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深度突变扫描在RNA病毒变异风险评估中的应用
唐佳婕;贾永涛;王玲琳;童肖翔;应潇锋;董长征;深度突变扫描（Deep mutational scanning,DMS）是近年发展的一种高通量的评估病毒变异风险的前沿生物技术方法。DMS通过人工突变产生海量的病毒变异体模拟病毒潜在的变异，同时测定变异体的重要表型如受体结合亲和力、免疫逃逸、适应性和耐药性等，评估变异对表型的影响及其风险。DMS需要综合运用病毒突变文库构建、病毒表型测定和深度测序等多种高通量平台，对于平台技术的要求极高。新冠病毒疫情期间，DMS被广泛应用于评估病毒变异对受体结合力和免疫逃逸等表型的影响，全方位地展示了其在表型预测和变异风险评估中的重要作用。本文对DMS在新冠病毒、肠道病毒、流感病毒和HIV等代表性RNA病毒研究中的应用进行综述，帮助认识DMS在RNA病毒变异风险评估中的广阔应用前景。
基于PRV-copGFP的伪狂犬病毒快速中和抗体效价检测方法的建立
李晨雨;马琦;王冰丹;王菲;冯霞;张晓光;李红霞;马晶;郝彦哲;李淑英;本研究开发了一种高效且精准的伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus, PRV）中和抗体效价检测新方法。通过同源重组和CRISPR-Cas9技术，将桡足纲绿色荧光蛋白（copepod Pontellina plumata Green Fluorescent Protein,copGFP）基因表达盒精确嵌入PRV基因组的UL40/41区域，经过多轮筛选与纯化，成功构建了重组病毒PRVcopGFP。生长特性对比实验表明，PRV-copGFP与野生型PRV-Bartha之间无显著差异（P>0.05）。借助CTLImmunoSpot?S6仪器计数表达copGFP的细胞数目，确定了最佳观测时间和最佳病毒滴度。该方法可精确计算中和抗体效价，并通过传统噬斑减少中和试验（Plaque reduction neutralization test, PRNT）进行验证。与传统方法相比，本检测方法将检测窗口缩短至10h，且通量显著提升。本方法在快速评估PRV中和抗体效价方面具有显著优势，可为PRV疫苗研发、疾病防控及相关研究提供有力的技术支持。
家蚕对核型多角体病毒抗性的研究进展
桂涛;欧阳桂;郑昕;陈安利;钱荷英;家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV）是家蚕的主要病原，其引发的家蚕血液型脓病严重危害蚕桑产业发展。研究家蚕对BmNPV的抗性机制有利于防控脓病，对蚕业发展具有重大意义。本文对家蚕抗BmNPV的遗传规律、品种选育、主效基因连锁定位、相关基因/蛋白发掘以及免疫应答机制等方面研究进展进行了综述，提出了图位克隆鉴定家蚕抗BmNPV主效基因，并对其功能和涉及的通路进行研究，将会是今后研究的重点，而优化家蚕参考基因组和采取新策略排除微效基因干扰是定位出该主效基因的必要之举。
人乳头瘤病毒相关宫颈癌中DNA甲基化的研究现状
王伟;程书书;朱婷婷;宫颈癌与人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）联系紧密，持续感染高危HPV是宫颈癌的主要诱因。表观遗传的重要修饰方式DNA甲基化在基因转录中发挥关键作用，基因甲基化水平异常与细胞癌变联系紧密。甲基化可表现在宿主细胞基因中，亦可表现在HPV病毒基因中，两者相互影响，在癌变进程中起着关键作用。本文总结了HPV基因甲基化改变，综述了宿主基因甲基化及与HPV基因甲基化关联，有助于进一步探讨宫颈癌的治疗新思路。
MPXV的流行动态、遗传演化分支及其公共卫生安全挑战
景伟;陈国华;房永祥;何小兵;景志忠;猴痘（Monkeypox,Mpox）是由猴痘病毒（Mpox virus,MPXV）感染引起的一种以发热、皮疹和淋巴结肿大为特征的病毒性人兽共患病，近3年内两次被WHO认定为“全球关注的突发公共卫生事件”，分别由MPXV进化亚支Ⅱb和Ⅰb毒株谱系引起，并在世界范围内暴发流行，其中MPXV进化亚支Ⅱb毒株曾在我国输入性感染和本土隐秘性传播，波及全国至少25个省市区，目前MPXV进化亚支Ⅰb毒株也输入我国，并造成密切接触感染形成二代病例，这对我国公共卫生安全构成了巨大的威胁和挑战。该文通过对MPXV的流行动态以及不同遗传进化亚支毒株和生物学特性的介绍，探讨其从动物到人类适应后在人际间共流行的趋势和危害，为Mpox防控和公共卫生风险应对提供依据。
黄芩素拮抗单纯疱疹病毒1型诱导的角膜新生血管生成的功能和机制研究
李昊洋;张风梅;刘莉;刘会荣;杨舒然;本研究的目的是探究黄芩素拮抗单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus 1, HSV-1）诱导的角膜新生血管生成的功能和机制。将人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）随机分为阴性对照（Mock）组、HSV-1组、黄芩素低剂量（25μmol·L~(-1)）组、黄芩素高剂量（100μmol·L~(-1)）组，除对照组外的其余各组细胞均用感染复数（MOI）为1的HSV-1感染24h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估不同剂量（12.5、25、50、100μmol·L~(-1)）黄芩素处理或不同滴度（0.1、1、10 MOI）HSV-1感染24h后的细胞毒性反应，并检测12.5、25、50、100μmol·L~(-1)黄芩素处理24h后对HSV-1诱导的HUVECs活力的影响。采用Transwell实验检测各组HUVECs的迁移；逆转录定量PCR(RT-qPCR)用于检测各组HUVECs中血管内皮生长因子A(VEGFA)、血小板-内皮细胞黏附分子1(PECAM1/CD31)、白细胞介素-17A(IL-17A)的mRNA表达水平。采用分子对接分析验证黄芩素与IL-17A蛋白之间的结合活性。本实验结果显示，与Mock组相比，黄芩素处理组的HUVECs活力未见显著变化；而HSV-1感染组的HUVECs活力和迁移显著增多，VEGFA、CD31和IL-17的mRNA表达显著上调。与HSV-1组相比，黄芩素低剂量和高剂量干预处理均抑制了HSV-1诱导的HUVECs活力和迁移，并降低了VEGFA、CD31和IL-17的mRNA表达。此外，分子对接分析表明，黄芩素能够与IL-17A蛋白稳定结合，结合亲和力=-7.0 kcal·mol-1。总的来说，我们的研究表明，黄芩素通过靶向抑制IL-17A通路抑制HSV-1诱导的HUVECs血管形成。
西尼罗病毒和基孔肯雅病毒双价重组DNA疫苗的构建及在小鼠中诱导的免疫应答研究
舒畅;李梦哲;翟程程;赵志敏;单徐畅;邴佳洛;祁振勇;邓瑶;翟德胜;谭文杰;构建西尼罗病毒（West nile virus,WNV）与基孔肯雅病毒（Chikungunya virus, CHIKV）的新型双价重组DNA疫苗并在小鼠中评价其免疫原性。本研究以WNV的prM-E蛋白和CHIKV的C-E3-E2-6K-E1或E3-E2-6K-E1蛋白为靶抗原，构建了WNV和CHIKV双价重组DNA疫苗VRC-PrME-2A-CE和VRC-PrME-2A-E。转染HEK293T细胞后通过Western blot验证目的蛋白的表达。两剂次同源免疫小鼠，通过ELISA和Elispot进行体液与细胞免疫检测，并与表达WNV-XJ11129-3株的prM-E蛋白的WNV单价DNA疫苗VRC-prME和表达CHIKV 181/clone25的C-E3-E2-6K-E1蛋白的CHIKV单价DNA疫苗VRC-CE进行比较。结果显示，双价DNA疫苗构建成功。重组双价DNA疫苗单剂或加强免疫小鼠后均能诱导较高水平抗原特异性IgG，且与单价疫苗滴度相当。细胞免疫检测结果显示：加强免疫后VRC-PrME-2A-CE表现出针对CHIKV E1和CHIKV E2最高的分泌IFN-γ的T细胞水平，但与单价疫苗VRC-CE无统计学差异。本研究成功构建两款针对WNV和CHIKV的双价DNA疫苗，免疫小鼠后可以诱导产生良好的体液和细胞免疫应答，本研究为新型WNV和CHIKV双价基因工程疫苗的研发应用提供了实验参考。
嵌合广谱中和抗体工程化外泌体的构建及中和HIV病毒活力测定
周颖;董廷;高阳;吕启航;马妍;周梦莹;张晓龙;顾潮江;获得性免疫缺陷综合征（Acquired immunodeficiency syndrome,AIDS）是一种由人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus,HIV）引起的，可造成免疫系统衰竭的高致命性的传染病。尽管高效抗逆转录病毒疗法（Highly active antiretroviral therapy,HAART）可以最大限度地抑制病毒的复制，但由于不能清除CD4+T细胞中的HIV潜伏病毒库，因此患者需要终身服药。近年来，广谱抗HIV中和抗体在HIV‐1感染的阻断及临床免疫治疗中效果显著，然而，抗体治疗仍面临一些局限性，例如无法有效通过血脑屏障等生物屏障、长期使用可能导致免疫抑制，以及半衰期较短。外泌体作为新兴的药物递送系统，具有低免疫原性、能够跨越生物屏障、靶向能力广泛且精准并能够在体内持续释放治疗分子等优势，近年来迅速成为研究热点。本研究发现瞬时转染HIV广谱中和抗体质粒的HEK293F细胞表达并分泌抗体的同时，也会产生嵌合广谱中和抗体的外泌体，接着探究广谱中和抗体在外泌体上的含量并通过BLI验证与HIV‐1 gp120抗原蛋白的亲和力，随后测定携带copGFP报告基因的HIV假病毒滴度，并与抗体外泌体孵育后再感染TZM‐bl细胞，通过荧光强度定量及萤光素酶活性定量分析计算出抗体外泌体的中和活力大小。结果表明，HIV广谱中和抗体成功嵌合到HEK293F细胞分泌的外泌体上，进一步研究发现，VRC EXO对国内流行的CRF‐07BC毒株的gp120抗原蛋白具有较高的亲和力，同时，相同质量抗体条件下，外泌体携带的抗体对NL4‐3和Q23假病毒毒株的中和活力比游离状态的抗体高2.3‐3.2倍。本研究成功构建了嵌合HIV广谱中和抗体外泌体系统，相较于传统抗体疗法，该平台在靶向递送、免疫原性、跨生物屏障能力以及治疗效果的广泛性等方面均展现出更大的优势，为HIV治疗提供了新的思路和潜在的治疗方案。
朊病毒感染所致血脑屏障损伤及益生菌对血脑屏障保护效应的研究
王远;梁冬林;张卫卫;高利萍;肖康;董小平;石琦;朊病毒病是由朊病毒蛋白异常折叠并沉积于脑组织引发的神经退行性疾病，其病理特征包括海绵状空泡样变性，神经元丢失和胶质细胞增生等，导致快速进展性痴呆、肌阵挛和无动性缄默等。本研究利用动物和细胞模型，通过Western Blot和免疫组化等方法，发现朊病毒感染显著降低了紧密连接蛋白Claudin-5和ZO-1的表达，表明血脑屏障（Blood-brain barrier, BBB）结构受损。进一步研究显示，益生菌（丁酸梭菌和婴儿双歧杆菌）及其代谢产物短链脂肪酸（Short-chain fatty acids, SCFAs）处理可显著增加感染仓鼠脑组织中Claudin-5和ZO-1的表达，改善BBB损伤。利用免疫组织荧光法揭示Claudin-5和ZO-1主要表达于神经元，提示神经元在维持BBB功能中可能起关键作用。本研究旨在通过探究朊病毒感染所致血脑屏障损伤及益生菌及SCFAs对BBB的保护效应，揭示了朊病毒感染导致的BBB损伤机制，同时也为益生菌和SCFAs在神经退行性疾病治疗中的应用提供理论依据。
山东省2022-2024年蚊虫中乙脑病毒的感染状况和基因特征分析
林小娟;程允堂;袁心雨;王萌萌;徐爱强;许晓杰;陶泽新;为了解蚊虫中乙脑病毒的感染状况，掌握其遗传变异特征，我们于2022-2024年期间，每年8月份在山东省7个监测点的猪圈和牛圈中使用手持吸蚊器或紫外诱蚊灯两种方式捕捉蚊虫，将其分类计数后，将50只左右蚊虫作为一份样本进行分管研磨，提取总RNA，使用荧光定量PCR进行乙脑病毒核酸检测，阳性样本进行乙脑病毒PrM基因和E基因的逆转录PCR扩增、Sanger测序和序列分析。研究期间采集7种蚊虫61 706只，其中三带喙库蚊35410只（57.39%），骚扰阿蚊13 172只（21.35%），淡色库蚊10 043只（16.28%），为三大优势蚊种。将所有蚊虫分为1270份样本进行检测，共检出乙脑病毒核酸阳性蚊虫样本45份，其中38份来自三带喙库蚊，4份来自骚扰阿蚊，3份来自中华按蚊，其他蚊种未检出阳性。2022、2023、2024年蚊虫乙脑病毒的最小感染率分别为0.64‰、1.42‰、0.29‰。PCR产物测序后共获得39条PrM基因和18条E基因序列，系统发生学分析显示本研究乙脑病毒基因序列均属于1b型，但构成了多个分支谱系。研究结果证实山东省流行的乙脑病毒以基因1型为主，研究期间蚊虫中乙脑病毒携带率处于较低水平。