,同时还有细胞碎片和溶酶体结构,故此类空泡实际为HIV 吞噬泡。另一少见的现象是溶酶体摄取并消化HIV颗粒,在HIV- 1 SH01 株感染7 天或持续感染的MT4 细胞中均可见到,后者尤为普遍。在HIV- 1 SH01 株持续感染的MT4 转化细胞中,经过溶酶体消化的HIV 残体依稀可见,但同时也存在吞噬溶酶体膜溶解的现象。可见,非特异性免疫在清除体内HIV 方面的作用值得作进一步的研究。此外,在HIV- 1 SH01 株感染7 天的MT4 细胞的胞浆基质中,还可见到一种类病毒样颗粒,其性质有待进一步确定。

    1999年04期 305-313页 [查看摘要][在线阅读][下载 237k]
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  • 引起产科新生儿腹泻暴发的轮状病毒株VP4 VP7编码基因与其毒力关系的探讨

    肖玮,钱渊,张又

    克隆并测定了引起产科新生儿腹泻暴发的P2[6] 、G4 型轮状病毒(BN 株)VP4 的VP8片段和VP7 编码基因的核苷酸序列,并据此推导出其氨基酸序列。与相应标准株和地方株( 包括有毒株和无毒株) 比较的结果表明,所测VP8 序列与相同型别(P2[6]) 的标准株M37( 无毒株) 和ST3( 无毒株) 、地方株N16( 无毒株) 和VE7156( 有毒株) 之间的同源性为92-8 % ~98-6 % ,胰酶作用位点各毒株间相同;位于aa49 、aa50 、aa52 、aa53 、aa78 处的氨基酸在有毒株与无毒株间( 包括BN株) 不同,但分别保守。VP7 基因与同型(G4) 标准株ST3(A 亚型/ 无毒株) 和VA70(B 亚型/ 有毒株) 、意大利地方株PV5249(A 亚型/ 有毒株)和北京地方株CR117( 有毒株) 、同型猪有毒株Gott 之间的同源性为91-4 % ~97-8 % ,其中与A亚型的同源性为95-5 % ~96-3 % ,而与B亚型的同源性为91-4 % ,提示VP7 为G4A 亚型,位于aa38 、aa78 、aa145 、aa238 位点的氨基酸在有毒株与无毒株之间不同,但分别保守。分析了虽为P2[6] 型却反常地引起新生儿?

    1999年04期 314-322页 [查看摘要][在线阅读][下载 98k]
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  • 柯萨奇B3病毒基因在重组痘苗病毒中的表达

    彭天庆,杨英珍,李光地,孔玉英

    将编码柯萨奇B3 病毒(CVB3) 衣壳蛋白VP1 和VP2 的基因,分别克隆到具有7.5k 启动子的痘苗病毒表达载体pGJP5 上;将CVB3 衣壳蛋白全基因克隆到具有T7 启动子的痘苗表达载体pTM1 上,并筛选到相应的重组痘苗病毒VVP1 、VVP2 和VVP/4/2/3/1 。VVP1 和VVP2 稳定表达产物为CVB3 衣壳蛋白VP1 和VP2 ,而VVP/4/2/3/1 的产物VP4/2/3/1 为一无分泌性的多聚蛋白,且这三种表达产物均属无分泌性蛋白。为了表达成熟的CVB3 衣壳蛋白,将去除5′端非编码区的CVB3 全基因克隆到具有T7 启动子的痘苗表达载体pTM1 上,利用重组痘苗病毒VT7 所提供的T7RNA 聚合酶,在哺乳动物细胞中进行了暂时表达研究。Western blot 分析提示,VP1、VP2 和VP3 蛋白得到成熟表达,且发现表达产物具有分泌性。本研究将为今后研究CVB免疫性打下基础。

    1999年04期 323-329页 [查看摘要][在线阅读][下载 73k]
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  • 传染性法氏囊病病毒中国强毒株A节段cDNA基因的克隆和序列分析

    胡子信,张曼夫

    以来自哈尔滨传染性法氏囊病病毒(IBDV) 强毒株(Harbin 毒株,H) 的基因组RNA为模板,用反转录聚合酶链反应(RT- PCR) 的方法得到了其A 节段的全长cDNA 片段,分5'端(1 659bp) 和3'端(1 444bp) 上下两段分别克隆到pGEMB○R - T 载体上,测定了其核苷酸顺序,在长为3 101 bp 中含有两个阅读框ORFA1 和ORFA2 ,分别编码1 012 个氨基酸的前体蛋白(VP2 - 4 -3) 和145 个氨基酸的VP5,ORFA1 和ORFA2 有部分的重叠。将核苷酸序列及推测出的氨基酸序列与已报道的IBDV 血清Ⅰ型和Ⅱ型毒株的相应序列进行了比较,结果表明:H 毒株与其它血清Ⅰ型毒株之间,在核苷酸水平上存在25bp - 267bp 的差异;在氨基酸水平上存在17 ~40 个氨基酸的差异。在VP2 - 4 - 3 内比较显示,H 毒株与P2 、Cu- 1 之间氨基酸的差异最小为1 .7% ,H 毒株与UK661 之间氨基酸的差异最大为3 .9 % 。变异主要发生在VP2 的可变区(206 - 350 位氨基酸) ,在H 毒株所特有的12 个氨基酸当中,该区就占5 个,代表1 .76 % 的变异。VP4、VP3 和VP5区各有

    1999年04期 330-338页 [查看摘要][在线阅读][下载 120k]
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  • 中国大麦黄花叶病毒分离物的分子变异

    施农农,陈剑平,M.J.Adams

    13 个供试的中国和英国大麦黄花叶病毒(BaYMV) 分离物,经RNA1 和RNA2 全基因组不同区域DNA片段单链构象多态性分析(SSCP) ,外壳蛋白基因和RNA2 70kD基因5'端705 碱基序列分析,以及此705 碱基DNA 片段限制性内切酶图谱分析结果,它们的RNA1 和RNA2 彼此无一相同,其中RNA2 变异比RNA1 更大。由于变异十分复杂,且没有规律性,因而当前通用的分子生物学技术尚不能简单地用于BaYMV 致病性分化或株系区分和检测。

    1999年04期 339-347页 [查看摘要][在线阅读][下载 92k]
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  • 肛门生殖器区肿瘤组织中HPV的快速检测和分型

    徐钤,齐凤菊,黄扬中

    迄今已发现的人乳头瘤病毒(HPV) 型已超过77 型,其中至少有30 个型与泌尿生殖道肿瘤有关。所以HPV 的检测与分型对于泌尿生殖道肿瘤的病因和预后将是非常重要的。HPV有很大的异质性,故用常规的诊断技术来测定未知标本中的HPV 基因型有一定困难。为此,我们应用了反向点杂交法(RDB) 来检测HPV 分型。即用7 种序列特异性寡核苷酸探针分别对应7 型HPV(HPV6B、11 、16 、18 、31 、33 、35) ,这些探针被合成后依次固定在一条尼龙膜上形成7 个点,再与样品DNA序列的PCR产物进行杂交。结果7 型HPV 中任一型阳性都可以在一条尼龙膜上鉴别出来。我们收集来自广州各大医院的标本,共计177 例( 除20 例食道癌标本来自河南省外) ,用RDB来检测HPV 和分型。结果如下:子宫颈癌86 例,其中鳞癌68 例,HPV 阳性59 例(86 .76 % ) ;腺癌18 例,HPV 阳性8 例(44 .44 % );尖锐湿疣42 例,HPV 阳性39 例(92 .86 % ) ;慢性宫颈炎29例,HPV阳性1 例(3.45 % ) ;食道癌20 例,HPV 阳性7 例(35 .00 % ) 。

    1999年04期 348-353页 [查看摘要][在线阅读][下载 71k]
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  • 检测中国对虾非包涵体型杆状病毒的PCR方法的建立

    徐洪涛,朴春爱,王雷,朱俊萍,董杰,王长安,相建海,金奇,侯云德

    中国对虾非包涵体型杆状病毒(PcNOBV) 是中国大陆养殖的中国对虾( Penaeuschinensis) 暴发性流行病———白斑综合征的主要病原,与台湾流行的Pm NOBⅢ、泰国的Pm NOBⅡ及日本的RV- PJ( = PRDV) 有相似的致病特征、形态学及组织病理学特征。为了解PcNOBV 与Pm NOBⅢ两种地域分布邻近的毒株基因水平的关系,并建立早期、敏感、特异的检测技术,利用氯化铯密度梯度超速离心技术分离纯化了PcNOBV 核衣壳,根据台湾地区分离的Pm NOBⅢ的基因序列设计一对引物,从纯化的PcNOBV DNA 及自然发病的中国对虾、日本对虾和斑节对虾组织DNA中成功地扩增出长为355bp 的目的片段,可检测出3 .4pg 的PcNOBV DNA。从健康对虾组织提取的DNA未能扩增出目的片段。扩增片段序列与Pm NOBⅢ相应的基因序列相同。该结果从分子水平证实PcNOBV 与Pm NOBⅢ存在基因同源性,同时表明聚合酶链式反应(PCR) 可以作为检测PcNOBV 的一种敏感、特异、早期、快速的诊断手段。

    1999年04期 354-359页 [查看摘要][在线阅读][下载 65k]
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  • 闽南地区TT病毒的变异及经输血传播的初步证据

    张军,杨海杰,罗文新,苏智军,庄立琳,夏宁邵

    1999年04期 360-363页 [查看摘要][在线阅读][下载 43k]
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  • PCR检测中国对虾暴发性流行病毒靶基因的克隆和序列分析

    夏春,刘津

    1999年04期 364-367页 [查看摘要][在线阅读][下载 70k]
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  • 大麦黄矮病毒GAV株系外壳蛋白基因的克隆和序列分析

    常胜军,王锡锋,马占鸿,李莉,周广和

    1999年04期 368-371页 [查看摘要][在线阅读][下载 61k]
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  • 植物双生病毒的复制及转录调控研究进展

    谢迎秋,朱祯

    1999年04期 372-381页 [查看摘要][在线阅读][下载 102k]
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