2025年 05期
贵州省南部地区2019-2024年手足口病病原谱构成及流行特征的研究
苏飞;郭军;张富敏;王寅寅;唐小敏;本文主要研究贵州省南部地区2019-2024年手足口病（Hand, foot and mouth disease, HFMD）相关肠道病毒（Enterovirus, EVs）病原构成及其流行特征。回顾性分析2019-2024年贵州省南部地区（黔西南州、黔南州及黔东南州）临床诊断HFMD患者13 791例，并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Reverse transcription quantitative real-time polymerase chain reaction, RT-qPCR）法检测EVs核酸，对主要病原进行分型鉴定，并进行了描述性分析。结果显示，在13 791例HFMD病例中，EVs阳性检出9 055例，阳性率为65.7%。其中，柯萨奇病毒A组6型（Coxsackievirus A6,CVA6）(21.1%)与未分型EVs(20.7%)为主要病原体。重症病例（含死亡病例）中EVs阳性占比为84.8%，以CVA6为主。重症病例主要集中在黔西南地区。地域分布显示，黔东南州未分型EVs检出率显著高于其他两个地区（黔南州与黔西南州）。贵州省南部地区，HFMD主要发生在男性（男女性别比为1.7∶1），且多见于1～4岁的儿童，一般5～6月为HFMD检出阳性的高峰期，但个别年份由于新型冠状病毒疫情的影响，HFMD的流行趋势会有所变化。2019-2024年贵州省南部地区HFMD相关EVs检出率较高，CVA6与未分型EVs已成为成该地区HFMD的主要病原体。未来需进一步关注未分型EVs病原类型及其潜在危害，为该区域HFMD的精准防控及疫苗策略优化提供实验室参考依据。
聚集性发热疫情相关的柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析
尉秀霞;肖金波;李敏;王祎;杨艳娜;吕若然;张勇;本研究针对2024年6月北京经济技术开发区发生的两起聚集性发热疫情，开展了病原学鉴定和基因特征分析，旨在为该类疫情的防控提供实验室依据。研究采集了两起发热疫情中6例病例的咽拭子标本，采用实时荧光定量RT-PCR方法进行呼吸道多种病原体的核酸筛查，结果显示6份标本均为肠道病毒核酸阳性。进一步通过病毒分离、分型鉴定和VP1区进化分析，确认两起疫情均是由柯萨奇病毒A组4型（Coxsackievirus A4, CVA4）感染引起，且均属于C基因型。这一结果表明，应加强肠道病毒尤其是CVA4引起的聚集性发热疫情的监测和防控工作。
北京市丰台区人偏肺病毒聚集性发热疫情的基因特征分析
秦萌;颜涛;王超;侯宛祺;刘春源;张代涛;张彦;对2024年北京市丰台区发生的聚集性发热疫情进行病原鉴定，分析人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）的基因特征，提升我区发热疫情处置能力。收集北京市丰台区聚集性发热疫情的流行病学信息和咽拭子标本，提取核酸后使用实时荧光聚合酶链式反应（PCR）进行常见呼吸道病原体的筛查。筛查为HMPV核酸阳性的标本，采用巢式逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增HMPV F蛋白和G蛋白的核苷酸序列，使用BioEdit及Mega7软件对序列进行分析。144起聚集性发热疫情的594份咽拭子标本中，有8起共27份标本经检测为HMPV阳性，阳性率为4.55%(27/594)。HMPV聚集性发热疫情主要发生在12月份。获得的F蛋白和G蛋白基因序列分型均为B2型。与B2参考株CAN98-75相比，20份本土株F蛋白在第280位点均发生了D（天冬氨酸）→N（天冬酰胺）的变异；8份本土株G蛋白均存在糖基化位点的改变或数量的减少。2024年北京市丰台区发生的HMPV聚集性疫情的基因型均为B2型，有必要加强HMPV的长期监测。
朊病毒感染的细胞及小鼠模型中SUMO1修饰的变化及与朊蛋白相互作用的研究
李纯洁;张卫卫;高利萍;王远;梁冬林;肖康;陈操;董小平;石琦;SUMO化修饰作为关键的蛋白质翻译后修饰，在神经退行性疾病的病理进程中发挥重要作用。朊病毒病是一类由朊蛋白错误折叠引起的致死性神经退行性疾病，其发病机制尚未完全阐明。本研究以朊病毒感染的SMB-S15细胞模型及139A/ME7毒株感染的小鼠模型为研究对象，系统探讨了SUMO化修饰在朊病毒病进程中的动态变化及其与朊蛋白的相互作用机制。通过Western blot、免疫荧光和免疫组化分析发现，朊病毒感染终末期小鼠脑组织及SMB-S15细胞中SUMO1修饰蛋白水平显著降低，而SUMO1的mRNA表达水平却呈现升高趋势。免疫共沉淀实验证实，朊蛋白与SUMO1存在相互作用，且病毒感染后二者的结合显著增强。同时，在不同感染阶段的小鼠脑组织中，SUMO1修饰蛋白水平在朊病毒感染后不同时间点呈先下降，再上升，再下降的趋势。本研究首次揭示朊病毒感染可导致SUMO1修饰蛋白失衡，SUMO1与朊蛋白的异常相互作用可能在朊病毒病的发病机制中发挥关键作用，为深入理解朊病毒病的分子机制提供了新的实验依据和治疗靶点。
2023年广州市荔湾区诺如病毒胃肠炎疫情毒株遗传变异特征分析
肖颖;李利利;谭志熹;刘远;李金松;段招军;为了解2023年广州市荔湾区诺如病毒胃肠炎暴发/聚集性疫情的毒株分子特征和遗传变异性，收集患者肛拭子，采用qPCR、RT-PCR分别进行诺如病毒检测与分型，并对部分样本进行全基因组测序。对序列进行系统发育分析、氨基酸序列比对、蛋白质理化性质预测，研究其分子特征及不同型别病毒的遗传变异性。结果共有14起诺如病毒疫情，共收集285份标本，其中76份诺如病毒阳性；包括9起GⅡ，2起GⅠ，3起GⅠ/GⅡ混合；成功分型8起疫情，GⅡ.17[P17]型疫情数最多。测序获得LW01(GⅠ.4[P4])、LW06(GⅡ.3[P12])、LW07(GⅡ.17[P17])毒株的全基因组序列，并建立这3种基因型数据集，其中GⅡ.17[P17]型病毒的易突变位点最多。3株毒株均未发现基因重组，均存在新的变异位点，多与氨基酸疏水性相关。本研究中，GⅡ.17[P17]是主要流行基因型，表现出高度遗传变异性。3种基因型毒株均存在氨基酸突变位点，需持续开展诺如病毒分子特征研究以监测其变异趋势，为诺如病毒疫情防控提供科学依据。
复制型慢病毒检测用HIV弱毒株的构建及生物学特性研究
房恩岳;常宇桐;何畦嘉;胡孔新;慢病毒载体因其在多种分裂和非分裂细胞中高效稳定表达的优势，已成为细胞和基因治疗领域的重要工具，但其在临床应用中可能因同源或非同源重组产生复制型慢病毒(Replication-competent lentivirus,RCL)，带来潜在安全性风险。本研究通过反向遗传学技术对HIV-1 NL4-3株进行改造，删除辅助蛋白基因(Vif、Vpr、Vpu和Nef)，并插入NanoLuc荧光报告基因，成功构建了遗传稳定的HIV弱毒株NL4-3-dA-NLuc。HIV-1 p24抗原检测、滴度测定及病毒基因组测序结果均显示病毒拯救成功。进一步研究结果表明，该弱毒株保留了母本病毒的CXCR4感染嗜性，但复制能力显著降低。在连续传5代后病毒基因组未突变，表现出良好遗传稳定性，且传代细胞可见明显细胞病变效应，可稳定检测到HIV-1 p24抗原及NanoLuc报告基因表达。RCL检测感染灵敏度验证实验显示，NL4-3-dA-NLuc株作为阳性对照病毒的RCL最低检测限为5TCID50。本研究为RCL检测方法的优化提供了一种遗传稳定且定量灵敏的阳性对照病毒，为基因治疗产品的安全性评估提供了重要技术支持，有望推动国内RCL检测技术的规范化和广泛应用。
基于甲病毒病毒样颗粒的mRNA递送技术研究
王鑫;罗鑫;潘晓玲;叶湘漓;李晓丹;mRNA疗法具有广泛应用于各种疾病防治的潜力，将mRNA安全、有效递送至靶细胞是mRNA疗法的核心技术。近年来，研究人员开发了一种基于病毒样颗粒（Virus-like particle, VLP）的mRNA递送技术。VLP是利用病毒结构蛋白识别常规mRNA而组装形成的一种与天然病毒结构类似的颗粒，兼具病毒载体靶向递送效率高和常规mRNA安全性好的优势。甲病毒属（Alphaviruses）是最常用的病毒载体之一，本研究利用甲病毒成员委内瑞拉马脑炎病毒（Venezuelan equine encephalitis virus, VEEV）载体，首次建立了一种基于甲病毒VLP的常规mRNA递送方法。结果表明在常规mRNA中引入VEEV基因组包装信号（Packaging signal, PS）序列，可使mRNA被VEEV结构蛋白识别，并组装形成VLP释放至细胞外，VLP感染可将mRNA递送至细胞内表达目的蛋白。通过检测PS在mRNA中的位置和数量、VEEV非结构蛋白反式表达等对VLP包装和目的蛋白表达的影响，为后续VLP优化提供重要基础。本研究建立的基于甲病毒VLP的mRNA递送平台为今后mRNA递送研究提供一种新策略。
荆门蜱虫病毒S3片段非编码区对转录调控和蛋白翻译的影响
冯秀伟;冯硕;郭亚青;李欣蓓;徐昊;牛国宇;朱禹静;荆门蜱虫病毒（Jingmen tick virus, JMTV）作为一种新发现的分节段正链RNA病毒，其非编码区（Untranslated regions, UTR）在病毒复制周期中可能发挥关键调控作用。为阐明JMTV S3片段5'UTR和3'UTR的分子调控机制，本研究以JMTV-ZYJ4毒株为研究对象，通过构建含有S3片段5'UTR或3'UTR的绿色荧光蛋白（EGFP）及荧光素酶（Luc）报告基因重组表达质粒，系统分析了UTR元件对病毒基因转录和翻译的调控特性。结果表明，在转录调控方面：JMTV S3片段的3'UTR显著增强报告基因mRNA的转录水平（较对照组提高1.6倍），而5'UTR则表现出轻微抑制作用（降至对照的0.74倍）；在翻译调控方面：5'UTR显著促进蛋白翻译效率（荧光素酶活性提升至对照的2.3倍，EGFP表达增强），而3'UTR则呈现轻微抑制作用（荧光素酶活性降至0.54倍，EGFP表达减弱）。双荧光素酶报告系统定量分析结果表明，上述转录和翻译调控结果均具有统计学显著性差异（P<0.05）。本研究首次揭示JMTV S3片段UTR存在双向调控功能：3'UTR通过促进转录，可能影响病毒mRNA的时序性表达，进而参与潜伏感染建立或免疫逃逸等生物学过程；5'UTR通过高效招募翻译起始复合体，为病毒早期感染提供蛋白合成支持。这些发现不仅为解析JMTV的致病机制提供了新视角，也为开发靶向UTR的抗病毒干预策略奠定了理论基础。
病原微生物实验室人员培训系统的构建与应用
吕涵潇;董婕;史海月;张曙霞;甄维;周为民;李杰;王涛;赵丰泽宽;仲松超;王衍海;病原微生物实验室在公共卫生、科学研究、防病治病等领域发挥重要作用，它的运行管理关乎国家安全。随着实验室工作的日益复杂化和专业化，对实验室人员的能力和素质要求日渐增高，人员培训则是保障人员能力的基础。结合当前病原微生物实验室人员培训的现状和现实需求，本文设计的病原微生物实验室人员培训系统构建策略，以期满足不同类型、不同层次实验室人员的培训需求，提升实验室人员的实操能力和运维水平，确保实验室工作安全、高效进行。
2019-2024年济南市儿童呼吸道合胞病毒感染的分子流行病学特征分析
孙嘉文;亓娜;赵宝添;丁小满;刘辉;吕燕;分析济南市2019-2024年儿童感染呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）的流行趋势和分子流行病学特点及RSV G基因序列的变异情况，为RSV引起的呼吸道感染的预防控制提供科学数据。2019年3月-2024年2月，在济南市某儿童医院每周采集0～14岁儿童流感样病例鼻咽拭子样本，采用多重荧光定量PCR技术进行多病原核酸检测，对符合测序标准的RSV阳性样本进行G基因片段测序。运用描述流行病学方法对采集的数据进行统计分析，使用Mega 11.0软件构建系统发育树，DNAstar软件进行一致性分析，NetNGlyc1.0、NetOGlyc-4.0在线软件进行糖基化位点预测。2019年3月-2024年2月RSV的检出率为7.08%(85/1200)；年龄分布上以幼儿（1～<3岁）年龄组最高（8.71%,37/425），各年龄组阳性率之间差异无统计学意义；在季节分布上冬季最高（10.67%,32/300）,RSV在不同监测年度及季节间的阳性率差异均有统计学意义。测序得到69株RSV G基因序列（A亚型30株，B亚型39株），A亚型均为ON1基因型，多数毒株发生H258Q和H266L突变（83.33%,25/30）;B亚型均为BA9基因型，均发生P262T、T288I、F297S和T310I突变（100%,39/39）。2019年3月-2024年2月，济南市RSV发病具有明显季节特征，ON1型和BA9型为RSV A、B亚型的流行株，本地株与参考株相比出现多个高频氨基酸突变位点，提示应加强RSV分子流行特征的持续动态监测。