• 人乳头状瘤病毒诱导人胚食管上皮永生化细胞恶性转化

    沈忠英,陈晓红,沈健,蔡维佳,陈炯玉,黄天华,曾毅

    为了证实HPV18E6E7基因诱导的人胚食管上皮永生化细胞 (SHEE) 6 1代 (SHEE6 1)部份细胞 (SHEE6 1A)已经恶性转化 ,以寻找监控细胞早期恶性转化的方法。对培养的SHEE第 10代 (SHEE10 )和 6 1代 (SHEE6 1)细胞 ,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态及生长形式 ;用流式细胞仪分析细胞周期 ;用染色体G带核型分析和间期核染色体 1、7、8号着丝粒探针荧光原位杂交 (FISH)检测细胞染色体改变 ;用增殖优势克隆优选法选出生长快的细胞群体 ,接种裸小鼠和SCID小鼠。结果 :光学显微镜下见SHEE6 1细胞大小不等 ,重叠生长 ;电子显微镜下见细胞核多型性和核仁增大等增殖表型 ;流式细胞仪检测 ,SHEE6 1增殖指数和DNA >4n细胞高于SHEE10 ;SHEE6 1细胞染色体众数出现 5 7~ 6 0、6 3~ 6 5两亚群 ,1、7、9、13、17等染色体出现较多 3体、4体或 5体 ;FISH间期核 1、7号着丝粒数增多 ;SHEE6 1克隆优选的细胞SHEE6 1A接种SCID小鼠成瘤。这表明 :SHEE6 1细胞形态及生长特性有了改变 ,接触抑制减弱 ,高倍体和不整倍体细胞增多 ,染色体数目明显改变 ,SHEE6 1A接种SCID小鼠产生浸润性肿瘤 ,可以判定SHEE6 1部份细胞已恶性转化。用克隆优选法筛选和染色体检测可以监控永生化细胞早期恶性转化。

    2000年02期 97-101页 [查看摘要][在线阅读][下载 101k]
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  • 我国首次分离的辛德毕斯病毒(XJ-160病毒株)全基因组核苷酸序列测定

    李蕾,梁国栋,周国林,李富胜,付士红,何海怀,金奇,侯云德

    对我国首次分离的辛德毕斯病毒XJ 16 0病毒株全基因组核苷酸序列进行测定 ,阐明该病毒基因组与国外株的差异 ,了解其分子致病机理。测序结果显示 ,XJ 16 0病毒全基因组除 5′末端帽子结构和 3′末端多聚腺苷酸尾外共 116 2 6个核苷酸 ,编码 3731个氨基酸。非结构基因的编码区长 746 4核苷酸 (6 0nt~ 75 2 3nt) ,编码 2 486氨基酸 ,翻译成四种非结构蛋白 (nonstructuralprotein ,nsp1 4)。结构基因长 3738核苷酸 (75 6 8~ 1130 6 ) ,编码 12 45个氨基酸 ,翻译成三种结构蛋白和两个小分子肽 (capsid ,E1- 3、6k)。病毒基因组 5′末端和 3′末端及结构基因和非结构基因之间分别有 5 9个核苷酸、45个核苷酸和 32 3个核苷酸的非编码区。核苷酸序列分析表明 ,XJ 16 0病毒具备典型的甲病毒属辛德毕斯病毒基因组特征 ,与标准辛德毕斯病毒AR339病毒株相比 ,核苷酸序列存在 18%差异 ,氨基酸差异为 8%。这是我国完成的第一株辛德毕斯病毒全基因组序列测定 ,序列已输入国际基因库 (GenBankAF10 372 8)。

    2000年02期 102-105页 [查看摘要][在线阅读][下载 49k]
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  • XJ-160病毒为辛德毕斯病毒新亚型

    李蕾,梁国栋,李富胜,周国林,付士红,何海怀,金奇,侯云德

    XJ 16 0病毒是我国首次分离的辛德毕斯病毒 ,在对其全基因组核苷酸序列测定的基础上 ,对病毒基因组序列、病毒同源性和病毒系统进化等进行了较为详细的分析 ,结果表明 :XJ 16 0病毒具有典型的甲病毒属辛德毕斯病毒的序列特征。该病毒nsp3蛋白基因中有 11处缺失及两处插入 (45 17~ 5 485 ) ,涉及 90个核苷酸。核苷酸序列的系统进化分析表明 ,XJ 16 0病毒属于辛德毕斯病毒欧洲 /非洲亚组。病毒全基因组核苷酸序列进化分析显示 ,XJ 16 0病毒是一株新的甲病毒或辛德毕斯病毒的新亚型。

    2000年02期 106-110页 [查看摘要][在线阅读][下载 52k]
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  • 我国首次发现的HIV-1和HIV-2双重感染样品中病毒部分基因的序列特征分析

    邢辉,潘品良,冯毅,林旭东,于健石,龚新昌,戴玉琳,邵一鸣

    上海市卫生检疫局送检了一例HIV - 1和HIV - 2抗体检测均呈阳性的双重感染样品 ,对其感染的HIV前病毒的 gag和env基因区进行了序列分析 ,首次阐明我国发现的HIV双重感染样品的HIV部分基因特征。从HIV感染者淋巴细胞 (peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)中提取前病毒DNA ,分别使用HIV 1和HIV 2特异性引物用套式PCR扩增HIV 1和HIV 2的部分基因区。PCR产物不经克隆直接测序 ,经GenBank检索并使用GCG软件包进行序列分析。结果表明 ,其中感染的HIV 2毒株中gag基因区与德国株HI2PEI2KR相似 ,基因离散率仅为8 1% ,env基因C2 -V3区与来自几内亚比绍的HIV 2U0 5 35 8株最近 ,离散率为 13 0 4% ,在其 gp36区发现与HIV 2U0 5 35 8基因离散率为 10 6 3% ,两个毒株均属HIV 2中的A亚型。而其HIV 1型毒株在 gag和env区都与从尼日利亚分离的H92NG0 83株相似 ,属HIV 1的G亚型。本文首次对我国发现的HIV 2型毒株进行了主要基因区的序列分析 ,表明在非洲较常见的HIV 2A亚型和HIV 1G亚型毒株 ,已随援外劳工传入我国。

    2000年02期 111-115页 [查看摘要][在线阅读][下载 80k]
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  • 两株乙型肝炎病毒基因组结构分析及其复制和抗原表达特性的比较

    武力,袁正宏,何丽芳,蒋伟伦,邱申熊,闻玉梅

    为从全基因组水平研究乙型肝炎病毒 (HBV)的核苷酸结构及复制和抗原表达特性 ,分别从 2例HBsAg和HBeAg阳性、HBVDNA滴度为 10 14 和 10 13 拷贝 /ml的慢性乙型肝炎患者 (编号为 5 6和 2 18)血清中扩增、克隆了HBV全基因组 ,并测定了核苷酸序列。两株病毒基因组转染HepG2细胞的培养上清中HBsAg表达水平基本相同 ,但 # 5 6毒株表达的HBeAg约为 # 2 18株的 3倍 ,Southern印迹及核酸杂交显示 ,# 5 6HBV株复制效率显著高于 # 2 18株 ,两株HBVDNA全长均为 32 15个核苷酸 ,同源性为 98 7% ,均为B基因型 (adw亚型 )。两者相差的42个核苷酸分布在C、Pre S1、Pre S2、P及X基因编码区 ,其中有位于SPⅠ、SPⅡ、Xp和ENHⅠ基因调控序列区中。 # 5 6患者感染的毒株基因组中Pre S2起始密码ATG变异为GTG ,但由Pre S1起始翻译形成的大蛋白中包括Pre S2的部分氨基酸 ,故 # 5 6血清和 # 5 6株转染细胞的培养上清仍可与Pre S2抗体出现阳性反应。

    2000年02期 116-122页 [查看摘要][在线阅读][下载 106k]
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  • 我国河南与北京腹泻患儿中的星状病毒感染

    方肇寅,章菁,赵章华,马莉,李永华,杨辉,S.Monroe,R.Glass

    人星状病毒 (HAstV)是RNA病毒的新家族 ,从我国河南和北京两地区的急性腹泻患儿便样中鉴定了 7株星状病毒 ,经电镜观察病毒颗粒直径约为 2 8nm ,表面呈五角或六角星状形态 ,用RT PCR检定为阳性 ,比较PCR扩增产物的核苷酸序列构建的序列同源性树表明 ,1 990年在河南流行的星状病毒主要为HAstV 1 ,另有一株HAstV 5,1 996年北京流行株为HAstV 5。对HAstV患儿的临床症状进行了讨论。以上结果为我国病毒性胃肠炎流行的预防提供科学根据

    2000年02期 123-126页 [查看摘要][在线阅读][下载 47k]
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  • 血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区基因的克隆及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

    曾革非,张智清,周小明,张立国,车团结,安乃莉,陈爱君,姚立红

    从原代培养的人脐静脉血管内皮细胞 (HUVEC)提取细胞总RNA ,采用逆转录PCR (RT PCR)方法得到VEGF受体Flt 1胞外区前 3个IgG样区域cDNA片段 (Flt 1n3 )。将获得的受体基因克隆到真核表达载体 pcD NA3.1中 ,得到重组质粒 pcDNA3.1/Flt 1n3 ,通过脂质体转染方法将其转入中国仓鼠卵巢细胞 (CHO) ,用G418筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞克隆。经固相结合实验筛选得到表达与VEGF特异结合的目的蛋白的细胞克隆 ,细胞测活结果表明 ,表达产物具有抑制人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的活性。鸡胚测活结果表明 ,CHO细胞表达的rFlt 1n3 能抑制鸡胚绒毛尿囊膜的血管形成。

    2000年02期 127-130页 [查看摘要][在线阅读][下载 62k]
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  • 在昆虫细胞中同时表达蓝舌病毒VP3与VP7蛋白可装配成核心样颗粒

    王健伟,姜慧英,屈建国,赵同兴,洪涛

    将蓝舌病毒 (BTV) 13型 S7与L3基因同时插入杆状病毒双表达载体 pFastBacDual,获得重组杆状病毒rvBacBTVP37。该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达BTV13VP3与VP7蛋白 ,可以高效自动装配出 2 0面体的 6 0~ 70nm空心颗粒。分析表明 ,所获颗粒为空心的BTV核心样颗粒 (CLP) ,其成分为VP3与VP7,不含BTV其它任何蛋白与核酸。这种装配需要VP3与VP7的共同参与 ,二者缺一不可 ,它们均含有相互作用与装配的信息。本研究为BTV病毒样颗粒的装配打下了基础 ,并为BTV结构与功能研究提供了良好模型。

    2000年02期 131-135页 [查看摘要][在线阅读][下载 108k]
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  • 同时表达蓝舌病毒四个主要结构蛋白可装配成病毒样颗粒

    王健伟,姜慧英,屈建国,赵同兴,洪涛

    为研制蓝舌病毒 (bluetonguevirus ,BTV)基因工程疫苗和进一步研究BTV结构与功能的关系 ,对BTV病毒样颗粒 (VLP)的装配进行了研究。同时在昆虫细胞中表达BTV主要结构蛋白VP7、VP3、VP2与VP5 ,将细胞裂解液超速离心纯化后 ,发现主要存在两种形态的颗粒 :一种与前文报道的病毒核心样颗粒 (CLP)相同 ,直径约为 6 0nm~ 70nm ,蛋白壳厚 10nm~ 15nm ;另一种大小为 70nm~ 80nm ,蛋白壳厚 2 0nm~ 30nm ,与完整空心BTV颗粒形态一致。这些颗粒是由VP2 /3、VP5与VP7组成的 ,不含核酸和其它任何BTV蛋白 ,并且具有诱导中和抗体的活性和血凝活性 ,与预期结果一致。以BTV13VP7与VP3蛋白为内壳 ,以与其基因相比变异较大的BTV10VP2、VP5为外壳 ,成功地实现了VLP装配 ,提示BTV颗粒内壳与外壳蛋白间相互作用引发装配的区域可能是保守的 ,VP2蛋白的高变性对其与内壳间的相互作用并无影响

    2000年02期 136-140页 [查看摘要][在线阅读][下载 107k]
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  • 牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究

    刘佳建,王世珍,张莉,乔文涛,陈启民,耿运琪

    牛泡沫病毒 (BFV)具有复杂的基因组结构 ,其基因组除编码反转录病毒共有的 gag、pol、env 三个结构基因之外 ,在其env和 3′LTR之间有两个重叠的读码框 (ORF - 1和ORF - 2 ) ,编码Borf- 1、Borf- 2、Bet等多种调节蛋白 ,其中Borf- 1(2 49aa)为BFV反式激活因子 (Tas)。为研究Borf - 1的结构与功能 ,Borf - 1在LTR上的应答元件及作用机制 ,Borf- 2、Bet等调节蛋白在BFV基因表达调控中的作用 ,本研究以本室分离鉴定的BFV30 2 6中国毒株为材料 ,克隆Borf- 1等基因片段构建系列质粒 ,与带有luc报告基因的LTR系列缺失质粒共转染 ,作瞬时表达分析。结果表明 ,Borf- 137aa~ 114aa、C端 2 18aa~ 2 49aa为其行使激活功能所必需区域 ;Tas在BFVLTR上的应答元件 (TRE)位于 - 983/ - 6 6 8(TREI)、- 470 / - 140 (TREII)和RU5区 ,其中TREI、TREII均位于U3区 ,为正调控元件 ,RU5区为负调控元件。进一步研究证明 ,TREII能在异源启动子 (BIVLTR)上行使功能 ,且与其自身的方向无关 ,类似于增强子元件。此外还发现 ,RU5区具有抑制其下游基因表达的功能 ,该区在异源启动子 (BIVLTR)之后使其下游基因表达量降低。计算机分析结果表明 ,BFVRU5区的负调控作用可能是因为该区mRNA具有稳定的二级结构 ,从而抑制其下游基因的表达

    2000年02期 141-149页 [查看摘要][在线阅读][下载 114k]
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  • 中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析

    王家富,张楚瑜,傅烈振,黄茜华,张芄伟

    根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定了其核苷酸序列。结果显示 ,所克隆的NS 2 - 3基因长 2 96 4个核苷酸 ,编码 988个氨基酸。用DNASIS和PROSIS软件分析表明 ,该基因具有丝氨酸类蛋白酶活性及含有解旋酶超家族特征性保守序列。核苷酸序列同源性分析表明 ,HCLV与国外报导的 8株HCV毒株“C”、Riems、ALD、GPE、Glentorf、CAP、Brescia和Alfort株NS 2 - 3基因核苷酸序列同源性分别为 99%、99%、96 %、96 %、95 %、95 %、94%和 86 % ,推导的氨基酸序列同源性分别为 99%、99%、98%、98%、98%、97%、97%和 95 % ,氨基酸序列的高度同源性表明了NS 2 - 3是猪瘟病毒中高度保守的蛋白质之一 ,这与该基因产物参与病毒复制及多聚蛋白前体加工过程中的重要作用相对应。

    2000年02期 150-154页 [查看摘要][在线阅读][下载 103k]
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  • 犬瘟热病毒细胞膜受体的鉴定

    郭爱珍,陆承平

    犬瘟热病毒 (CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解 ,利用病毒铺覆蛋白印迹技术 (VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株 (CDV -onderstepoort)的细胞受体。结果发现 ,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质 ,即高分子量组蛋白质 (12 7kD、12 0kD、110kD)与低分子量组蛋白质 (2 7kD和 30kD)。这些CDV结合蛋白组分的性质及在CDV致病中的作用有待进一步研究。

    2000年02期 155-157页 [查看摘要][在线阅读][下载 42k]
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  • 香蕉束顶病毒基因组I的克隆及序列分析

    腊平,蔡文启,方荣祥

    以中国漳州地区感染BBTV的香蕉组织总DNA为模板 ,根据我国台湾地区BBTV分离物基因组I序列 ,设计并合成了一对引物 ,通过PCR扩增出约 5 0 0bp的片段。利用pBluescriptⅡSKT -载体获得此片段的克隆 ,经测序表明为BBTV组分Ⅰ的部分序列。由已测知的BBTV基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物 ,以我国漳州的感染BBTV香蕉组织总DNA为模板 ,通过PCR扩增出约 1.1kb的片段。利用pBluescriptⅡSKT -载体获得 1.1kb片段的克隆。测序结果表明漳州BBTV基因组Ⅰ含有 110 4个核苷酸 ,其序列与澳大利亚及我国台湾地区的BBTV基因组Ⅰ核苷酸同源性分别为 89%、96 % ,并对此序列的功能进行了推测及讨论。

    2000年02期 158-161页 [查看摘要][在线阅读][下载 52k]
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  • 马铃薯Y病毒NIb复制酶基因在转录水平介导的相对广谱抗病性

    鲁瑞芳,吕鹏飞,彭学贤

    在大肠杆菌中表达了马铃薯Y病毒中国分离物 (PVY -C)复制酶NIb基因 ,并制备了其抗血清。利用PCR定点突变方法使 NIb 基因移码 - 1位 ,构建了移码 - 1位 NIb 基因 (UN)的植物表达载体。通过土壤农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA44 0 4)介导转化烟草NC89,获得 5 1株再生植株。对再生植株的分子检测结果表明 ,转基因烟草中检测到UN基因相应的RNA转录产物 ,推测该基因已经整合到烟草染色体中。攻毒试验发现转UN 基因烟草 (T0 代 )对两个PVY株系和烟草蚀纹病毒的抗病性与转全长、缺失 5′端 381bpNIb 基因烟草 (T2 代 )的相同。Western印迹试验结果表明 ,在本试验检测水平上 ,在转基因T2 代烟草中未检测到NIb基因的表达产物。实验结果支持PVY -C复制酶NIb基因在转录水平上介导相对广谱抗病性的假说。

    2000年02期 162-166页 [查看摘要][在线阅读][下载 75k]
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  • 棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒在细胞系中持续感染的建立和特性

    钟江,乐云仙,苏德明

    棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒 (Helicoverpaarmigerasinglenucleocapsidnucleopolyhedrovirus,HaSNPV)能够在棉铃虫蛹卵巢细胞素SFE -HA - 82 12中有效复制 ,引起细胞解体死亡。通过培养HaSNPV感染后残存的细胞 ,建立了一株持续感染的细胞。该细胞在传代培养的 6个月时间内 (约 2 5次传代 ) ,持续地释放有感染力的病毒粒子 ,培养液中病毒的效价多在 10 4 TCID50 /ml上下 ,同时有一小部分细胞 (1%左右 )中形成多角体 ,释放病毒的细胞占总细胞数的 1 0 %~ 3 8%。持续感染细胞的生长特性与原细胞系相比有一定的变化 ,对HaSNPV感染的敏感性有所降低。另一方面 ,持续感染细胞所释放的病毒对SFE -HA - 82 12及棉铃虫幼虫的感染力也有所降低。讨论了持续感染的可能机制。

    2000年02期 167-172页 [查看摘要][在线阅读][下载 123k]
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  • 丙型肝炎病毒NS2-3蛋白酶基因在Sf9昆虫细胞中的表达

    范涛,谢尧,梁庆华,陶其敏

    2000年02期 173-175页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 庚型肝炎病毒基因组RNA转录体恒河猴肝内注射感染的初步研究

    朱分禄,戚中田,朱诗应,任浩,邵力

    2000年02期 176-178页 [查看摘要][在线阅读][下载 38k]
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  • 利用酵母双杂交系统研究人血管内皮生长因子受体Flt-1的配体结合域

    马骊,张智清,曾革非,周小明,陈爱君,姚立红,王小宁

    2000年02期 179-181页 [查看摘要][在线阅读][下载 41k]
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  • 中国对虾非包涵体型杆状病毒核衣壳的分离纯化

    徐洪涛,朴春爱,王雷,杨朵,屈建国,张宝云,候云德

    2000年02期 182-184页 [查看摘要][在线阅读][下载 45k]
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  • 香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆和序列分析

    何自福,李华平,肖火根,范怀忠

    2000年02期 185-188页 [查看摘要][在线阅读][下载 73k]
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  • 铜绿蝇蜕皮激素受体在杆状病毒载体系统中的表达

    代小江,Huang Q Sue,庞义

    2000年02期 189-192页 [查看摘要][在线阅读][下载 50k]
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  • 犬瘟热疫苗弱毒融合蛋白基因5'端的序列特点

    李金中,何洪彬,夏咸柱,殷震,徐长春,金宁一

    2000年02期 192页 [查看摘要][在线阅读][下载 11k]
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  • 对Prion译名的几点意见

    方元

    2000年02期 193页 [查看摘要][在线阅读][下载 11k]
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