病毒学报

肠道病毒D68型流行基因型高灵敏通用型Real-time RT-PCR检测方法建立及应用

2023年河南省急性弛缓性麻痹病例中非脊髓灰质炎肠道病毒病原学及流行病学分析

2018-2023年新余地区手足口病流行特征及其CVA6型病毒分子特征研究

MPXV的流行动态、遗传演化分支及其公共卫生安全挑战

猴痘病毒对雌兔和雄兔致病差异研究

侵染宁波雪菜的芜菁花叶病毒和芸薹黄化病毒分子鉴定及全基因组序列分析

采用高通量测序及RT-PCR从宁波地区表现花叶、黄化的雪菜病株上鉴定到芜菁花叶病毒（turnip mosaic virus, TuMV）和芸薹黄化病毒（brassica yellows virus, BrYV）复合侵染。分别设计TuMV和BrYV特异性引物结合RACE技术扩增了2种病毒雪菜分离物的全基因组序列。序列分析表明TuMV-XC分离物与我国番红花上鉴定的TuMV-SAS1分离物（LC537534）核苷酸全基因组序列一致性最高，达97.4%，而BrYV-XC分离物与我国江苏油菜上鉴定的BrYV-lnc分离物（ON804808）核苷酸全基因组序列一致性最高，达97.9%。系统发育分析揭示TuMVXC分离物属于TuMV的World-B组成员，而BrYV-XC分离物可归为BrYV-B基因型成员。对宁波地区田间种植雪菜的RT-PCR检测表明TuMV和BrYV是侵染宁波地区雪菜的主要病毒种类。

PRRSV类NADC30毒株感染诱导机体免疫失衡的免疫学特征

本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）类NADC30毒株感染诱导机体免疫失衡的免疫学特征。通过PRRSV类NADC30毒株感染20日龄健康仔猪，结合病毒载量检测（RT-PCR/RT-qPCR）、中和抗体效价分析（ELISA）、细胞因子动态监测（RT-qPCR）及Th1/Th2分型检测（流式细胞术）等方法，系统评估了病毒感染后的免疫应答特征。结果显示，感染后病毒血症呈现双峰模式（14d和35d），中和抗体延迟至35d出现，42d达峰值后下降。促炎因子IL-1β在感染后第7d显著升高，TNF-α则在感染后第14d上调；抑炎因子（TGF-β、IL-10）在感染后第14d升高，并在感染后第28d达到峰值；免疫检查点分子CTLA-4在感染后第7d和第28d时表达量显著提高，LAG-3在感染后第14d检测到上调，随后表达量虽有下降但仍为上调。血液中Th1/Th2分型比例随着感染时长的变化在不同仔猪个体之间并不存在明显的一致性，但均具有明显的分化漂移现象。本试验揭示了PRRSV类NADC30毒株感染引起猪机体免疫失衡的免疫学特征，这种特征阻碍了PRRSV有效疫苗的研发。

基于“六全一关联”框架的病毒变异全景图构建与应用

病毒变异不断改变病原体特性，对疫苗、抗病毒药物及防控策略构成严峻挑战。尽管高通量测序及GISAID、GenBank等国际数据库提供了丰富数据，但现有研究仍局限于局部或单一变异特征的分析，缺乏跨时空、多维度的系统解析。为此，本文基于“六全一关联”框架构建了病毒变异全景图，通过整合基因组、变异位点、时空分布、变化趋势、临床信息与数据来源，实现对新冠病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒等多种病毒变异全貌的精准刻画，为疫苗研发、流行趋势预测与精准防控提供科学依据。该平台利用机器学习和大数据分析技术，实现多维信息高效关联。展望未来，全景图将借助移动互联网及实时数据传输，实现数据即时更新、自动预警与动态策略调整，进一步推动全球公共卫生防控与健康安全事业的发展。

山羊痘病毒锚蛋白ORF141.2对NF-κB信号通路的调控作用研究

痘病毒编码多种能够操控宿主先天免疫反应的蛋白。研究表明，鼠痘病毒编码的锚蛋白通过与Skp1互作抑制NF-κB通路。山羊痘病毒编码的锚蛋白ORF141.2与鼠痘病毒编码的锚蛋白存在类似的结构，其对NF-κB信号通路的调控作用还未见报道。为了明确ORF141.2对NF-κB信号通路的调控作用，本研究采用双荧光素酶报告系统检测了ORF141.2对NF-κB转录活性的影响；通过Western bloting技术和间接免疫荧光试验检测了ORF141.2对NF-κB通路关键因子的影响及ORF141.2与Skp1的共定位情况；最后采用Co-IP技术验证了ORF141.2与Skp1是否互作。结果表明，锚蛋白ORF141.2可以抑制NF-κB的转录活性；锚蛋白ORF141.2不影响IKKα和IκBα的磷酸化，但阻止p-IκBα的降解和p65的入核；锚蛋白ORF141.2与Skp1共定位于细胞质中，存在互作关系。锚蛋白ORF141.2通过与Skp1互作调控p-IκBα的降解和p65的入核，从而调控NF-κB信号通路。

基于5’UTR基因的牛肠道病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种可快速、特异、高效检测牛肠道病毒(Bovine enterovirus,BEV)的实时荧光定量PCR检测方法，本研究根据Genbank数据库BEV流行毒株5’UTR保守基因序列设计合成特异性引物及探针，并以BEV阳性核酸5’UTR基因序列构建的标准质粒为模板，采用矩阵法对引物和探针浓度、退火温度进行优化及绘制标准曲线，同时进行灵敏性、重复性及特异性验证和临床样本检测。结果表明，该检测方法在重组质粒标准品模板浓度为4.05×10²～4.05×10⁹copies/μL范围内呈现良好的线性关系，相关系数R²为0.9978，线性方程斜率为3.4537，扩增效率为94.7%，最低检测限度为4.05×10²copies/μL，比常规RT-PCR检测方法灵敏度高100倍；组内和组间的变异系数均小于0.8%；与牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea mucosal disease virus,BVDV)、轮状病毒(Rotavirus,RV)、牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)和牛流行热病毒(Bovine ephemeral fever virus,BEFV)均无交叉反应。应用该检测方法对牛场采集的36份腹泻牛的粪便样品和24份肛拭子样品进行检测，检测阳性率分别为94.44%(34/36)和91.67%(22/24)。经试验验证表明，该检测方法具有较好的灵敏性、重复性及特异性，可应用于牛常规临床样本中BEV的鉴别诊断，为BEV的防控提供了有力的技术支持。

含P_RP_L启动子的原核高效表达载体的组建及其应用

我们组建了一个含P_RP_L自动子的原核高效表达载体,它同时含有cI调控基因、多酶切点和两个强的转录终止序列。带起始密码子ATG的外源基因可以插入启动子下游的多酶切点,表达非融合蛋白,产品可供临床使用。我们实验室已用它成功地表达了人γ干扰素、人白细胞介素-2和人肿瘤坏死因子等,表达量均占菌体总蛋白的20％以上。

鸡的J亚群白血病病毒的分离及部分序列比较

通过接种鸡胚成纤维细胞、聚合酶链式反应 (PCR)技术及特异性单抗的间接荧光抗体反应 (IFA) ,从某大型肉用型种鸡场的疑似J亚群白血病的病鸡中 ,以及 2 5个临床健康的商品代肉鸡群的 2群中 ,分离鉴定出J亚群禽白血病病毒 (ALV J)。在用抗ALV Jgp85单克隆抗体JE9的IFA中 ,来自病鸡群的两株病毒SD990 1和SD990 2呈强阳性反应 ,来自临床健康肉鸡群的YZ990 1和YZ990 2株呈弱阳性反应。对YZ990 1株和SD990 2株的PCR产物直接测序结果表明 ,这二个中国株的囊膜蛋白 gp85的氨基酸组成与原型株HPRS 10 3及美国分离株ADOL Hcl有 89%～ 93%的同源性 ,它们相互间的同源性是 92 %。其 3′端LTR区与原型株HPRS 10 3则有 95 %～ 97%的同源性 ,但中国的两株病毒在紧靠 3′端LTR的“E”成分中 ,出现了一个 139个碱基的缺失性突变 ,而代之以一个 11个碱基的插入序列。

在我国腹泻患儿中发现诺瓦克样病霉感染

诺瓦克病毒是引起无菌性急性胃肠炎爆发的重要病原。１９９０年１０月至１９９１年１月从河南省急性腹泻门诊患儿便样中发现了诺瓦克样病毒。经电镜观察，病毒直径约为２８ｎｍ，病毒壳似由有结构的亚单位组成，进一步用诺瓦克病毒特异的寡核苷酸引物做逆转录一聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），检定为阳性。由ＰＣＲ产物测得的核苷酸序列与诺瓦克病毒原型株相应序列比较，同源性为７２％。以上结果证实，在我国腹泻病人中有诺瓦克样病毒感染。这对我国病毒性胃肠炎流行的防治研究具有重要意义。

肠道病毒71型的RT-PCR诊断及基因特征

2002～2003年从上海市和重庆市手足口病患儿的疱液标本中分离到10株病毒,其中上海9株,重庆1株。利用两对分别针对EV71和Cox.A16病毒VP1区的特异性引物,用RT PCR方法对病毒进行初步鉴别。根据PCR所用引物及PCR扩增出的产物片段大小不同,可初步判定出EV71和Cox.A16病毒的血清型别。RT PCR结果提示,上海分离到的9株病毒中,有2株为EV71,其余7株病毒为Cox.A16;重庆分离到的1株病毒为EV71。10株病毒的RT PCR产物经序列测定和分析证实,PCR定型结果正确,说明PCR法具有很高的特异性,可作为EV71初步鉴定的首选方法。对所分离的3株EV71病毒进行VP1区编码基因全序列的测定和遗传学分析,通过同源性比较和构建系统发生树发现,此3株EV71病毒和中国大陆已发表的7株EV71病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26和CHN 87)全部属于C基因型,与该型代表株比较,同源性为89 3%～94 6%;与A、B基因型代表株比较,同源性为81 3%～84 0%,差异较大。在C基因型中,此3株EV71病毒和中国大陆先前分离的6株病毒(SHZH03、SHZH98、SH F1、SH F2、SH H25、SH H26)的同源性较高,在94 5%～100%范围内。在系统发生树上,这9株病毒形成一个较独立的分支。与CHN 87株的同源性在92 1%～93 6%之间。与已知的C1、C2、C3亚型代表株比较,同源

我国地方品种鸡分离到的一个禽白血病病毒新亚群的鉴定

为探明我国地方品种鸡群禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)的特点,通过接种DF-1细胞及细胞培养上清液p27抗原的检测,从芦花鸡中分离得到三株外源性ALV禽白血病病毒,分别是JS11C1、JS11C2和JS11C3,并对其进行亚群鉴定分析。用PCR方法扩增env基因测序,并与已知鸡源各亚群ALV的囊膜蛋白(gp85)作氨基酸同源性比较。这三株ALV的env基因的gp85大小为1 005bp,编码335个氨基酸;env基因的gp37大小为609bp,编码203个氨基酸。三个毒株之间gp85的同源性为91.9%～97.0%。与A、B、C、D和E五个经典亚群在GenBank中已发表的18个毒株的gp85的同源性仅在77.7%～84.6%间,显著低于鸡群中常见的A、B、E各亚群内的同源性范围(分别为88.2%～98.5%,91.6%～98.8%和97.9%～99.4%),而与J亚群参考株的同源性更是只有34.2%～36.5%。上述结果表明,芦花鸡分离到的三株病毒可能是不同于鸡源ALV已知6个亚群的一个新亚群,按国际上对ALV亚群分类的习惯,初步将其定名为K亚群。

新冠病毒SARS-CoV-2的感染机制研究进展

由新型冠状病毒(SARS-CoV-2)引起的冠状病毒病2019(COVID-19)作为一种新发传染病,已经蔓延到全世界的多个国家和地区,被WHO判定为全球大流行病(Pandemic disease),引发了严重的公共卫生安全问题。自SARS-CoV-2出现以来,病毒溯源和中间宿主等问题得到了民众的广泛关注,虽然只有约2%的感染者有野生动物接触史,但科学家普遍认为SARS-CoV-2是一种来自野生动物的病毒。病毒的跨种属传播十分困难,而且往往会引起新宿主的高病死率,但SARS-CoV-2被发现以来,表现出对人类机体已经有了很好的适应性,具有传播能力强和病死率较低的特性,这与之前发现的引起新发、突发传染病的大多数病毒有所不同。因此,本文对SARS-CoV-2的病原学,功能受体和基因组进化等方面的研究进展进行综述,以期为SARS-CoV-2的溯源提供新的视角。

新型冠状病毒肺炎的疫情趋势预测

2019年12月以来,湖北省武汉市部分医院陆续发现了多例不明原因肺炎病例,现已证实为新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19)。全国各地采取了前所未有的措施,大力开展疾病救治和防疫工作。本文收集中国国家卫生健康委员会公布的官方统计数据预测疫情走向。传统SEIR模型中仅考虑病例和处于潜伏期的感染者,病例具有传染性而潜伏者无传染性;事实上,新冠肺炎确诊患者在医院中隔离无法对外界易感人群造成感染,有研究表明处于潜伏期的感染者可能具有传染性。因此,本研究提出了改进的传染病传播模型—ISEIR,将患者分为未收治的发病患者(具有传染性)和已收治的确诊患者(不考虑传染性),并考虑处于潜伏期的感染者具有传染性;以历史数据动态拟合模型参数,来摆脱固定参数的局限性。在数据预处理中根据每日有效再生数的概率分布将2020年2月12至14日这三天的临床诊断数据进行预处理,摊入到前期数据中。疫情分成全国(湖北省外)和湖北省两大区域分别进行探讨,通过新模型ISEIR预测今后疫情的进一步发展,并计算每日的有效再生数变化。结果显示,湖北省的有效再生数从3.108逐渐降低,2020年4月19日所有患者将全部治愈出院,累计确诊患者为66 487人;全国(湖北省外)的初始有效再生数为1.929,小于湖北省,2020年3月26日所有患者全部治愈,累计确诊患者13 270人。从结果中可以发现,在严格的防控措施下疫情得到了有效抑制,验证了目前防控措施的有效性,但仍需要防止复工潮引起的疫情反弹。

新型冠状病毒（2019-nCoV）治疗药物体内外研究及药物研发进展

2019年12月以来,中国湖北省武汉市陆续发现了多例新型冠状病毒感染的肺炎患者,随着疫情的蔓延,中国其他地区及境外也相继发现了此类病例。2020年1月12日,世界卫生组织(WHO)将该新病毒暂定命名为2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。2019-nCoV是继SARS冠状病毒(SARS-CoV)、MERS冠状病毒(MERS-CoV)之后发现的一种具有高传染性且可以引起重症呼吸道疾病的新型病毒,临床尚无特效治疗药物。本文结合临床治疗、体内外的研究对相关指南推荐的治疗药物及药物研发进展进行综述,旨在为2019-nCoV病毒感染的肺炎患者的临床治疗提供借鉴。

2019新型冠状病毒的研究进展

自2019年12月以来,新型冠状病毒SARS-CoV-2引发的肺炎疫情在中国武汉暴发,随后疫情迅速蔓延,扩散至中国其它各省市。新型冠状病毒属于β冠状病毒属,与SARS-CoV和MERS-CoV近缘但有较大区别,尤其是刺突蛋白(Spike,S),根据序列相似性推断可能来源于蝙蝠,使用与SARS-CoV相同的血管紧张素转化酶Ⅱ(Angiotensin-converting enzyme Ⅱ,ACE2)受体进入细胞,以飞沫和接触传播为主要传播途径,缺乏有效药物治疗和疫苗是疫情防控的挑战。

埃博拉病毒侵染细胞机制的研究进展

埃博拉病毒能在人类和非人灵长类中引起严重的埃博拉出血热,病死率可高达90%,并且目前还没有针对埃博拉病毒有效的疫苗或者是治疗手段。面对埃博拉病毒带来的挑战,针对埃博拉病毒的相关研究已经成为病毒学的热点问题。其中,关于埃博拉病毒侵染细胞机制的科学研究对于开发病毒疫苗以及新型治疗药物有非常关键的作用。因此,本综述拟就埃博拉病毒侵染细胞机制方面的研究进展进行总结。