目的 禽网状内皮组织增殖病毒（Reticuloendotheliosis virus, REV）是一种经过鸡胚垂直传播的免疫抑制性病毒，感染REV的雏鸡胎粪以及粪便中可持续排出病毒造成水平传播，即使在一些母源抗体阳性鸡群也可以介导水平传播，本研究的目的便是验证雏鸡胎粪中存在REV感染相关外泌体并介导形成水平传播和免疫逃逸。方法 本研究将REV野毒株IBD-C1605株接种鸡胚后从出壳雏鸡检测为REV阳性的雏鸡胎粪中提取外泌体，进行纳米颗粒追踪分析、电镜观察、基因组测序和蛋白质组分析。本研究将REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞，以验证其逃避抗体中和的能力。本研究将REV游离病毒或REV阳性雏鸡胎粪外泌体分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡，观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标。结果 本研究证实了REV阳性雏鸡胎粪外泌体中包含REV完整基因组成分和3种主要蛋白。REV阳性雏鸡胎粪外泌体经特异性REV抗体中和后接种DF-1细胞，证实在细胞上检出REV高效感染，说明REV阳性雏鸡胎粪外泌体可介导REV逃避抗体中和形成体外感染。将REV游离病毒分别接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡，观察不同时间的雏鸡体重增长、器官发育指数、血液、泄殖腔和免疫器官中REV的复制情况等指标，证实REV游离病毒接种母源抗体阴性雏鸡引起严重的体重增长迟缓、肝脏脾脏肿大，而接种母源抗体阳性雏鸡则因为中和作用而显著降低了对鸡的致病性。但REV阳性雏鸡胎粪外泌体按照上述操作接种REV母源抗体阳性雏鸡和阴性雏鸡后，两组鸡的相关致病指标无显著差异，证明母源抗体对外泌体介导的感染无法发挥有效抑制作用。结论 本研究解析了REV阳性胎粪外泌体并证实其可作为传染途径在体内外造成有效感染，其感染能力不受抗体的限制，推测胎粪外泌体是介导REV形成早期水平传播和突破抗体抑制的途径之一。
目的 阐明柯萨奇病毒A16(Coxsackievirus A16, CVA16)在跨宿主适应过程中毒力增强的分子基础，并构建从母株（P0株）到小鼠适应株（P5株）的表型与遗传演化框架，为解析其宿主适应性机制提供理论依据。方法 以临床分离的CVA16母株（P0株）为起始毒株，通过在ICR乳鼠体内连续传代构建小鼠适应性毒株，建立P0株至P5株的完整演化谱系。利用全基因组测序技术比较P0株与P5株的遗传变异差异，结合RD细胞感染实验与乳鼠攻毒实验，系统评估不同代次毒株的体外复制能力、体内致病性及靶器官组织病理学改变。通过病毒结合试验与内化试验，解析CVA16毒力增强的可能分子机制。结果 基因组比对分析明确了P0株与P5株间的变异特征，其中VP1的关键突变定位于病毒入侵相关功能区域。体内外表型验证显示，P5株相较于P0母株呈现显著增强的复制能力与致病性：在RD细胞中可诱导更高水平的病毒颗粒产生及病毒RNA复制；对乳鼠攻毒后，能引发快速体重下降、后肢麻痹等典型症状，且致死率达100%；在乳鼠骨骼肌、肺和脊髓中，病毒滴度显著升高，并造成更严重的组织炎性浸润与结构损伤。机制研究证实，P5株毒力升高主要与病毒内化效率及后续胞内复制能力的提升有关，而病毒与宿主细胞的初始结合能力无显著差异。结论 本研究揭示CVA16在小鼠适应过程中，其毒力增强是由多层次遗传变异驱动的结果，其中病毒进入效率和胞内复制能力的提升是关键调控因素。本研究为理解CVA16跨宿主适应机制及神经系统致病机理提供了试验证据，也为靶向病毒结构功能域的抗病毒药物研发及疫苗设计奠定了基础。
目的 近年来，柯萨奇病毒A组6型(CoxsackievirusA6, CVA6)成为国内手足口病(Hand, foot, and mouth disease, HFMD)的主要血清型，2013年起，中国CVA6流行基因型已由D2基因亚型演变成D3a基因亚型，本研究旨在分析这两种基因亚型在乳鼠体内致病力差异及潜在分子机制，为疾病防控与疫苗研发提供依据。方法 研究选取代表性的两株D2和四株D3a基因亚型CVA6毒株，以106半数组织培养细胞感染剂量(50%Tissue Culture Infectious Dose, TCID50)肌肉注射感染1日龄ICR乳鼠，观察六株病毒对小鼠的生存曲线、体重、临床评分，检测乳鼠脑组织病毒滴度，结合组织病理学与免疫组化的结果，分析P1编码区氨基酸序列并预测蛋白结构。结果 D2和D3a基因亚型CVA6在乳鼠脑组织的病毒滴度最高分别为103.875 TCID50和102.25TCID50，存在显著统计学差异(P<0.05);233/HeB/CHN/2011株(D2基因亚型)感染组乳鼠脑组织出现神经元变性坏死、尼氏体丢失及明显炎性反应，同时免疫组化检测显示VP2抗原阳性；26/YC/CHN/2023株(D3a基因亚型)感染组乳鼠脑组织中未见明显损伤，无抗原检出。氨基酸序列比对结果发现，两株病毒在VP2-172、VP3-49和VP1-242等关键位点存在异亮氨酸(I)/缬氨酸(V)替换；单点氨基酸替换后预测其蛋白结构，结果显示，VP1-54和VP1-90位点氨基酸替换改变了VP1环区氢键网络与表面电荷分布，可能影响病毒衣壳结构稳定性、受体亲和力及致病力。结论 本研究结果显示CVA6不同基因亚型(D2与D3a)毒株间的神经致病力差异，并借助蛋白结构预测，筛选出影响病毒致病力的关键氨基酸位点，这些位点可作为CVA6分子流行病学监测与流行风险预警的重要位点。
<正>《病毒学报》是病毒学专业学术刊物,创刊于1985年,国际标准刊号:ISSN1000-8721,国内统一刊号:CN 11-1865/R,国内邮发代号:82-227,国外发行代号:BM6448。主管单位是中国科学技术协会,主办单位是中国微生物学会,承办单位是中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。《病毒学报》是中国精品科技期刊;中国科技核心期刊;北京大学基础医学核心期刊(中文期刊要日总览);武汉大学RCCSE(中国科学评价研究中心)中国核心学术期刊。
目的 干扰素具有广谱抗病毒活性，在临床上具有重要应用价值，开发犬长效干扰素是当前宠物抗病毒药物研究的重点。方法 本研究将犬IFN-α3成熟肽基因通过密码子优化后，构建到pPICZα A酵母表达载体上，上、下游分别引入Eco RⅠ和XhoⅠ限制性酶切位点，阳性质粒经SacⅠ限制酶线性化后，电转化X33酵母菌感受态细胞，在含有100 mg/mL Zecoin抗性YPD培养基上挑取规则菌落，经AXO1鉴定引物PCR鉴定为阳性，阳性菌株经甲醇诱导表达，SDS-PAGE表明犬IFN-α3成功在酵母中分泌表达，表达产物大小为20～25 kDa，表达量0.95 mg/mL。应用微量细胞病变抑制法测定发酵原液及纯化rCaIFN-α3在MDCK上对VSV-GFP的抗病毒活性，发酵原液活性为8×106 IU/mL，纯化产物活性为2×108 IU/mg。在F81上对CPV、RDPV、MEV复制均有抑制作用，抑制效果无显著差异(P>0.05)。结果 根据标准曲线计算血清中rCaIFN-α3血药浓度，在注射后40 h达到药物浓度峰值，为458.733 pg/mL，随后浓度缓慢下降。注射rCaIFN-α剂量4×105 IU/kg、4×106 IU/kg、4×107 IU/kg，对体温、白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数量没有影响，主要组织HE染色无明显病理变化。与辅助治疗组和RDPV对照组相比，4×105 IU/kg剂量注射rCaIFN-α3预防用药联合辅助治疗组和rCaIFN-α3联合辅助治疗组显著降低不同时间貉粪便中病毒载量，其中预防用药组效果最好，有效率80%，死亡率20%。结论综上所述，本研究建立了高效表达r CaIFN-α3的毕赤酵母表达系统，表达产物具有显著的抗病毒活性和良好的安全性，为开发长效重组犬IFN-α抗病毒制剂奠定了基础。
<正>《病毒学报》主编先生/女士:我们谨此郑重通知:依据文献计量学的原理和方法,经研究人员对相关文献的检索、统计和分析,以及学科专家评审,贵刊《病毒学报》入编《中文核心期刊要目总览》2023年版(即第10版)之基础医学类的核心期刊。《中文核心期刊要目总览》2023年版从2021年10月开始研究,研究工作由北京大学图书馆主持,共32个单位的148位专家和工作人员参加了本项研究工作,全国各地9473位学科专家参加了核心期刊表的评审工作。经过定量筛选和专家定性评审,从我国正在出版的中文期刊中评选出1987种核心期刊。
目的 本研究旨在系统评估2023-2024年西藏自治区健康儿童肠道病毒（Enterovirus,EV）的流行特征，为区域性病毒监测和疾病预防提供依据。方法 本研究纳入456份健康儿童粪便样本进行分析，通过实时荧光聚合酶链反应（Real-time reverse-transcription polymerase chain reaction,real-time RT-PCR）进行EV筛查，采用逆转录PCR对阳性样本扩增并测序VP1区，并对测定的序列进行分子分型及系统发育分析。结果 EV总体检出率为21.71%(99/456)，分属Enterovirus alphacoxsackie、Enterovirus betacoxsackie和Enterovirus coxsackiepol，其中Enterovirus betacoxsackie占比最高（54.55%,54/99）。主要检出血清型包括Coxsackievirus A4(CVA4,26/99,26.26%)、Coxsackievirus B5(CVB5,23/99,23.23%)、Coxsackievirus B4(CVB4,14/99,14.14%)、Coxsackievirus B2(CVB2,10/99,10.10%)及Poliovirus type 3(PV3,9/99,9.09%)等。EV感染集中于3–5岁儿童阶段，性别差异无统计学意义。地区分布结果表明，拉萨市检出的EV型别最为丰富，日喀则及阿里地区以CVA4和CVB组为主，山南市CVB5型比例最高。系统发育分析显示，西藏自治区分离的CVB2、CVB4和CVB5均属各自血清型的D基因型，与国内外流行株具有较近系统进化关系。结论 本研究揭示了2023–2024年西藏自治区EV的流行现状，结合2020-2022的既往监测数据，发现CVB组病毒活跃度有所抬升，亟需对该地区CVB组病毒进行持续性监测和应对性防控。
目的 通过甲基化测序结合生物信息学分析，筛选感染与未感染CSBV中蜂幼虫的差异表达基因，鉴定出中华蜜蜂20-蜕皮激素单氧酶基因（20-Ecdysone Monooxygenase, 20emo），探究其在中蜂感染中华蜜蜂囊状病毒（Chinese sacbrood virus, CSBV）过程中的功能，为CSBV防控提供潜在分子靶点。方法 采用实时荧光定量PCR(qPCR)验证20emo的表达变化，进行时空表达分析；利用RNAi干扰技术敲低20emo，检测CSBV复制及相关基因表达；对20emo基因序列及编码蛋白进行分析。结果 筛选出8个激素合成分泌相关差异基因，20emo在CSBV感染早期的表达被显著抑制；20emo在中蜂不同发育阶段表达差异显著，成蜂肠组织表达量最高；敲低20emo后CSBV复制受到抑制，IMD、TOLL免疫通路相关基因表达上调，营养应激相关基因表达也发生改变；20emo编码蛋白属细胞色素P450家族，与西方蜜蜂同源蛋白功能相近。结论 20emo可能通过调控中蜂激素平衡与免疫应答影响CSBV复制效率，为揭示蜜蜂生长发育基因的抗病毒作用提供新视角，也为CSBV防控提供了潜在分子靶点。