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禽网状内皮组织增殖病毒IBD-C1605株经胎粪外泌体介导感染并逃逸抗体抑制
傅子豪;耿瑞强;任志浩;崔文平;王一新;常爽;赵鹏;目的 禽网状内皮组织增殖病毒（Reticuloendotheliosis virus, REV）是一种经过鸡胚垂直传播的免疫抑制性病毒，感染REV的雏鸡胎粪以及粪便中可持续排出病毒造成水平传播，即使在一些母源抗体阳性鸡群也可以介导水平传播，本研究的目的便是验证雏鸡胎粪中存在REV感染相关外泌体并介导形成水平传播和免疫逃逸。方法本研究将REV野毒株IBD-C1605株接种鸡胚后从出壳雏鸡检测为REV阳性的雏鸡胎粪中提取外泌体，进行纳米颗粒追踪分析、电镜观察、基因组测序和蛋白质组分析。本研究将REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞，以验证其逃避抗体中和的能力。本研究将REV游离病毒或REV阳性雏鸡胎粪外泌体分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡，观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标。结果 本研究证实了REV阳性雏鸡胎粪外泌体中包含REV完整基因组成分和3种主要蛋白。REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞，证实在细胞上检出REV高效感染，说明REV阳性雏鸡胎粪外泌体可介导REV逃避抗体中和形成体外感染。将REV游离病毒分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡，观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标，证实REV游离病毒接种母源抗体阴性雏鸡引起严重的体重增长迟缓、肝脏脾脏肿大，而接种母源抗体阳性雏鸡则因为中和作用而显著降低了对鸡的致病性。但REV阳性雏鸡胎粪外泌体按照上述操作接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡后，两组鸡的相关致病指标无显著差异，证明母源抗体对外泌体介导的感染无法发挥有效抑制作用。结论 本研究解析了REV阳性胎粪外泌体并证实其可作为传染途径在体内外造成有效感染，其感染能力不受抗体的限制，推测胎粪外泌体是介导REV形成早期水平传播和突破抗体抑制的途径之一。
柯萨奇病毒A16小鼠适应过程中VP1位点突变与复制动力学的相关性研究
李慧洁;王蕊;李冀琛;段伟;梁钰材;孙强;张勇;目的 阐明柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16, CVA16)在跨宿主适应过程中毒力增强的分子基础，并构建从母株（P0株）到小鼠适应株（P5株）的表型与遗传演化框架，为解析其宿主适应性机制提供理论依据。方法 以临床分离的CVA16母株（P0株）为起始毒株，通过在ICR乳鼠体内连续传代构建小鼠适应性毒株，建立P0株至P5株的完整演化谱系。利用全基因组测序技术比较P0株与P5株的遗传变异差异，结合RD细胞感染实验与乳鼠攻毒实验，系统评估不同代次毒株的体外复制能力、体内致病性及靶器官组织病理学改变。通过病毒结合试验与内化试验，解析CVA16毒力增强的可能分子机制。结果 基因组比对分析明确了P0株与P5株间的变异特征，其中VP1的关键突变定位于病毒入侵相关功能区域。体内外表型验证显示，P5株相较于P0母株呈现显著增强的复制能力与致病性：在RD细胞中可诱导更高水平的病毒颗粒产生及病毒RNA复制；对乳鼠攻毒后，能引发快速体重下降、后肢麻痹等典型症状，且致死率达100%；在乳鼠骨骼肌、肺和脊髓中，病毒滴度显著升高，并造成更严重的组织炎性浸润与结构损伤。机制研究证实，P5株毒力升高主要与病毒内化效率及后续胞内复制能力的提升有关，而病毒与宿主细胞的初始结合能力无显著差异。结论 本研究揭示CVA16在小鼠适应过程中，其毒力增强是由多层次遗传变异驱动的结果，其中病毒进入效率和胞内复制能力的提升是关键调控因素。本研究为理解CVA16跨宿主适应机制及神经系统致病机理提供了试验证据，也为靶向病毒结构功能域的抗病毒药物研发及疫苗设计奠定了基础。
15种中药体外抗PRRSV-2的作用研究
熊倩;陆小玉;梁康丽;王鹏程;刘冰洁;米雪董;温贵兰;目的 针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respirator syndrome virus, PRRSV）变异快、易与疫苗株重组且现有疫苗防控效果不理想等问题，通过体外试验筛选具有抗PRRSV活性的中药，并初步探究其抗病毒作用机制，以期为中药抗PRRSV研究奠定基础。方法 选取15种清热解毒类中药，采用体外细胞模型，通过CCK8法测定各中药在Marc-145和PAM-CD163细胞中的最大安全浓度，结合细胞病变观察、TCID50、RT-qPCR、Western blot及间接免疫荧光技术，综合评价中药抗病毒效果。对效果显著的中药进一步运用网络药理学和分子对接技术分析其抗PRRSV的活性成分、作用靶点及潜在机制。结果 综合两种细胞模型，共筛选出木芙蓉叶、卷柏、肿节风、野菊花、银杏叶和贯众这6种共同有效的中药。选取抑制效果最佳的肿节风进行深入分析，网络药理学结果显示，其主要活性成分为槲皮素，可作用于IL-6、IL-1β、IL-10、IFN-γ、TGF-β1、CASP3和CCL2等关键靶点。这些靶点显著富集于IL-17信号通路及细胞因子-细胞因子受体相互作用等免疫炎症相关通路，主要参与慢性炎症反应、免疫应答调控及细胞分化等生物学过程。分子对接结果表明槲皮素与核心靶点具有较强的结合能力。结论 本研究成功筛选出6种具有抗PRRSV活性的中药，其中肿节风抑制效果最佳，其活性成分槲皮素通过多靶点、多通路的协同作用调控宿主免疫与炎症反应，从而有效抑制病毒复制，为中药抗PPRSV研究提供了重要理论依据。
2023–2024年西藏自治区健康人群肠道病毒监测：柯萨奇B组病毒流行强度上升
邵珂欣;红梅;肖梦怡;周蕾;杨澜;赵营颖;肖凯涛;朱成林;林婕;张勇;邢薇佳;肖金波;目的 本研究旨在系统评估2023-2024年西藏自治区健康儿童肠道病毒（Enterovirus,EV）的流行特征，为区域性病毒监测和疾病预防提供依据。方法 本研究纳入456份健康儿童粪便样本进行分析，通过实时荧光聚合酶链反应（Real-time reverse-transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR）进行EV筛查，采用逆转录PCR对阳性样本扩增并测序VP1区，并对测定的序列进行分子分型及系统发育分析。结果 EV总体检出率为21.71%(99/456)，分属Enterovirus alphacoxsackie、Enterovirus betacoxsackie和Enterovirus coxsackiepol，其中Enterovirus betacoxsackie占比最高（54.55%,54/99）。主要检出血清型包括CoxsackievirusA4(CVA4,26/99,26.26%)、Coxsackievirus B5(CVB5,23/99,23.23%)、Coxsackievirus B4(CVB4,14/99,14.14%)、Coxsackievirus B2(CVB2,10/99,10.10%)及Poliovirus type 3(PV3,9/99,9.09%)等。EV感染集中于3–5岁儿童阶段，性别差异无统计学意义。地区分布结果表明，拉萨市检出的EV型别最为丰富，日喀则及阿里地区以CVA4和CVB组为主，山南市CVB5型比例最高。系统发育分析显示，西藏自治区分离的CVB2、CVB4和CVB5均属各自血清型的D基因型，与国内外流行株具有较近系统进化关系。结论 本研究揭示了2023–2024年西藏自治区EV的流行现状，结合2020-2022的既往监测数据，发现CVB组病毒活跃度有所抬升，亟需对该地区CVB组病毒进行持续性监测和应对性防控。
中华蜜蜂20-蜕皮激素单氧酶通过调控宿主免疫影响CSBV复制的研究
戚杨;黄滢铄;刘宇明;安婷;李旭;宋岱宗;马跃宇;郭亚茜;李明;费东亮;马鸣潇;目的 通过甲基化测序结合生物信息学分析，筛选感染与未感染CSBV中蜂幼虫的差异表达基因，鉴定出中华蜜蜂20-蜕皮激素单氧酶基因（20-Ecdysone Monooxygenase, 20emo），探究其在中蜂感染中华蜜蜂囊状病毒（Chinese sacbrood virus, CSBV）过程中的功能，为CSBV防控提供潜在分子靶点。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)验证20emo的表达变化，进行时空表达分析；利用RNAi干扰技术敲低20emo，检测CSBV复制及相关基因表达；对20emo基因序列及编码蛋白进行分析。结果 筛选出8个激素合成分泌相关差异基因，20emo在CSBV感染早期的表达被显著抑制；20emo在中蜂不同发育阶段表达差异显著，成蜂肠组织表达量最高；敲低20emo后CSBV复制受到抑制，IMD、TOLL免疫通路相关基因表达上调，营养应激相关基因表达也发生改变；20emo编码蛋白属细胞色素P450家族，与西方蜜蜂同源蛋白功能相近。结论 20emo可能通过调控中蜂激素平衡与免疫应答影响CSBV复制效率，为揭示蜜蜂生长发育基因的抗病毒作用提供新视角，也为CSBV防控提供了潜在分子靶点。
巨细胞病毒感染在炎症性肠病中的表现、检测、治疗的研究现状
刘印;于玲;范艺缤;炎症性肠病（Inflammatory bowel disease, IBD）在我国的患病率呈显著上升趋势。免疫抑制疗法与靶向生物制剂的使用日益普及，虽有效控制了疾病活动，却也显著提高了机会性感染的发生风险。巨细胞病毒（Cytomegalovirus, CMV）作为常见的机会性病原体，其感染可加剧肠道炎症、导致治疗反应不佳，并可能增加手术干预几率及患者死亡率。因此，及时的病原学检测和适时的抗病毒干预对改善临床预后至关重要。本文总结了巨细胞病毒感染在IBD中存在CMV感染的表现、检测、治疗的研究现状，有助于进一步探讨IBD中CMV病毒感染治疗的新思路。
非洲猪瘟病毒CP312R蛋白线性抗原表位鉴定
张龚蕊;司安琪;刘田雨;巩明霞;张仕强;张永强;王志亮;目的 为深入探究非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）CP312R蛋白的生物学特性，通过2株与CP312R蛋白发生特异性反应的单克隆抗体，识别出该蛋白的一个线性抗原表位，通过合成多肽与ASF阳性临床猪血清反应，确认阳性血清中含有该线性抗原表位的抗体。方法 通过原核表达一系列CP312R蛋白截短体多肽，使用此前制备的两株单克隆抗体进行Western blot试验，鉴定出单克隆抗体结合位点。进一步诱导表达截短重叠蛋白，与两株单克隆抗体进行Western blot反应，鉴定该蛋白的线性抗原表位。继而合成包含该抗原表位的多肽，与ASF临床阳性猪血清进行ELISA反应。结果 初步鉴定出这两株单克隆抗体结合位点为117GLTVKKNEQG126氨基酸，进而通过截短重叠蛋白鉴定出CP312R蛋白1个核心线性抗原表位，即118LTVK121。对ASFV不同基因型比对发现，该位置在ASFV I/II型重组毒株和基因I型、II型、IV型、IX型、XX型、XXII型中高度保守。包含该抗原表位的多肽与ASF临床阳性猪血清进行ELISA反应，显示血清中含有该抗原表位的抗体，证明猪感染ASFV后可以产生针对该抗原表位的抗体。结论 上述研究结果有助于了解ASFV CP312R的抗原表位，为开发更精准的ASF血清学诊断方法和设计基于CP312R蛋白的疫苗候选抗原提供了理论依据。
肺癌患者HPV感染的高危因素及其与VEGF,IL-1β和免疫指标的关系
曾华珺;强珂皎;杨玲玲;余龙海;曲柳;李渊;目的 探讨肺癌患者人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)感染的高危因素及其与血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和免疫指标的关系。方法 回顾性选取2024年3月至2025年9月本院非小细胞肺癌(Non-small-cell lung Cancer,NSCLC)患者150例为研究对象，根据HPV感染情况分为HPV阳性组、HPV阴性组。统计NSCLC患者HPV感染情况，收集患者血清VEGF、IL-1β、CD3+、CD4+/CD8+等临床资料。单因素及Logistic回归分析NSCLC患者HPV感染的影响因素。限制性立方样条图(Restricted cubic spline,RCS)分析血清VEGF、血清IL-1β、免疫指标与患者HPV感染的关系。受试者工作特征曲线(Receiver operating characteristic curve,ROC)曲线评估血清VEGF、血清IL-1β、免疫指标对HPV感染的预测效能。结果 150例NSCLC患者HPV阳性率32%(48/150)，感染以HPV 16亚型58.33%(28/48)、HPV 18亚型22.92%(11/48)为主。HPV阳性组吸烟史、低分化程度比例、血清VEGF、IL-1β水平高于HPV阴性组，CD3+、CD4+/CD8+水平低于HPV阴性组(P<0.05)。Logistic回归分析显示，吸烟史、分化程度、血清VEGF、IL-1β、CD3+、CD4+/CD8+是NSCLC患者HPV感染的影响因素(P<0.05)。RCS分析显示，随着血清VEGF、IL-1β的升高，NSCLC患者HPV感染风险显著增加，随着CD3+、CD4+/CD8+水平的提高，NSCLC患者HPV感染风险显著降低(P<0.05)。血清VEGF、IL-1β、CD3+、CD4+/CD8+联合预测HPV感染的效能最高，曲线下面积(AUC)为0.968。结论 吸烟史、分化程度、血清VEGF、IL-1β、CD3+、CD4+/CD8+水平是NSCLC患者HPV感染的影响因素，且VEGF、IL-1β、CD3+、CD4+/CD8+与患者HPV感染存在剂量-效应关系，上述指标联合预测HPV感染的效能最高。
慢性乙型肝炎患者HBVpgRNA,HBsAg及IL-21与长效干扰素停药后复发的关系研究
陈冲;张敏敏;目的探究慢性乙型肝炎（ChronichepatitisB,CHB）患者血清中乙型肝炎病毒前基因组RNA(HBVpgRNA)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）及白细胞介素-21(IL-21)水平与长效干扰素（PEG-IFN）停药后复发的关联。方法 选取2022年6月至2024年6月我院收治的接受PEG-IFN治疗后停药的CHB患者102例，根据停药后1年是否复发分为复发组（34例）和未复发组（68例）。采用多因素Logistic回归分析确定独立危险因素，并评估模型效能。结果 多因素分析显示，ALT、HBV DNA、HBVpgRNA、HBsAg及IL-21是CHB患者PEG-IFN停药后复发的独立危险因素（P<0.05）。列线图模型的ROC曲线AUC为0.984(95%CI:0.958～1.000)；校准曲线的HL拟合优度检验显示（χ2=10.689,P=0.220），提示预测值与实际复发情况一致性良好；决策曲线显示模型在大于0.05的阈值概率范围内具有正向净收益。结论 CHB患者PEG-IFN停药后复发与血清HBVpgRNA、HBsAg及IL-21水平密切相关，三者联合ALT、HBV DNA构建的预测模型可有效评估复发风险。
不同佐剂猫泛白细胞减少症亚单位疫苗安全性及效力比较研究
孙鹏;谭越;崔晓霞;祝洪伟;李蕴慧;陈玉霞;夏娜;王瑜;郭伟伟;楚电峰;目的 为评估不同佐剂对猫泛白细胞减少症(FPL)基因工程亚单位疫苗的安全性和免疫效力的影响，方法本研究以杆状病毒表达的猫泛白细胞减少症病毒(FPV)VP2蛋白为基础抗原，分别以氢氧化铝胶、Montanide ISA201、MONTANIDETMGel 02和卡波姆971P为佐剂制备疫苗，评价其安全性及免疫保护效果。结果 安全性试验结果显示，氢氧化铝胶佐剂组、MONTANIDETMGel 02佐剂组试验猫体温、临床症状、注射部位观察均未见异常，安全性均良好，但Montanide ISA 201佐剂组和卡波姆971P佐剂组试验猫接种部位均出现大小不等的结节，观察期内未能完全消退，安全性相对较差。效力试验结果显示，在二免后14日，Montanide ISA 201佐剂组诱导的抗体效价明显高于MONTANIDETMGel 02佐剂组和卡波姆971P佐剂组，显著高于氢氧化铝胶佐剂组。攻毒保护实验结果表明，Montanide ISA 201、MONTANIDETMGel 02和卡波姆971P组攻毒后能够提供4/5及以上保护，显著优于氢氧化铝胶佐剂组(2/5)。结论 以上研究表明，Montanide ISA 201佐剂虽可诱导较高抗体水平，但其安全性受限；传统氢氧化铝胶佐剂尽管安全性良好，但其抗体效价和攻毒保护均显著低于其他组；相比之下MONTANIDETMGel02佐剂在安全性和免疫效力方面表现均衡，为猫泛白细胞减少症基因工程亚单位疫苗良好的候选佐剂。