目的 探讨宿主因子衣被蛋白复合物亚基β2(Coatomer subunit beta 2, COPB2)在痘苗病毒（Vaccinia virus,VACV）复制过程中的作用及其作为广谱抗正痘病毒药物靶点的潜力。方法 整合分析现有高通量宿主因子筛选研究，挖掘高频出现的促病毒宿主因子，选定COPB2为研究对象，以已知宿主因子整合素亚基β1(Integrin subunit beta 1, ITGB1)为阳性对照。在HeLa和HEK-293T细胞中构建siRNA介导的基因敲低模型，通过CCK-8法评估细胞活性，利用噬斑形成实验检测子代病毒滴度，使用qPCR检测病毒基因组复制载量，并通过Western blot检测病毒早期与晚期蛋白表达水平。结果 成功构建基于siRNA的COPB2与ITGB1基因敲低模型。与对照组相比，敲低COPB2或ITGB1均可显著抑制VACV复制，表现为子代病毒滴度明显降低，病毒基因组复制载量下降以及病毒早期及晚期蛋白表达减少。结论 COPB2是促进VACV高效复制的重要宿主因子，初步推测其功能可能主要参与病毒生命周期的中晚期阶段，但其具体作用环节及分子机制仍有待进一步系统阐明。本研究提示，COPB2具有成为天花、猴痘等正痘病毒广谱宿主靶向抗病毒干预靶点的潜在价值。
<正>《病毒学报》是病毒学专业学术刊物,创刊于1985年,国际标准刊号:ISSN1000-8721,国内统一刊号:CN11-1865/R,国内邮发代号:82-227,国外发行代号:BM6448。主管单位是中国科学技术协会,主办单位是中国微生物学会,承办单位是中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所。《病毒学报》是中国精品科技期刊;中国科技核心期刊;北京大学基础医学核心期刊(中文期刊要目总览);武汉大学RCCSE(中国科学评价研究中心)中国核心学术期刊。刊载人与动物病毒、植物病毒、昆虫病毒、噬菌体、类病毒、朊病毒以及新病毒等的基础理论研究和应用研究的新成果、新进展。栏目有论著、研究快报、评述、综述、简讯等。
目的 为了建立裂谷热病毒(Rift Valley fever virus, RVFV)核蛋白双抗体夹心ELISA检测方法。方法 本研究以真核表达的RVFV核蛋白作为抗原，选用4株鼠源抗RVFV NP蛋白单克隆抗体(Monoclonal antibodies,mAbs)及其辣根过氧化酶(Horseradish peroxidase, HRP)标记抗体分别作为捕获抗体和检测抗体进行最佳抗体配对筛选。采用棋盘格滴定法优化反应条件，建立RVFV核蛋白双抗体夹心ELISA检测方法，并对其敏感性、特异性、重复性和模拟临床样本的检测进行评估。结果 结果显示，该方法对灭活RVFV的最低检测限为101.78 TCID50/mL，对真核表达核蛋白的最低检测限为25.6095 ng/mL。特异性试验结果显示，该检测方法仅能检测灭活RVFV样本，与埃博拉病毒(Ebola virus, EBOV)、发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)、新疆出血热病毒(Xinjiang hemorrhagic fever virus, XHFV)的NP蛋白以及鼠伤寒沙门菌(S. Typhimurium)的O抗原均无交叉反应。重复性试验结果显示，批内和批间变异系数均小于10%，表明该检测方法具有良好的重复性。模拟临床样本检测结果显示，该方法与金标准Real-time RT-PCR检测结果的符合率为100%，具有良好的临床应用潜力。结论 综上所述，本研究成功建立了一种灵敏、特异且稳定的RVFV核蛋白双抗体夹心ELISA检测方法，为裂谷热病毒的早期检测与流行病学监测提供了可靠的技术支持。
目的 痘苗病毒N1L基因在抑制宿主凋亡与天然免疫中发挥关键作用，但其在痘苗病毒天坛株(Vaccinia virus Tiantan strain, VTT)中的具体功能尚未明确。本研究旨在阐明N1L缺失对VTT复制、扩散及体内致病性的影响。方法 利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建N1L缺失的重组病毒VTT-ΔN1L。通过细胞模型(HeLa、Vero、BHK-21)分析病毒复制动力学与噬斑形成能力；采用BALB/c小鼠滴鼻感染模型，以不同剂量(106 PFU、107 PFU)评价病毒毒力，监测体重变化与存活率。结果 在HeLa、Vero和BHK-21细胞中，VTT-ΔN1L的复制效率与野生型VTT无显著差异(P > 0.05)，但其形成的噬斑面积在感染后期(48 h)显著减小(P<0.0001)，表明病毒细胞间扩散能力受限。动物实验显示，VTT-ΔN1L感染组小鼠体重下降幅度显著低于VTT组(107 PFU组峰值下降16%vs 25%)，存活率提高(100%vs 83%)，但体重最低点出现时间较VTT组提前2-3d。结论 N1L缺失虽不影响VTT在细胞中的复制，但通过限制病毒扩散和解除其免疫抑制功能，显著降低病毒在小鼠体内的毒力，同时可能引起宿主早期免疫反应增强。该研究揭示了N1L在VTT致病过程中的关键调控作用，为基于VTT的减毒疫苗设计与抗正痘病毒策略提供了理论依据。
目的 基于实时震荡诱导转化（Real-time quaking induced conversion, RT-QuIC）体系评价白藜芦醇苯甲酰肼衍生物对朊蛋白（Prion protein,PrP）聚集的抑制作用，并分析其构效关系。方法 以重组仓鼠PrP90-231为底物、263K感染仓鼠脑匀浆为种子建立RT-QuIC反应体系并验证其稳定性。在优化浓度条件下比较衍生物不同取代基团的抑制效应，采用曲线下面积（Area Under Curve,AUC）归一化指标进行量化分析；选取代表性高、低活性化合物进行分子对接以辅助解释结合机制。结果 RT-QuIC体系重复性良好，适用于化合物筛选；衍生物不同取代基团及位点显著影响抑制效应，其中对位氟取代衍生物抑制最强，而吡啶环取代衍生物整体活性较弱；对接结果显示高活性衍生物具有更高的结合能及多样的相互作用形式。结论 白藜芦醇苯甲酰肼衍生物在RT-QuIC体系中呈现出明确的构效关系，其中对位氟取代为后续结构优化的优势方向。
目的 为深入探究Argonaute-2(AGO2)蛋白的生物学功能及其在抗病毒免疫中的作用，本研究通过构建Ago2基因敲除的小鼠神经母细胞瘤（Neuro 2a, N2a）细胞系（简称AKO细胞系）来验证其对弹状病毒科相关病毒复制的影响。方法通过设计靶向Ago2基因的sgRNA并将其连接至pMD18T-U6质粒中，随后将该质粒与pMJ920-Cas9-eGFP质粒共转染至小鼠神经母细胞瘤（Neuro 2a, N2a）中，培养36h后通过流式细胞筛选获得单克隆细胞，并利用分子生物学方法验证Ago2的有效敲除及敲除AGO2对细胞增殖与活力的影响。随后通过免疫印迹、RT-qPCR、病毒滴度测定验证敲除AGO2对狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）和水疱口炎病毒（Vesicular stomatitis virus, VSV）复制的影响。结果 成功获得了一株AKO细胞系，该细胞系在细胞增殖与活力方面与野生型N2a细胞无显著差异。功能实验表明，敲除AGO2能够显著促进RABV核蛋白的蛋白、mRNA以及子代病毒滴度水平和VSV的子代病毒滴度水平。结论 本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和结合流式细胞分选相结合的方法，成功实现了在N2a细胞Ago2基因的快速、特异性敲除。通过功能实验表明，敲除AGO2能够促进RABV及VSV的复制。为阐明AGO2蛋白在细胞生理及抗病毒天然免疫中的功能提供了有效工具，也为基于RABV/VSV载体的重组病毒疫苗研发提供了实验依据。
目的 引起手足口病(Hand, foot, and mouth disease, HFMD)的肠道病毒(Enteroviruses)病原组成复杂多样，其中柯萨奇A组病毒(Coxsackievirus A group)的毒株分离鉴定和感染致病特征对于HFMD的研究和疫苗研制显得越来越重要，因此，本研究旨在阐明柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)的分离鉴定过程并对其生物学特征进行分析，为后续疫苗研制提供参考。方法 通过KMB17细胞分离CVA4病毒，同时利用PCR扩增CVA4 VP1基因序列以鉴定基因型别，在电镜下观察病毒颗粒形态，利用Western Blot(WB)和银染实验分析主要结构蛋白。在KMB17细胞上系统探究CVA4增殖动力学以及乳鼠体内的感染特征，最后结合中和抗体实验和ELISpot实验对CVA4病毒免疫原性进行分析。结果 本研究从手足口病患儿粪便样本中分离获得3株CVA4毒株，接种人二倍体细胞KMB17后，可观察到皱缩、变圆和肿胀等致细胞病变(Cytopathic effect, CPE)特征，主要结构蛋白基因VP1测序鉴定毒株均属CVA4病毒D2基因亚型。经KMB17细胞扩增培养，随后分析发现，透射电子显微镜下可观察到CVA4病毒呈现典型的二十面体的颗粒形状，以实心颗粒为主，病毒颗粒直径约为30nm。经WB和银染实验分析发现，扩增病毒纯化液中可见VP1、VP3的完整结构蛋白条带，并为特异性抗-CVA4血清所识别。以KMB17细胞为基质进行噬斑克隆纯化，我们筛选获得E-4、E-2和B-2克隆株，增殖动力学特征显示三株病毒均能够在MOI=0.05条件下实现较快增殖，并在96h以内达到增殖高峰，感染性滴度分别为107.5 CCID50/mL、105.75 CCID50/mL、107.75 CCID50/mL。通过颅内注射2000 CCID50/只病毒的方式感染2日龄乳鼠后，3株CVA4病毒株均能引起乳鼠麻痹症状，并在感染后3～5d全部死亡。初步免疫原分析结果提示，上述3株毒株经腹腔注射BALB/c小鼠，能诱导较好的体液免疫和细胞免疫应答，两次免疫后中和抗体几何平均滴度分别达到2622.2、1456.1、5045.1。结论 结合病毒增殖特征和免疫原性，本研究提示E-4和B-2在增殖特性和免疫原性方面的表现相对优于E-2，未来研究中可进一步探索其作为潜在疫苗候选株的可能性。
目的 探究呼吸道合胞病毒（Respiratory syncytial virus, RSV）感染患者血清中微小核糖核酸-140-5p(miR-140-5p)、JAK1、STAT1、磷酸化STAT1(p-STAT1)及炎症因子的表达特征，分析其与感染严重程度的相关性，评估各指标对RSV感染及病情分级的诊断价值，为RSV感染的病情评估提供潜在分子标志物。方法 选取2023年1月—2024年6月本院确诊的RSV感染患者85例（RSV感染组），其中轻症52例、重症33例，另选取同期健康体检者40例作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测血清miR-140-5p相对表达量，酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测血清JAK1、STAT1、p-STAT1蛋白及炎症因子IFN-γ、IL-6、TNF-α的浓度。分析各指标与感染严重程度的关联、miR-140-5p与其他指标的相关性，通过受试者工作特征（ROC）曲线评估各指标诊断RSV感染及区分轻症与重症的价值。结果RSV感染组血清miR-140-5p相对表达量显著低于正常对照组（P<0.001）,JAK1、STAT1、p-STAT1及IFN-γ、IL-6、TNF-α浓度显著高于正常对照组（P<0.001）；重症组miR-140-5p表达量显著低于轻症组（P<0.05），其余指标浓度显著高于轻症组（P<0.05）。相关性分析显示，miR-140-5p与JAK1(r=-0.643)、STAT1(r=-0.601)、pSTAT1(r=-0.627)及IFN-γ(r=-0.586)、IL-6(r=-0.554)、TNF-α(r=-0.539)均呈显著负相关（P<0.001）。ROC曲线分析显示，p-STAT1诊断RSV感染的AUC最大（0.953）,JAK1区分轻症与重症的AUC最大（0.928）；各指标联合检测诊断RSV感染及区分病情的AUC分别为0.986和0.967，显著优于单一指标（P<0.05）。结论 RSV感染患者血清miR-140-5p表达下调，JAK1/STAT1通路相关分子及炎症因子浓度升高，且与感染严重程度密切相关；联合检测上述指标可显著提升RSV感染诊断及病情分级的准确性，为临床病情评估提供可靠参考。
目的 分析2023–2024流行季桂林地区B型流感病毒（Influenza B virus, IBV）的血凝素（Hemagglutinin,HA）和神经氨酸酶（Neuraminidase, NA）分子进化特征。方法 对400例流感样病例进行核酸检测，扩增IBV阳性样的HA与NA基因并测序，使用MEGA、DNAStar等软件，构建系统发育树，对抗原变异位点、耐药突变及糖基化位点进行分析。结果 2023年10月-2024年10月，桂林地区IBV主要在2023年冬及2024年春季流行，在400份流感样病例中检出率为18%。基因扩增获得26株桂林IBV的HA和NA序列。系统发育分析显示，26株桂林IBV均属1A.3a.2分支（C.5.7亚分支），与当前疫苗株同源性较高。在HA蛋白的发现15处变异，其中位于主要抗原决定簇5处：E128G(120环)、R141G(150环)、D197E(190螺旋)、198(190螺旋)和199(190螺旋)。NA蛋白未发现与耐药基因相关的变异，未发现糖基化位点的增减。结论 本流行季桂林地区B型流感病毒HA蛋白关键抗原表位已发生少量变异，NA蛋白则相对保守。流行株虽与疫苗株同源性较高，但抗原位点的变异提示存在抗原漂移的潜在风险。应持续加强对B型流感病毒的分子监测，以早期预警抗原漂移、指导流感精准防控。